作者：仝會娟，張強(qiáng)，康琛，李曼玲

【摘要】 目的 建立木蝴蝶中黃芩素和白楊素的含量測定方法，為木蝴蝶的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供參考。方法 回流提取法獲得供試品溶液，高效液相色譜法測定其含量。色譜條件：Kromasil-C18(5 μm，250 mm×4.6 mm)；流動相：甲醇-乙腈-水-冰醋酸(25∶25∶50∶0.2)；流速：1 mL/min；檢測波長：275 nm；柱溫：室溫。結(jié)果 黃芩素和白楊素二者分離度和線性關(guān)系良好；RSD分別為1.53%和1.35%，表明重復(fù)性良好；回收率平均值分別為101.7%和103.0%，RSD分別為1.85%和1.59%，本方法回收率良好。結(jié)論 本方法簡單可行，重復(fù)性好，能夠?yàn)槟竞|(zhì)量控制提供參考數(shù)據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 木蝴蝶；黃芩素；白楊素；高效液相色譜法；含量測定

Abstract：Objective To establish a HPLC method of determining chrysin and baicalein in Senmen Oroxyli. Method The contents of chrysin and baicalein were determined by HPLC. The chromatographic conditions were：Kromasil-C18 column (5 μm， 250 mm×4.6 mm)， with methanol-acetonitrile-water-glacial acetic acid (25∶25∶50∶0.2) as the mobile phase， at the flow rate of 1 mL/min， the detecting wavelength at 275 nm and at the room temperature. Results The contents of baicalein and chrysin could be detected by this HPLC method， and got good separation and good linear relationship. RSD were 1.53% and 1.35%， indicating good repeatability， recovery RSD were 1.85% and 1.59%， indicating a good recovery. Conclusion The method is simple， feasible and repeatable， and can be provide reference for quality control of Senmen Oroxyli.

Key words：Senmen Oroxyli；chrysin；baicalein；HPLC；content determination 木蝴蝶Senmen Oroxyli為紫葳科植物木蝴蝶Oxoylum indicum(L.) Vent.的干燥成熟種子。自1963年版《中華人民共和國藥典》就開始收載。木蝴蝶味苦、甘，性涼，入肺、肝、胃經(jīng)，有清肺利咽止咳、舒肝和胃之功效，主治肺熱咳嗽、喉痹、音啞、肝胃氣痛、瘡口不斂。藥理研究表明，木蝴蝶有抗炎、抗誘變、抗菌、抗癌及止咳作用。木蝴蝶的化學(xué)成分主要為黃酮及其苷類，還含有對羥基苯乙醇類、紫檀堿類化合物，并且從中發(fā)現(xiàn)揮發(fā)油類物質(zhì)。到目前為止，對木蝴蝶的質(zhì)量控制方面大多只有對黃芩苷的含量測定。本試驗(yàn)采用高效液相色譜(HPLC)法，同時對其中的白楊素和黃芩素進(jìn)行了含量測定，以期對木蝴蝶的研究提供參考。

1 儀器與試藥

HP1100 HPLC儀：G1314A紫外檢測器，G1310A單泵，G1314A手動進(jìn)樣器，G1316A柱溫箱，G1322A在線形脫氣機(jī)，Agilent Chem-station色譜工作站；KQ-100型超聲清洗器。

黃芩素(批號0732-9604)和白楊素對照品(批號110713- 200690)均購自中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用。甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil-C18(5 μm，250 mm×4.6 mm)；流動相： 甲醇-乙腈-水-冰醋酸(25∶25∶50∶0.2)；流速：1 mL/min；檢測波長：275 nm；柱溫：室溫。色譜圖見圖1。

2.2 供試品溶液的制備

取本品粉末0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙酸乙酯50 mL，稱定重量，加熱回流2 h，過濾，濾液蒸干，加甲醇定容至5 mL容量瓶中，過0.45 μm濾膜，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取黃芩素和白楊素對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.094 mg黃芩素和0.080 4 mg白楊素的溶液，即得對照品溶液。

2.4 線性關(guān)系的考察

精密吸取對照品溶液(mg/mL)5、10、15、20、25 μL，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，分別以二者含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程得到：Y＝5E＋12X－116 139，r2＝0.999 9，表明黃芩素在0.47～2.35 μg范圍內(nèi)呈線性關(guān)系；Y＝5E＋12X－74 680，r2＝0.999 7，表明白楊素在0.402～2.010 μg范圍內(nèi)呈線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣５次，計算其峰面積積分值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果測得黃芩素和白楊素峰面積RSD分別為0.64%和0.71%，表明精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品5份進(jìn)行測定，計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果測得黃芩素和白楊素含量的RSD分別為1.53%和1.35%，表明重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按照含量測定項(xiàng)下進(jìn)行，對同一批樣品進(jìn)行了0、1、2、4、8、24 h測定，RSD分別為0.65%和0.68%。結(jié)果表明，其在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

采用加樣回收法。精密稱定已知含量的木蝴蝶粉末，分別添加黃芩素和白楊素對照品，按上述方法進(jìn)行測定，結(jié)果其回收率平均值分別為101.7%和103.0%，RSD分別為1.85%和1.59%(見表1、表2)。結(jié)果表明樣品回收率良好。表1 黃芩素加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（略）表2 白楊素加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（略）

2.9 樣品含量測定

取15個批號的樣品，按照供試品溶液制備方法制備供試液，按上述色譜條件測定樣品中黃芩素和白楊素的含量。結(jié)果見表3。表3 15批樣品中黃芩素、白楊素含量測定結(jié)果（略）

3 討論

本試驗(yàn)中，我們對有報道的流動相比例，即甲醇-乙腈-水-冰醋酸(30∶20∶50∶0.2)[1]進(jìn)行了預(yù)實(shí)驗(yàn)，但發(fā)現(xiàn)二者的保留時間相對較長，所以適當(dāng)?shù)剡M(jìn)行了流動相的比例調(diào)整，即正文中所用到的比例，結(jié)果發(fā)現(xiàn)后者對二者的保留時間相對較為合適，故我們將調(diào)整過后的流動相列入正文。

從結(jié)果來看，本試驗(yàn)中所測的2種成分的含量規(guī)律性不強(qiáng)，也可以從另一方面說明僅用二者的含量來對木蝴蝶的質(zhì)量進(jìn)行控制是不合適的，應(yīng)該結(jié)合其他成分尤其是特征性成分來對其進(jìn)行質(zhì)量控制。但本試驗(yàn)中的供試品溶液制備及測定方法，都是經(jīng)過一系列的方法學(xué)考察證明其簡單易行、精密度高、分離效果好、穩(wěn)定性好，可為木蝴蝶的質(zhì)量研究提供參考依據(jù)，同時也為其他中藥中含有該2種或者其中1種成分進(jìn)行含量測定提供參考。