作者：趙寧張英起王增祿高連用顧以保李全勝蔡永明曾勇陳拯民劉昌孝

【關鍵詞】 腫瘤壞死因子α 關鍵詞: 腫瘤壞死因子α;藥代動力學;放射測量術;小鼠 摘 要:目的 研究新型重組人腫瘤壞死因子（nrhTNFα）在小鼠體內的藥代動力學. 方法 采用125 I標記的nrhTNFα同位素法，觀察im和iv后的體內過程. 結果 按10，20和40μg?kg-1 3個劑量給小鼠im nrhTNFα后在1～2h達到峰濃度，總放射性在體內消除較快，t1/2 為4.7～6.5h，所得結果均證明Cmax 和AUC與劑量呈顯著相關（r=0.95），與iv給藥（10μg?kg-1 ）的血藥濃度進行絕對生物利用度試驗，其im給藥生物利用度為0.803.nrhTNFα在體內的分布以腎含量最高，腦濃度最低，但都低于同時間的血藥濃度.按10μg?kg-1 im給藥后，用RA法測定尿和糞24h放射性總量，尿中放射性回收率為86.8%，糞中回收率為9.5%，總排泄量達給藥劑量的96.3%. 結論 nrhTNFα在小鼠的體內代動力學符合二室模型. Keywords:tumor necrosis factor;pharmacokinetics;radiom-etry;mice Abstract:AIM To study the pharmacokinetics of new re-combinant human tumor necrosis factor alpha（nrhTNFα）in mice.METHODS 125 I isotope labelled nrhTNFαmethods were used.RESULTS nrhTNFαcan rapidly enter into blood circulation after the mice are given nrhTNFαim in10μg?kg-1 ，20μg?kg-1 and40μg?kg-1 in then it reached the peak concentration in1～2h，t 1/2 was4.7～6.5h.The re-sults from the three doses demonstrate that Cmax and AUC are related to doses significantly.The absolute bioavailability of nrhTNFαgiven imwas0.803，compared with blood concen-trations obtained by iv in10μg?kg-1 .The levels of nrhTNFαin blood ranked first，kidney second，and brain last.After the mice are injected im in10μg?kg-1 ，86.8%radioactivity is recovered from urine，9.5%from feces，total discharge amount is up to96.3%of the amount given.CON┐CLUSION The pharmacokinetic of nrhTNFαin mice could be applied to two compartment model. 0 引言 TNF已經得以廣泛研究和應用［1-9］ .用基因工程技術生產的重組人TNF-α顯示出與天然TNF相同的體內外抗腫瘤活性［10］ .但因其毒性太大［11］ ，未被FDA批準上市，因此各國都在研制TNF衍生物，以降低毒副反應.本中心研制了一種新型重組人腫瘤壞死因子（nrhTNFα）.我們在藥效學研究的基礎上，參考nrhTNFα在小鼠藥代動力學的研究文獻［12-15］，采用125 I標記nrhTNFα的放射性同位素法（RA）進行了nrhTNFα的小鼠藥代動力學研究. 1 材料和方法 1.1 材料 nrhTNFα為本中心制備，經HPLC-GFC分析，純度為97.5%.FT-630型γ計數儀購自北京核儀器廠.昆明種小鼠，雌雄兼用，體質量18～22g，由天津藥物研究院動物室生產并提供.125 I-nrhTNFα的制備采用Iodogen法進行nrhTNFα的125 I標記.使用sephacyl S-200凝膠色譜柱分離純化125 I-nrhTNFα，測定放射濃度為1.48×109 Bq?L-1 ，放射比活性為1.59×109 Bq?mg-1 ，放射化學純度在95%以上. 1.2 方法 放射活性測定法（RA法）按文獻［15］進行. 2 結果 2.1 總放射性濃度 3組小鼠按10，20和40μg?kg-1 125 I-nrhTNFα劑量給藥，im，另一組小鼠按10μg?kg-1 125 I-nrhTNFα劑量給藥，iv，分別于0.083，0.25，0.5，1，2，3，4，6，8，16，24h，由眼眶采血，分離血清，取血清20μL置于測定管中，進行放射性測定.每時間點取6只小鼠，3雌3雄（Fig1）.可見肌注給藥組吸收迅速，各時間點的總放射活性與給藥劑量相關.將相同劑量（10μg?kg-1 ）、不同給藥途徑（im和iv）、不同時間的總放射活性進行比較，可見，給藥2h后，兩種途徑給藥的總放射性變化趨勢基本一致. 圖1 略 2.2 藥代參數 將Fig1的實驗數據用3P87藥代計算程序進行數據處理，不論靜脈還是肌肉給藥，均以二室模型擬合藥物濃度“-”時間曲線為適宜，自動計算出藥代參數，肌肉給藥的t1/2α 在0.19～0.33h范圍，t1/2β 在5h左右，Tpeak在1h左右，Cmax 和AUC均隨劑量的增加而增大，呈現明顯的劑量相關（r=0.95，Tab1）.由肌肉和靜脈給藥的濃度數值經統計矩計算得到的AUC來計算出nrhTNF的絕對生物利用度為0.803. 2.3 組織分布 按10μg?kg-1 劑量給小鼠用藥，im，0.1mL/只（含125 I-nrhTNFα1.85×104 Bq/只），給藥前20min給NaI0.2mL（含NaI20mg，ip）. 給藥后0.5，1，2，4，8h處死動物，取腦、心、肺、肝、 脾、腎、胃、小腸、肌肉、脂肪、卵巢、子宮、睪丸和血液，每一臟器取樣100mg（不足100mg者，記錄實際質量），分離血清，取20μL置于測定管中，進行總放射活性計數，再根據校正曲線計算出每克組織放射活性，每時間點取樣6只動物，3雌3雄.在給藥后0.5h，放射活性從高到低的順序為血液、腎、肺、肝、小腸、肌肉、胃、心、脂肪、脾、卵巢、睪丸、子宮和腦;給藥后8h仍能測到放射活性，其分布順序為血液、腎、肺、肝、胃、肌肉、脾、心、小腸、脂肪、睪丸、子宮、卵巢和腦（Fig2）. 表1 總放射性測定的nrhTNFα藥代參數略 圖2 略 2.4 排泄實驗 小鼠4只，2雌2雄，按前法用NaI處理，給予nrhTNF10μg?kg-1 （含125 I-nrhTNFα1.85×104 Bq/只，im）放入代謝籠內，收集0-2，2-4，4-8，8-12，12-24h的尿樣和糞樣.取尿樣置于測定管內，用γ-計數器測定放射活性，結果從累計放射量來看，給藥后2h由尿排泄約為給藥劑量50%的放射量，給藥24h排泄86%的放射量，表明125 I-nrhTNF主要是由尿排泄（Fig3）.將收集到的糞樣制成勻漿后測定不同時間段的放射活性（Fig3），24h累計糞排泄量為所給劑量的9.5%，而且主要是給藥后8h內排泄的.