【摘要】 目的 觀察脾腎兩助顆粒對(duì)小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型的影響，為臨床用藥的有效性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法 采用番瀉葉致小鼠腹瀉，觀察脾腎兩助顆粒對(duì)小鼠腹瀉的影響；利用三硝基苯磺酸(TNBS)和50%乙醇局部灌腸相結(jié)合造成小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型，觀察脾腎兩助顆粒對(duì)小鼠免疫球蛋白IgG、IgM的影響。結(jié)果 脾腎兩助顆粒能明顯減少番瀉葉所致的小鼠腹瀉次數(shù)，與對(duì)照組比較差異具有顯著性意義(P<0.01)；脾腎兩助顆粒能降低小鼠IgG、IgM水平。結(jié)論 脾腎兩助顆粒治療潰瘍性結(jié)腸炎療效顯著。

【關(guān)鍵詞】 脾腎兩助顆粒；潰瘍性結(jié)腸炎；小鼠

Abstract：Objective To observe the effect of Spleen-kidney Bi-remedial Pellets on the ulcerative colitis model， and provide experimental proof for the efficiency of clinical practices. Methods To induce mouse to diarrhea by Fanxieye， then observe the effect of Spleen-kidney Bi-remedial Pellets. Ulcerative colitis on mouse was caused by partial bowel-enema of TNBS and 50% ethanol， then observe the effect of Spleen-kidney Bi-remedial Pellets on IgG and IgM. Results Spleen-kidney Bi-remedial Pellets was capable to obviously reduce the diarrhea on mouse by Fanxieye， with a remarkable difference to the comparative group (P<0.01). The Spleen-kidney Bi-remedial Pellets decreased the level of IgG and IgM of mouse. Conclusions Spleen-kidney Bi-remedial Pellets has remarkable effect on ulcerative colitis.Key words：Spleen-kidney Bi-remedial Pellets；ulcerative colitis；mice脾腎兩助顆粒是我院用于治療慢性潰瘍性結(jié)腸炎(UC)取得較好療效的中藥復(fù)方制劑，為了給臨床用藥提供科學(xué)依據(jù)，我們對(duì)其進(jìn)行了相關(guān)的藥效學(xué)研究。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物昆明種小鼠，(20±2)g，♂、♀兼用，普通級(jí)，由山西中醫(yī)藥研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室提供，1999年引自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育所。動(dòng)物符合GB-14922-94Ⅱ級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，動(dòng)物合格證號(hào)：晉動(dòng)(證)字第A00-001號(hào)。

1.2 藥物與試劑

脾腎兩助顆粒以六君子湯加黃芪、補(bǔ)骨脂、郁金等組成，每克相當(dāng)于原藥材5 g，山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院中藥制劑室提供，批號(hào)020309。50%番瀉葉煎液、50%乙醇、乙醚，山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院中藥制劑室提供。思密達(dá)，博福-益普生(天津)制藥集團(tuán)生產(chǎn)，批號(hào)H20000690；柳氮磺吡啶，山西三九同達(dá)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)H14022874。脾腎兩助顆粒、思密達(dá)、柳氮磺吡啶，用蒸餾水配制一定濃度溶液，灌胃?jìng)溆谩Ｈ趸交撬幔绹?guó)Sigma公司生產(chǎn)，批號(hào)042K5002。IgG試劑盒，批號(hào)LoNoE110-100-7；IgM試劑盒，批號(hào)LoNoE110- 128-11，均由美國(guó)Bedlyl公司生產(chǎn)。

1.3 實(shí)驗(yàn)條件

室溫(22±1)℃，相對(duì)濕度(50±5)%。

2 方法和結(jié)果

2.1 脾腎兩助顆粒對(duì)番瀉葉所致小鼠腹瀉的影響

取小鼠50只，♂、♀各半，隨機(jī)分為5組：空白對(duì)照組，脾腎兩助顆粒小、中、大劑量組及思密達(dá)組，每組10只。用藥組按劑量給藥，每天2次，連續(xù)7 d；除空白對(duì)照組外，分別用脾腎兩助顆粒0.45、0.9、1.8 g/(kg?d)及思密達(dá)1.35 g/(kg?d)灌胃。實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物禁食6 h，給藥1 h后，空白對(duì)照組用同體積蒸餾水灌胃；各組小鼠分別用50%番瀉葉煎液0.2 mL/10 g灌胃致瀉，用漏斗把小鼠罩在鋼絲網(wǎng)上，網(wǎng)下放上濾紙，連續(xù)觀察3 h，記錄小鼠排便次數(shù)及稀便腹瀉情況(糞便每粒為1次，稀便每堆為1次)。所有數(shù)據(jù)用SAS8.2統(tǒng)計(jì)軟件包處理，兩組間行方差齊性檢驗(yàn)，組間用方差分析，組內(nèi)用重復(fù)測(cè)量的方差分析(下同)。結(jié)果見(jiàn)表1。 表1 脾腎兩助顆粒對(duì)番瀉葉所致小鼠腹瀉的影響（略）注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.01，**P<0.001，***P<0.0001。

2.2 脾腎兩助顆粒對(duì)UC小鼠免疫球蛋白指標(biāo)變化的影響

取小鼠60只，♂、♀各半，隨機(jī)分為6組：空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、柳氮磺吡啶組及脾腎兩助顆粒小、中、大劑量組，每組10只，禁食12 h。用藥組按劑量給藥，空白對(duì)照組用同體積蒸餾水灌胃，每天2次，連續(xù)7 d。除空白對(duì)照組外，其他各組分別用脾腎兩助顆粒0.45、0.9、1.8 g/(kg?d)及柳氮磺吡啶0.9 g/(kg?d)或等容積生理鹽水灌胃，1 h后乙醚輕度麻醉小鼠，用直徑2 mm的灌腸器從肛門(mén)處插入結(jié)腸約4 cm處，注入生理鹽水或2%三硝基苯磺酸(+50%乙醇)0.1 mL，并保持小鼠水平狀態(tài)約30 s， 7 d后再次灌入1%三硝基苯磺酸(+50%乙醇)0.1mL。第1次和末次給藥30 min后，乙醚輕度麻醉小鼠， 取鼠尾靜脈或眼眶靜脈叢血20 μL，采用ELISA法測(cè)定免疫球蛋白IgG、IgM含量。結(jié)果見(jiàn)表2。表2 實(shí)驗(yàn)小鼠IgG、IgM指標(biāo)變化（略）注：與同組治療前比較，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001；與空白對(duì)照組比較，**P<0.001；與模型對(duì)照組比較，★P<0.05，★★P<0.01，★★★P<0.001。 3 討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，UC發(fā)病主要與免疫以及遺傳有關(guān)，而遺傳素質(zhì)和免疫失調(diào)與中醫(yī)脾腎關(guān)系密切。腎藏精，主生殖，先天稟賦差異主要?dú)w于腎，而腎特別是腎陽(yáng)與神經(jīng)內(nèi)分泌密切相關(guān)；脾為氣血生化之源，機(jī)體免疫功能與脾的功能狀態(tài)相關(guān)。現(xiàn)代研究表明，通過(guò)長(zhǎng)期健脾補(bǔ)腎，可以影響神經(jīng)內(nèi)分泌免疫系統(tǒng)，調(diào)節(jié)激素、神經(jīng)遞質(zhì)、細(xì)胞因子的變化與基因表達(dá)，從而影響活性物質(zhì)的釋放，改善機(jī)體免疫失衡狀態(tài)[1]。脾腎兩助顆粒由黃芪、補(bǔ)骨脂、郁金加六君子湯等組成，全方健脾益氣、滋補(bǔ)肝腎，標(biāo)本兼治，不寒不燥，為治療慢性泄瀉之良方。

現(xiàn)代研究表明：UC的組織學(xué)改變顯示有B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞混合浸潤(rùn)。正常腸組織的淋巴細(xì)胞以IgA分泌型B細(xì)胞為主，而UC腸組織中IgG分泌型B細(xì)胞明顯增加。在腸道疾病中，當(dāng)免疫復(fù)合物IgG大量增多或沉淀在腸道中時(shí)，造成局部腸黏膜損傷[2]。UC患者在腸黏膜受到炎癥侵犯時(shí)，其腸黏膜具有多種抗原如結(jié)腸上皮細(xì)胞抗原、酵母菌抗原、O14型大腸桿菌酯多糖抗原等可能刺激機(jī)體免疫B細(xì)胞產(chǎn)生IgM。UC患者免疫學(xué)檢查可見(jiàn)血清免疫球蛋白IgG和IgM在活動(dòng)期增高[3]。實(shí)驗(yàn)給予小鼠脾腎兩助顆粒治療后，其血清IgG和IgM明顯下降，提示脾腎兩助顆粒可調(diào)節(jié)機(jī)體體液免疫功能，減輕腸道組織損傷。綜上而言， 脾腎兩助顆粒可以調(diào)節(jié)UC模型小鼠失衡的免疫水平，減輕自身免疫反應(yīng)，減少特異性或非特異性炎癥分子的釋放，緩解腸道免疫破壞作用。

現(xiàn)代中藥藥理學(xué)研究表明，黃芪提取成分F3為免疫增強(qiáng)劑，F(xiàn)2有很強(qiáng)的免疫抑制作用，因此，黃芪具有免疫雙向調(diào)節(jié)作用；六君子湯對(duì)腸肌運(yùn)動(dòng)具有明顯的雙向調(diào)節(jié)作用，對(duì)興奮狀態(tài)的腸肌運(yùn)動(dòng)有抑制能力，對(duì)抑制狀態(tài)的腸肌運(yùn)動(dòng)有興奮功能，能調(diào)節(jié)免疫功能；補(bǔ)骨脂有細(xì)胞毒樣作用；郁金對(duì)特異性免疫和非特異性免疫均有明顯的抑制作用[4]。因此，脾腎兩助顆粒治療潰瘍性結(jié)腸炎療效顯著。

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