作者：雒換鋒，胡昌江，雷羽，王霞

【摘要】 目的 探討海蛇經(jīng)發(fā)酵去除腥味后，與其生品在生藥學方面的差異，確定發(fā)酵對海蛇各方面的影響。方法 利用性狀、顯微、薄層及紅外掃描四個方面對海蛇生品與發(fā)酵品進行研究。結(jié)果 海蛇生品與發(fā)酵品的生藥學特征，發(fā)酵前后有一定的差別。發(fā)酵品與生品含有同樣的氨基酸成分，海蛇在發(fā)酵去腥后，仍保持良好的功效。結(jié)論 發(fā)酵對海蛇的生藥學特征影響不大，采用發(fā)酵去除海蛇腥味具有一定的可行性。

【關(guān)鍵詞】 海蛇;去腥;發(fā)酵;生藥學

【Abstract】 Objective To study pharmacognostical difference between sea snakes and its deodorized products after fermentation and ensure how fermentation affects sea snakes.Methods Sea snakes and its deodorized products after fermentation were comparatively studied in four aspects including characteristics，microscopy，TLC and IR.Results Pharmacognostical characteristics between sea snakes and its deodorized products after fermentation showed a certain difference.The fermented and nonfermented products contained similar amino acid，which proved out that deodorized sea snakes after fermentation had the same functions as before.Conclusion Fermentation can slightly affect sea snakes.It is feasible to deodorize sea snake by fermentation.

【Key words】 sea snakes;deodorization;fermentation;pharmacognosy

《中華本草》[1]中有關(guān)平頦海蛇論述:為海蛇科動物平頦海蛇[Lapemis hardwichii(Gray)]的干燥全體。藥性:味咸，性平。功能與主治:祛風濕，通絡(luò)止痛，解毒。主治風濕痹痛，肌膚麻木，疥癬，皮膚濕癢，瘡癤。可見海蛇有著廣闊的市場潛力，但其本身含有腥味，影響進一步的開發(fā)利用。通過研究，確定了發(fā)酵去除其腥味[27]的工藝。據(jù)文獻報道，發(fā)酵去腥應(yīng)用很少，且其機理不清楚，故筆者分別從性狀、顯微、薄層及紅外掃描對其進行研究，比較海蛇發(fā)酵前后的差異，確定發(fā)酵對海蛇的影響。

1 材料

1.1 材料

本品購于海南省海口市東門市場，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學盧先明教授鑒定為海蛇科平頦海蛇[Lapemis hardwickii(Gray)]的干燥全體。其多于夏、秋季捕捉，捕得后用沸水燙死，除去內(nèi)臟，烘干或鮮用。

1.2 海蛇發(fā)酵品

用凈海蛇段，依照如下操作，制得海蛇發(fā)酵品。①取5g酵母菌，加2﹪蔗糖液50 ml敞開活化30 min.②取海蛇段1 kg，將①的處理液轉(zhuǎn)移至海蛇藥材中，并加入3 000 ml 2﹪蔗糖液和pH=5緩沖液2 000 ml.充分攪拌，使液體均勻分布于海蛇體。③敞開放置在35～40 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)，發(fā)酵100 min，每20 min攪拌1次。④取出海蛇，盡量除去其攜帶的水，即得。

1.3 化學試劑

纈氨酸(批號:24200104)、丙氨酸(批號:624200104)，均購自中國藥品生物制品檢定所，其余均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 海蛇炮制前后的性狀鑒定

海蛇生品全體長69.2～91.5 cm.頭較長，鼻孔向上，鼻鱗彼此相接。體側(cè)扁，全體帶有深欖色寬橫斑，橫斑間距1～2鱗寬，在體側(cè)下方尖出呈三角形，有的形成完整環(huán)紋。體背鱗片菱形，呈鑲嵌狀排列，除去內(nèi)臟的腹面，肌肉土黃色，可見排列均勻而微隆起的肋骨。質(zhì)堅韌，不易折斷。氣腥，味咸。

海蛇發(fā)酵品:海蛇干體長約0.6 cm橫切小段。表面橄欖黃，較生藥材顏色淺，發(fā)白，無腥味，有酵母粉的淡淡清香味，味咸。

2.2 海蛇炮制前后的顯微鑒定[89]

本品粉末黃色或淡黃色，氣腥，味淡。①角質(zhì)鱗片淡灰色或近無色或淡黃色或紅棕色，側(cè)面觀具半圓形或乳頭狀突起;表面觀呈類圓形，分布有淡灰色或淡棕色細顆粒狀物。②皮膚碎片淡黃色或近無色或近紅棕色，表面密布棕色或黑色色素顆粒，常聚集成網(wǎng)狀或分枝狀，細胞界限較清楚。③橫紋肌纖維較多，淡黃色或近無色，呈條狀或方狀，直徑4～15 μm，具極細的橫紋，明暗相間，橫紋平直或稍彎，有的邊緣不平整，斷面觀少見。④骨碎片近無色或淡灰色，呈不規(guī)則的碎塊。骨陷窩長梭形，大多同方向排列，骨小管稀而稍粗，于橫、縱斷面均明顯可見。

二者均具有基本的角質(zhì)鱗片，皮膚碎片，橫紋肌纖維，骨陷窩與骨小管，只是在結(jié)構(gòu)上有微小差別。發(fā)酵品角質(zhì)鱗片較生品少，且其淡灰色居多，無紅棕色;側(cè)面觀乳頭狀突起不明顯，表面觀類圓形突起很大，未看到有棕色顆粒密布。發(fā)酵品皮膚碎片和骨碎片較多，其骨陷窩與骨小管常一起，而生品只能看到外露的骨陷窩，長梭形，大多同方向排列。可見發(fā)酵會使得海蛇結(jié)構(gòu)上產(chǎn)生一定變化。結(jié)果見圖1.

2.3 海蛇炮制前后的薄層鑒定[1012]

海蛇(海蛇發(fā)酵品)粉末(過藥典三號篩)1 g，加甲醇10 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液水浴蒸干，加1 ml甲醇溶解，作為供試品溶液。取0.001 g纈氨酸，0.001 g丙氨酸，分別加1 ml甲醇溶解，制成1 mg/ml對照品液。照薄層色譜法實驗，吸取上述溶液各1 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇冰醋酸水(4︰1︰1)與顯色劑(0.5%茚三酮醇液)以10︰1的混合液及正丁醇冰醋酸乙醇水(5︰1︰1︰2)與顯色劑同樣的混合液為展開劑，展開，取出，晾干，105 ℃烘箱內(nèi)烘至顯清晰的斑點。2種展開系統(tǒng)供試品色譜中，生品、發(fā)酵品與對照品色譜相應(yīng)的位置上均顯紫紅色的斑點，說明二者含有同樣的化學成分，只是發(fā)酵品的含量很明顯低于生品。其原因可能是在發(fā)酵處理過程中，有些成分溶于水，而損失部分含量。可見發(fā)酵未影響海蛇的氨基酸成分結(jié)構(gòu)，只是含量有一定減少。結(jié)果見圖2.

2.4 海蛇炮制前后紅外圖譜的對比研究[13]

2.4.1 儀器與試藥 儀器:Prestige21型紅外光譜儀(島津國際貿(mào)易上海有限公司)，F(xiàn)W4壓片機(天津天光光學儀器有限公司)，遠紅外燈，瑪瑙研缽。試藥:溴化鉀分析純。三批(090101、090102、090103)放大試驗海蛇生品與發(fā)酵品粉末，過六號篩。

2.4.2 樣品的制備 取KBr粉末與藥材粉末以1︰200混勻，置烘箱烘干。測定時，取適量粉末置瑪瑙研缽中研細，即得(操作在紅外燈下進行)。

2.4.3 KBr的紅外光譜圖 取分析純KBr約100 mg，研細，裝入壓片模具，用壓片機加壓至30 MPa，維持壓力2 min后卸掉壓力，得厚約1 mm的透明KBr片進行紅外光譜測定，作為空白對照。

2.4.4 海蛇樣品的紅外光譜圖 取各批次海蛇生品與發(fā)酵品樣品適量.按2.4.3項下操作，進行樣品紅外光譜測定。

絕大多數(shù)有機化合物的基頻振動出現(xiàn)在4 000～400 cm1 區(qū)域。6種樣品均有明顯的兩種吸收峰:2 900～3 400 cm 1，1 540～1 660 cm 1.推測090101生品與發(fā)酵品，090102生品與發(fā)酵品含有酰胺鍵，而090103生品與發(fā)酵品含有CH3及C=O.090101生品與發(fā)酵品在3 000 cm 1以上的吸收峰有差別，前者為3 279.44 cm 1，后者為3 422.36 cm 1.在2 350 cm 1處，二者亦有一定差別，前者為波峰，后者為波谷。090102生品與發(fā)酵品對比情況同090101.090103生品與發(fā)酵品圖譜基本相同。可見發(fā)酵對海蛇化學成分的官能團有一定影響，結(jié)果見圖3.

3 結(jié)論

通過對海蛇生品與發(fā)酵品的性狀、顯微、薄層及紅外掃描的對比研究，說明發(fā)酵對海蛇的結(jié)構(gòu)及化學成分產(chǎn)生了一定影響，但二者含有同樣的氨基酸成分，可認為海蛇在發(fā)酵去腥后，仍保持海蛇的生藥學特征，應(yīng)該不會影響其功效，進一步說明采用發(fā)酵去除海蛇腥味具有較好的可行性。另外，此次研究也為海蛇的基礎(chǔ)研究提供了一定依據(jù)。