【摘要】 目的優選白疕消軟膏中的藥材提取工藝。方法以銀屑病小鼠模型實驗結果為指標，采用L9（34）正交實驗法，對其關鍵步驟如加水量、煎煮時間、煎煮次數、醇沉時加醇量等條件進行優選。結果煎煮次數對小鼠鼠尾鱗片表皮顆粒層生成有顯著性影響（P＜0.05）。結論最佳工藝為加藥材量8倍的水煎煮3次，1.5 h/次，濃縮液加等量乙醇使沉淀。

【關鍵詞】 白疕消軟膏 正交實驗 銀屑病小鼠模型 提取工藝

白疕消軟膏為中藥外用制劑，具有清熱解毒、活血化淤、疏風通絡功效，用于白疕血熱、血淤證（尋常性銀屑病）。其中的大黃等藥材是通過銀屑病抗體搭橋角朊/單一核白細胞粘連實驗篩選出的抗銀屑病中草藥，因在進行抗銀屑病中草藥試驗篩選時各實驗藥液的制備均采用的是水提醇沉法，故本制劑中對大黃等藥材提取也采用同一方法。本文小鼠銀屑病模型實驗結果為指標，對影響水提醇沉的主要因素如加水量、煎煮時間、煎煮次數、醇沉時加醇量，進行正交實驗優選，為合理篩選大黃等藥材的提取工藝提供科學依據。

1 儀器與試藥

顯微鏡（日本奧林巴斯BX51，帶JVC攝像頭及圖像采集處理系統）。哈西奈德溶液（唐山集川藥業利康制藥有限公司生產，批號050501），0.9%氯化鈉注射液（生理鹽水，武漢濱湖雙鶴藥業有限責任公司生產，250 ml/瓶，批號060113306）。

2 方法與結果

2.1 正交實驗設計 以影響提取的幾個主要因素如煎煮時間、煎煮次數、加水量、醇沉時加醇量為考察因素，每個因素設立3個水平，因素水平安排見表1表1 因素水平

2.2 樣品的制備 按5倍處方量稱取大黃等藥材，共9份，分別按表2的實驗條件煎煮，過濾，減壓濃縮至適量，加乙醇使沉淀，過濾，濾液減壓回收乙醇，調整全量至每毫升相當于生藥2 g，即得。表2 正交實驗結果與分析

2.3 銀屑病小鼠模型實驗［1～5］

2.3.1 動物 昆明種小鼠66只，♂，體質量（27.2±2.7）g，普通級，由湖北省實驗動物中心提供。

2.3.2 方法 取昆明種小鼠，常規飼料喂養，隨機分成11組，每組6只，實驗組用正交設計下的9份樣品，陰性對照組用生理鹽水，陽性對照組用哈西奈德溶液，在每只小鼠尾部均勻涂抹（約0.5 ml），2次/d，連續15 d，次日處死小鼠，取距離根部約0.5～1.5 cm處尾部皮膚，10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，HE染色，在光學顯微鏡下觀察每個小鼠的尾部鱗片（見圖1）。凡兩個毛囊口之間的鱗片表皮有排列成行的顆粒層者，稱為有顆粒層的鱗片，計數每100個鱗片中有顆粒層的鱗片數，對各組數據進行比較，并作統計學處理。結果見表3。

2.4 方差分析 將正交實驗結果用方差分析。結果見表4。

3 討論

3.1 最佳提取條件的確定 正交實驗結果經直觀分析（見表2）可以看出，對小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成的促進作用最強提取條件為：A2B3C1D2。正交實驗結果方差分析（見表3）可以看出，對于小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成的促進作用，因素B均有顯著性影響（P＜0.05），因素A無顯著性影響。正交實驗結果極差分析表明，4個因素對小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成的促進作用的影響順序均為B＞D＞C＞A。根據上述正交實驗結果的分析，結合生產經驗，綜合考慮，將最佳提取條件確定為A2B3C1D2，即加藥材的8倍量水煎煮3次，1.5 h/次，煎煮液濃縮至適量后加等量乙醇使沉淀。 表3 對小鼠鼠尾鱗片表皮顆粒層生成的影響1與陰性對照組比較，P2與陽性對照組比較；n=6表4 方差分析

3.2 動物實驗評價 在表皮層中，角質層增厚，其間有排列成層的角化不全細胞，層與層之間充滿空氣，使鱗屑顯為白色。在靜止期病變，表皮角化過度或角化不全明顯。在角化不全的部位下方，顆粒層的細胞很少或完全消失。銀屑病的基本病理特點是表皮細胞增殖過快和角化不全，一種藥物如能抑制表皮細胞的增生，或者改善角化不全(促進顆粒層形成)者，就具有治療銀屑病的藥理作用［1，2］。正常情況下小鼠尾部鱗片的表皮膠質層角朊細胞保留有細胞核，而顆粒層顆粒細胞缺失，僅在毛囊處有少量的顆粒細胞，表皮較薄，其天然的角化形式與人類銀屑病表皮相似，故可模擬該病角化不全的特點，Jarrett和Spearman等利用它作為實驗模型，評價藥物促進顆粒層形成的作用［4］，很多學者在實驗中證明治療銀屑病臨床有效的中藥普遍具有促進小鼠尾鱗片表皮顆粒層形成作用［5］。本實驗中利用這種動物模型對正交實驗的各組藥液對小鼠尾部鱗片表皮的顆粒層形成作用進行評價，實驗結果顯示，促進顆粒層的形成作用，與陰性對照組比較作用較強（除實驗組1，4外，均有顯著性差異，P＜0.01)，但與陽性對照組比較則作用較弱（除實驗組6，均有顯著性差異，P＜0.05或P＜0.01)。動物表明實驗組6促進小鼠尾鱗片表皮顆粒層形成作用最強，其作用與哈西奈德溶液陽性對照組無顯著性差異（P＞0.05），與生理鹽水陰性對照組有顯著性差異（P＜0.01）。

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