【摘要】 目的準(zhǔn)確地鑒別傘形科果實類藥材。方法應(yīng)用聚丙稀酰胺電泳技術(shù)，對3種外形相似的果實類藥材進行了可溶性蛋白質(zhì)的電泳分析。結(jié)果電泳圖譜清楚地顯示出各樣品的特征帶，從而能準(zhǔn)確區(qū)別各種藥材。結(jié)論該方法操作簡便，重復(fù)性好，各樣品間可比性強，能起到準(zhǔn)確鑒別藥材的目的。

【關(guān)鍵詞】 傘形科 聚丙烯酰胺 蛋白電泳

Abstract:ObjectiveTo identify Umbelliferous fructification herbs.MethodsThe Gel-electrophoresis technology was used to analyze the umbeelliferous herbs. ResultsThere are differences on grades，regions and quantities among patterns of Trechyspermum ammi L.Cuminvm cyminvm L. and Cvminvm vernum L. . ConclusionThe method of Gel-electrophoresis is easy and effective for identification of umbelliferous fructification herbs.

Key words:Trachyspermum ammi L.; Cuminvm cyminvm L.; Polypropylene acyl amic ; Albumen electrophoresis.

傘形科藥材的果實是雙懸果，外形極相似且小，肉眼難以識別，組織結(jié)構(gòu)也極相似。為了鑒別真?zhèn)危ＷC臨床用藥的安全有效，本實驗運用聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)，對傘形科3種果實類藥材進行可溶性蛋白質(zhì)的電泳分析。現(xiàn)報道如下。

1 器材

阿育魏實及孜然與野孜然均由維吾爾醫(yī)醫(yī)院鑒定并提供（見表1）。表1 樣品來源（略）

1.1 儀器

DYY-6B型穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀；真空干燥器；DYCz-28A型電泳槽；800型離心沉淀器；SBZ200型超聲洗脫儀；WD-9405A型脫色搖床；微量進樣器。

1.2 試劑丙烯酰胺（Acr）、甲叉雙丙烯酰胺(Bis)、三羧甲基氨基甲烷（Tris）、四甲基乙二胺（TEMED）、鹽酸、過硫酸胺、甘胺酸、溴酚藍、考馬斯亮藍R250、甲醇、醋酸。

1.3 試劑配制［1］分離膠緩沖液、分離膠貯液、過硫酸銨溶液、濃縮膠緩沖液、四甲基乙二胺溶液、電極緩沖液、溴酚藍指示液、染色液、脫色液。

調(diào)整分離膠使T=67.74%，C=2.875%。

2 方法

2.1 樣品制備［1，2］稱取阿育魏實及孜然與野孜然各0.5 g，加入稀釋4倍的濃縮膠緩沖液，充分研磨成勻漿，超聲提取10 min（37℃，功率100%）；離心20 min（3 500 r/min），取上清液供點樣用。

2.2 電泳操作安裝好膠板，于上下電泳槽中注入電極緩沖液；用微量進樣器每孔進樣20 μl；再加10 μl的溴酚藍指示跟蹤，電泳開始時，維持電流13 mA，待樣品進入分離膠后，電流加大到25 mA，整個電泳過程維持電流強度不變，待指示劑行至末端1 cm時，即可停止電泳。

2.3 染色與脫色小心取下膠板，放入0.2%考馬斯亮藍R250染色液中，在37℃恒溫下染色1 h，再用含20%甲醇和7%醋酸的脫色液，在37℃恒溫脫色，不斷更換脫色液直至背景為無色。

3 結(jié)果

依照樣品譜帶的Rf值、形態(tài)、著色深淺繪制譜圖（見圖1）。

根據(jù)樣品譜帶的形狀和著色程度將譜帶分為5級，按譜帶泳動速度快慢將電泳圖譜分為：A區(qū)（Rf<0.36）、B區(qū)（Rf<0.69）、C區(qū)（Rf≥0.69）。見表2。表2 傘形科3種維藥材蛋白電泳譜帶分級（略）

由圖譜可見同科植物的果實顯示出一些相似的譜帶（如A1，B2），同時因為種的不同，各種間的譜帶區(qū)也很明顯（如阿育魏實和野孜然在B區(qū)和C區(qū)都沒有特征譜帶，而孜然在B區(qū)和C區(qū)都有一條特征譜帶），而且其在譜帶的級別、分布區(qū)域及數(shù)量上均有明顯的區(qū)別，總之各種間譜帶特征明顯，可比性強（經(jīng)5次重復(fù)實驗結(jié)果穩(wěn)定一致，r≥99.5%），為準(zhǔn)確鑒別傘形科植物提供了可靠的依據(jù)。

4 討論 蛋白電泳法鑒別藥材，是以由基因控制的蛋白質(zhì)分子為標(biāo) 準(zhǔn)，從分子水平上去比較和分析，專屬性強、分辨率高、重復(fù)性好，尤其為外形相似和親緣關(guān)系相近的藥材鑒別，提供了一種新的有效的鑒別手段，較傳統(tǒng)的鑒別法先進一步。