作者：趙寧張英起王增祿高連用顧以保李全勝蔡永明曾勇陳拯民劉昌孝

【關(guān)鍵詞】 腫瘤壞死因子α 關(guān)鍵詞: 腫瘤壞死因子α;藥代動(dòng)力學(xué);放射測(cè)量術(shù);小鼠 摘 要:目的 研究新型重組人腫瘤壞死因子（nrhTNFα）在小鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué). 方法 采用125 I標(biāo)記的nrhTNFα同位素法，觀察im和iv后的體內(nèi)過(guò)程. 結(jié)果 按10，20和40μg?kg-1 3個(gè)劑量給小鼠im nrhTNFα后在1～2h達(dá)到峰濃度，總放射性在體內(nèi)消除較快，t1/2 為4.7～6.5h，所得結(jié)果均證明Cmax 和AUC與劑量呈顯著相關(guān)（r=0.95），與iv給藥（10μg?kg-1 ）的血藥濃度進(jìn)行絕對(duì)生物利用度試驗(yàn)，其im給藥生物利用度為0.803.nrhTNFα在體內(nèi)的分布以腎含量最高，腦濃度最低，但都低于同時(shí)間的血藥濃度.按10μg?kg-1 im給藥后，用RA法測(cè)定尿和糞24h放射性總量，尿中放射性回收率為86.8%，糞中回收率為9.5%，總排泄量達(dá)給藥劑量的96.3%. 結(jié)論 nrhTNFα在小鼠的體內(nèi)代動(dòng)力學(xué)符合二室模型. Keywords:tumor necrosis factor;pharmacokinetics;radiom-etry;mice Abstract:AIM To study the pharmacokinetics of new re-combinant human tumor necrosis factor alpha（nrhTNFα）in mice.METHODS 125 I isotope labelled nrhTNFαmethods were used.RESULTS nrhTNFαcan rapidly enter into blood circulation after the mice are given nrhTNFαim in10μg?kg-1 ，20μg?kg-1 and40μg?kg-1 in then it reached the peak concentration in1～2h，t 1/2 was4.7～6.5h.The re-sults from the three doses demonstrate that Cmax and AUC are related to doses significantly.The absolute bioavailability of nrhTNFαgiven imwas0.803，compared with blood concen-trations obtained by iv in10μg?kg-1 .The levels of nrhTNFαin blood ranked first，kidney second，and brain last.After the mice are injected im in10μg?kg-1 ，86.8%radioactivity is recovered from urine，9.5%from feces，total discharge amount is up to96.3%of the amount given.CON┐CLUSION The pharmacokinetic of nrhTNFαin mice could be applied to two compartment model. 0 引言 TNF已經(jīng)得以廣泛研究和應(yīng)用［1-9］ .用基因工程技術(shù)生產(chǎn)的重組人TNF-α顯示出與天然TNF相同的體內(nèi)外抗腫瘤活性［10］ .但因其毒性太大［11］ ，未被FDA批準(zhǔn)上市，因此各國(guó)都在研制TNF衍生物，以降低毒副反應(yīng).本中心研制了一種新型重組人腫瘤壞死因子（nrhTNFα）.我們?cè)谒幮W(xué)研究的基礎(chǔ)上，參考nrhTNFα在小鼠藥代動(dòng)力學(xué)的研究文獻(xiàn)［12-15］，采用125 I標(biāo)記nrhTNFα的放射性同位素法（RA）進(jìn)行了nrhTNFα的小鼠藥代動(dòng)力學(xué)研究. 1 材料和方法 1.1 材料 nrhTNFα為本中心制備，經(jīng)HPLC-GFC分析，純度為97.5%.FT-630型γ計(jì)數(shù)儀購(gòu)自北京核儀器廠.昆明種小鼠，雌雄兼用，體質(zhì)量18～22g，由天津藥物研究院動(dòng)物室生產(chǎn)并提供.125 I-nrhTNFα的制備采用Iodogen法進(jìn)行nrhTNFα的125 I標(biāo)記.使用sephacyl S-200凝膠色譜柱分離純化125 I-nrhTNFα，測(cè)定放射濃度為1.48×109 Bq?L-1 ，放射比活性為1.59×109 Bq?mg-1 ，放射化學(xué)純度在95%以上. 1.2 方法 放射活性測(cè)定法（RA法）按文獻(xiàn)［15］進(jìn)行. 2 結(jié)果 2.1 總放射性濃度 3組小鼠按10，20和40μg?kg-1 125 I-nrhTNFα劑量給藥，im，另一組小鼠按10μg?kg-1 125 I-nrhTNFα劑量給藥，iv，分別于0.083，0.25，0.5，1，2，3，4，6，8，16，24h，由眼眶采血，分離血清，取血清20μL置于測(cè)定管中，進(jìn)行放射性測(cè)定.每時(shí)間點(diǎn)取6只小鼠，3雌3雄（Fig1）.可見(jiàn)肌注給藥組吸收迅速，各時(shí)間點(diǎn)的總放射活性與給藥劑量相關(guān).將相同劑量（10μg?kg-1 ）、不同給藥途徑（im和iv）、不同時(shí)間的總放射活性進(jìn)行比較，可見(jiàn)，給藥2h后，兩種途徑給藥的總放射性變化趨勢(shì)基本一致. 圖1 略 2.2 藥代參數(shù) 將Fig1的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用3P87藥代計(jì)算程序進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，不論靜脈還是肌肉給藥，均以二室模型擬合藥物濃度“-”時(shí)間曲線(xiàn)為適宜，自動(dòng)計(jì)算出藥代參數(shù)，肌肉給藥的t1/2α 在0.19～0.33h范圍，t1/2β 在5h左右，Tpeak在1h左右，Cmax 和AUC均隨劑量的增加而增大，呈現(xiàn)明顯的劑量相關(guān)（r=0.95，Tab1）.由肌肉和靜脈給藥的濃度數(shù)值經(jīng)統(tǒng)計(jì)矩計(jì)算得到的AUC來(lái)計(jì)算出nrhTNF的絕對(duì)生物利用度為0.803. 2.3 組織分布 按10μg?kg-1 劑量給小鼠用藥，im，0.1mL/只（含125 I-nrhTNFα1.85×104 Bq/只），給藥前20min給NaI0.2mL（含NaI20mg，ip）. 給藥后0.5，1，2，4，8h處死動(dòng)物，取腦、心、肺、肝、 脾、腎、胃、小腸、肌肉、脂肪、卵巢、子宮、睪丸和血液，每一臟器取樣100mg（不足100mg者，記錄實(shí)際質(zhì)量），分離血清，取20μL置于測(cè)定管中，進(jìn)行總放射活性計(jì)數(shù)，再根據(jù)校正曲線(xiàn)計(jì)算出每克組織放射活性，每時(shí)間點(diǎn)取樣6只動(dòng)物，3雌3雄.在給藥后0.5h，放射活性從高到低的順序?yàn)檠?、腎、肺、肝、小腸、肌肉、胃、心、脂肪、脾、卵巢、睪丸、子宮和腦;給藥后8h仍能測(cè)到放射活性，其分布順序?yàn)檠?、腎、肺、肝、胃、肌肉、脾、心、小腸、脂肪、睪丸、子宮、卵巢和腦（Fig2）. 表1 總放射性測(cè)定的nrhTNFα藥代參數(shù)略 圖2 略 2.4 排泄實(shí)驗(yàn) 小鼠4只，2雌2雄，按前法用NaI處理，給予nrhTNF10μg?kg-1 （含125 I-nrhTNFα1.85×104 Bq/只，im）放入代謝籠內(nèi)，收集0-2，2-4，4-8，8-12，12-24h的尿樣和糞樣.取尿樣置于測(cè)定管內(nèi)，用γ-計(jì)數(shù)器測(cè)定放射活性，結(jié)果從累計(jì)放射量來(lái)看，給藥后2h由尿排泄約為給藥劑量50%的放射量，給藥24h排泄86%的放射量，表明125 I-nrhTNF主要是由尿排泄（Fig3）.將收集到的糞樣制成勻漿后測(cè)定不同時(shí)間段的放射活性（Fig3），24h累計(jì)糞排泄量為所給劑量的9.5%，而且主要是給藥后8h內(nèi)排泄的.