作者：施薇，王淑敏，鄭友蘭，劉志強

【摘要】 目的優選黃連生藥中鹽酸小檗堿的最佳提取工藝 。方法 以水作為提取溶劑，通過正交實驗，高效液相色譜法測定鹽酸小檗堿的含量為指標，考察提取溶劑體積、提取時間以及提取次數對提取效果的影響，優選出最佳的提取工藝。結果黃連生藥中鹽酸小檗堿的最佳提取工藝為藥材加入8倍量水，回流提取2次，1.5h/次，測得鹽酸小檗堿含量為6.5499％。 結論該提取工藝條件科學，成本較低，提取得到的鹽酸小檗堿含量較高，具有一定的實用價值。

【關鍵詞】 黃連； 鹽酸小檗堿； 正交實驗； 提取工藝； 高效液相色譜

Abstract：ObjectiveTo optimize the of extract process of berberine hydrochloride in Rhizoma Copotidis by L9(34) orthogonal method. MethodsWith water as extraction solvent， the contents of berberine hydrochloride determined by HPLC as the index， the effects of volume of extraction solvent， time of refluxing and extraction times were investigated and the L9(34) orthogonal experiment was adopted to optimize the process.ResultsThe optimum extraction process was achieved with addition of water as extraction solvent (8 times raw herb in volume) into materials，refluxing 1.5hours and extracting for 2 times. The contents of berberine hydrochloride was 6.5499%.ConclusionThe optimum extraction process for berberine hydrochloride is scientific， cost is comparatively low， the contents of berberine hydrochloride is high. This method has wider practical value in production .

Key words： Berberine Hydrochloride ; Orhogonal experiment; Extraction process; HPLC 黃連為毛茛科（Ranunculaceae）植物黃連Coptis chinensis Franch，三角葉黃連Coptis deltoidea C.Y. Cheng et Hsiao 或云連Coptis teeta wall.的干燥根莖。藥材依次習稱為“味連”“雅連”“云連”［1］。黃連性寒，味苦，歸心、脾、胃、肝、膽、大腸經，具有清熱燥濕、瀉火解毒之功效。黃連中主要成分為小檗堿，具有抗腹瀉、抗炎、免疫促進、降血壓、抗心律失常、降血糖等作用。本文主要通過正交實驗優選水提取鹽酸小檗堿的最佳工藝，并且利用高效液相色譜法［2～4］ 對鹽酸小檗堿的含量進行測定，為其工業化生產提供實驗依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters2690 高效液相色譜儀，2996 UV diode detector 檢測器（美國Waters 公 司產品）；SanoriusBS110S十萬分之一分析天平（北京賽多利斯有限公司產品）； KQ－500DE型醫用數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司產品）。

1.2 試藥

黃連（購于四川江油中壩附子科技發展有限公司， 由長春中醫藥大學王淑敏教授鑒定為雅連）；鹽酸小檗堿對照品（供含量測定，批號：110713-200208，中國藥品生物制品檢定所）；甲醇為分析純；超純水、乙腈、磷酸均為色譜純。

2 方法與結果

2.1 正交實驗設計

稱取生藥30 g，以水為提取溶劑。取提取溶劑體積，回流提取時間，提取次數3個因素，每個因素取3個水平，按L9（34）正交實驗設計對提取物進行考察，以鹽酸小檗堿含量為考察指標。表1 因素水平（略）

2.2 提取工藝的優選

2.2.1 色譜條件

色譜柱為iamonsil C18（5 μm， 4.6 mm×250 mm），柱溫35℃；流動相為乙腈-0.1%磷酸（20∶80）；流速1 ml·min-1；檢測波長228 nm。

2.2.2 供試液制備

精密稱取不同提取條件下的黃連提取浸膏0.2 g，置于具塞三角瓶中，加入25 ml甲醇，精密稱取重量，超聲30 min，放冷，補足重量，濾過，精密量取0.5 ml 濾液置于5 ml 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，以0.45 μm濾膜過濾，即得。

2.2.3 方法學考察 標準曲線的制備：精密稱取鹽酸小檗堿對照品2.01 mg置于10 ml的量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，得鹽酸小檗堿對照品溶液（0.201 mg·ml-1）。在上述色譜條件下，分別精密吸取1，4，6，8，12 μl注入色譜儀，以鹽酸小檗堿質量X（mg）對吸收峰面積Y回歸，得回歸方程：Y＝3.913X-0.179 3，r=0.999 9，在0.201～2.412 μg 范圍內線性關系良好。

2.2.4 樣品鹽酸小檗堿的含量測定精密吸取正交實驗各供試品溶液10 μl，注入色譜儀，以外標法計算鹽酸小檗堿的含量。結果見表3～4。 表3 L9（34）正交實驗結果，表4 方差分析（略）。

根據方差分析表明，提取次數對提取工藝的影響具有顯著性意義，為主要影響因素。各因素作用主次順序為C﹥A﹥B，確定最佳提取工藝為A1B2C2，即藥材加8倍量水，提取2次，回流提取1.5h/次。

2.2.5 最佳工藝驗證實驗為考察上述優選提取工藝的穩定性，取黃連3份，每份30 g，按優選出的最佳提取工藝進行提取，在上述色譜條件下測定鹽酸小檗堿含量。結果見表5 。 表5 鹽酸小檗堿含量（略） 按正交實驗優選的最佳提取工藝進行驗證實驗，3次結果均處于最高水平，證明該提取工藝穩定、可靠。

3 討論 本實驗通過正交設計優選了黃連的提取工藝，以提取所得浸膏中的小檗堿的含量為考察指標，確定了最佳的提取工藝：藥材加入8倍量水，回流提取2次，1.5 h/次。按照優選出的最佳提取工藝進行驗證性實驗，穩定性較理想，與其他的提取工藝相比較，其提取成本低廉，工藝簡單，適合于工業生產，有一定的實用價值。