【摘要】 目的建立活血注射液中黃芪藥材指紋圖譜的標準。方法Beckman 高效液相色譜儀(168型二極管陣列檢測器)，PRONTOSIL C18 柱 (250 mm×4.6 mm，5μm);流動相為乙腈和水，梯度洗脫，檢測波長265 nm，流速1 ml·min-1。結果測定了10個不同產地的黃芪樣品，共獲得10個共有峰，其中7號峰為芒柄花苷，并將其作為參照峰;對不同產地黃芪藥材的指紋圖譜相似度進行比較，均在0.90以上。結論該方法可以用于活血注射液中黃芪藥材的質量控制。

【關鍵詞】 活血注射液; 黃芪; 指紋圖譜; 質量控制

活血注射液為天津中醫藥大學第一附屬醫院研制的中藥注射液，主治急性缺血性腦血管病。為了更好的控制活血注射液質量，我們對其君藥——黃芪中有效成分(黃酮類成分)進行了指紋圖譜的研究。此外，通過對不同產地黃芪藥材進行指紋圖譜比較，以期為篩選活血注射液中黃芪主產地提供依據。

1 儀器與試藥

Beckman 高效液相色譜儀(125型高壓輸液泵，168型二極管陣列檢測器)。乙腈(色譜純);重蒸餾水(自制);其它試劑均為分析純。芒柄花苷對照品(購自克羅瑪公司)。不同產地黃芪藥材均來源于豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge. var. mongholicus (Bge.) Hsiao的干燥根(黃芪藥材具體產地見表1)。表1 不同產地黃芪藥材

2 方法與結果

2.1 黃芪藥材指紋圖譜方法的建立[1，2]

2.1.1 色譜條件PRONTOSIL C18柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為(A)10%乙腈-(B)90%乙腈。梯度洗脫程序見表2。柱溫:30℃，流速：1ml·min-1，進樣量：20μl，檢測波長：265 nm。表2 梯度洗脫條件表

2.1.2 對照品溶液的制備精密稱取芒柄花苷對照品，用適量甲醇使溶解，制成濃度為0.2 mg·ml-1的對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備稱取黃芪粗粉2.0 g，精密稱定，加入甲醇50 ml，索氏提取4h，濾液回收溶劑，水浴蒸干，殘渣加熱水20 ml使溶解，用水飽和正丁醇提取3次，30 ml/次，合并正丁醇液，用氨試液提取2次，30 ml/次，棄去氨試液，將正丁醇液水浴蒸干，殘渣用甲醇溶解并定容至5 ml，0.45 μm微孔濾膜過濾，取續濾液備用。

2.1.4 樣品測定精密吸取供試品溶液 20 μl，注入液相色譜儀，按“2.1.1”項中色譜條件測定，記錄 70 min 色譜圖。以芒柄花苷的色譜峰(s)的保留時間和峰面積為 1，計算其他各峰的相對保留時間和相對峰面積比值。

2.2 黃芪藥材指紋圖譜通過10個不同產地的黃芪樣品指紋圖譜的比較，生成了活血注射液中黃芪藥材的標準指紋圖譜，共獲得10個共有色譜峰。其中S(7)峰為芒柄花苷，并將其作為參照峰。10批黃芪藥材指紋圖譜疊加圖見圖1。生成的對照指紋圖譜見圖2。圖1 10批黃芪藥材指紋圖譜疊加圖圖2 生成的黃芪藥材對照指紋圖譜(S：芒柄花苷)

2.3 相似度的計算采用中國藥典委員會出版的“中藥色譜指紋圖譜相似度評價軟件”(版本2004A)進行相似度計算，各產地黃芪指紋圖譜與對照指紋圖譜比較。結果見表3。結果表明，各批藥材的相似度均在0.90以上。

3 討論

本實驗分別對乙腈-水、甲醇-水不同的梯度洗脫條件進行摸索，通過對色譜峰的數目和分離效果等因素進行綜合考察，最后得到一個較好的梯度洗脫條件。在此條件下色譜峰數目適中，分離效果較佳。

本實驗對黃芪樣品在200～400 nm的波長范圍內進行波長的選擇，芒柄花苷的最大吸收波長為250nm，但在該波長下其他色譜峰的含量較低，色譜峰的數目較少。通過對不同波長的選擇發現，在265 nm檢測時，可兼顧色譜峰數、分離度、并且避免了圖譜中某一成分過高，其他成分特征不明顯的情況，所以選擇265 nm作為檢測波長。表3 不同產地黃芪藥材的相似度《中國藥典》規定黃芪有兩個品種，分別為豆科植物蒙古黃芪和膜莢黃芪的干燥根。為了保證藥材質量的穩定，根據前期的調研情況，我們固定了黃芪的品種，即豆科植物蒙古黃芪的干燥根。