作者：張再康，楊霓芝，蘇敬文，畢胤龍，高燕翔，彭鈺，馬紅巖，左琪

【摘要】 目的 研究通脈口服液防治早期糖尿病腎病的作用機(jī)制。方法 采用右腎切除加腹腔一次性注射鏈脲佐菌素建立糖尿病腎病動物模型。通脈口服液治療組給予通脈口服液灌胃，正常組和模型組給予等量的蒸餾水灌胃，時間為8周。給藥結(jié)束后，觀察大鼠一般情況、腎臟肥大指數(shù)、24 h尿量、血糖、尿微量白蛋白、腎功能、血糖、血脂、腎臟病理的變化情況。結(jié)果 通脈口服液治療組大鼠的一般情況明顯好于模型組，體重明顯增長(P＜0.01)，腎臟肥大指數(shù)明顯下降(P＜0.01)，血糖明顯下降(P＜0.01)，血清尿素氮和肌酐明顯下降(P＜0.01)，腎臟病理損害得到明顯的改善，24 h尿量和血脂無明顯變化。結(jié)論 通脈口服液通過控制血糖和改善腎血流動力學(xué)防治Ⅱ期糖尿病腎病。

【關(guān)鍵詞】 Ⅱ期糖尿病腎病；通脈口服液；藥效學(xué)；動物模型

Abstract：Objective To investigate the effect of Tongmai oral liquid on the early diabetic nephropathy. Methods Diabetic nephropathy rats were induced by excision of the right kidney and a single intraperitoneal injection of streptozotocin (STZ). Forty male Wistar rats were pided randomly into 3 groups：Tongmai group， nephrotic model group， and normal group. At the end of the 8th week， the rats general states and some parameters such as kidney hypertrophy index， 24 h urine volume， blood glucose， 24 h urinary microalbumin (24 h UMA)， renal function [serum creatinine (Cr)， blood urea nitrogen (BUN)]， serum lipid， and the change of nephritic pathologic lesion were measured. Result Compared with the model group， general states in Tongmai group were improved， there was a considerable increase on body weight (P＜0.01). Compared with the model group， there was a significantly decrease (P＜0.01) on the kidney hypertrophy index， blood glucose， BUN and Cr in Tongmai group. The pathologic lesion in kidney morphology were also ameliorated obviously. But there were no remarkable differences in the 24 h urine volume and serum lipid index. Conclusion Tongmai oral liquid can prevent and cure the Ⅱ period diabetic nephropathy by controlling blood glucose and improving renal hemodynamics. Key words：Ⅱ period diabetic nephropathy；Tongmai oral liquid；pharmacodynamics；animal model 近年越來越重視的是糖尿病腎病的早期腎臟病變，此時，如給予適當(dāng)?shù)呐R床干預(yù)，可使腎小球高濾過率(GFR)下降，增大的腎臟逐漸恢復(fù)正常，從而使病變過程得到遏止甚至逆轉(zhuǎn)。對糖尿病腎病早期診斷、早期治療是研究糖尿病腎病的重點和突破口[1]。因此，我們開展了中醫(yī)藥干預(yù)糖尿病腎病Ⅰ～Ⅲ期的研究。

1 材料與方法

1.1 動物

健康Wistar雄性大鼠45只，體重(200±20)g，河北省實驗動物中心提供，合格證號：DK0408-0034。

1.2 藥物

通脈口服液，主要由黃芪、三七等藥材組成，廣東省中醫(yī)院制劑室制備，批號071101。鏈脲佐菌素(STZ)，批號B69776， Sigma公司生產(chǎn)，使用時將STZ溶于新配制的0.1 mol/L枸櫞 酸緩沖液中(pH 4.5)，制成2%(20 mg/mL)的溶液。

1.3 主要試劑

血糖試劑盒，中生北控生物科技股份有限公司，批號080302；UMA試劑盒，濰坊三維生物工程集團(tuán)有限公司，批號080104；尿素氮試劑盒，保定長城臨床試劑有限公司，批號080124；肌酐試劑盒，北京北化康泰臨床試劑有限公司，批號080223。

1.4 主要儀器

LYZER-2000半自動生化分析儀、XH-6020 C型γ免疫計數(shù)器，德國豪邁公司。

1.5 分組與造模

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，所有數(shù)據(jù)均用x±s表示，多組均數(shù)比較用ANOVA分析，兩兩比較用q檢驗。

2 結(jié)果

2.1 對糖尿病腎病大鼠一般情況的影響 實驗期間，正常組生長良好，飲食正常，反應(yīng)靈敏。模型組大鼠逐漸出現(xiàn)多飲、多尿、消瘦，豎毛弓背，蜷臥扎堆，活動減少，精神萎靡，舌質(zhì)紫黯，皮毛凌亂，色枯無澤，實驗后期出現(xiàn)腹水、白內(nèi)障等情況。通脈組大鼠總體情況均較模型組為輕，精神較好，毛色較光澤，體重明顯增長，實驗后期個別大鼠也出現(xiàn)腹水、白內(nèi)障等情況。模型組和通脈組均有5只大鼠因相互撕咬或其他原因受傷感染致死。

2.2 對糖尿病腎病大鼠體重的影響

(見表1)表1 通脈口服液對糖尿病腎病大鼠體重的影響(略x±s)注：與正常組比較，*P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.01(下同)

2.3 對糖尿病腎病大鼠腎臟肥大指數(shù)的影響

(見表2)表2 通脈口服液對糖尿病腎病大鼠腎臟肥大指數(shù)的影響(略)注：腎臟肥大指數(shù)＝左腎的重量×2/體重

2.4 對糖尿病腎病大鼠24 h尿量、血糖的影響

(見表3)表3 通脈口服液對糖尿病腎病大鼠24 h尿量、血糖的影響(略)

2.5 對糖尿病腎病大鼠血脂的影響

(見表4)表4 通脈口服液對糖尿病腎病大鼠血脂的影響(略) 2.6 對糖尿病腎病大鼠腎功能的影響

(見表5)表5 通脈口服液對糖尿病腎病大鼠BUN、Cr的影響(略)

2.7 對糖尿病腎病大鼠24 h尿微量白蛋白的影響

(見表6) 表6 各組糖尿病腎病大鼠24 h UMA濃度值（略）

2.8 對PAS 染色的腎小球病理損害的影響 正常組腎小球未見異常變化。模型組大鼠腎小球體積增大，囊腔變小，部分毛細(xì)血管管腔擴(kuò)張，部分毛細(xì)血管管腔閉塞，系膜細(xì)胞增生，系膜區(qū)嗜復(fù)紅蛋白呈彌漫性沉積。通脈組腎小球毛細(xì)血管襻開放較好，系膜基質(zhì)呈局灶性沉積。

2.9 對腎小球細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響

正常組腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞窗孔排列規(guī)則，基膜均勻完整，足細(xì)胞足突結(jié)構(gòu)清晰、無融合，呈分枝樣排列于基膜外側(cè)，足細(xì)胞裂孔膜正常。模型組血管內(nèi)皮細(xì)胞增生明顯，呈球狀，突出到血管腔內(nèi)，基底膜部分區(qū)域呈局灶性增厚，部分足突節(jié)段性消失。通脈組基底膜正常，部分血管內(nèi)皮增生，部分足突融合變短。說明通脈口服液能修復(fù)糖尿病腎病腎小球超微結(jié)構(gòu)的損害。

3 討論

我們制造的糖尿病腎病大鼠在8周內(nèi)尚未導(dǎo)致明顯的白蛋白漏出，說明該糖尿病腎病大鼠仍處在糖尿病腎病Ⅰ期或糖尿病腎病Ⅱ期，糖尿病腎病早期還尚未達(dá)到。但結(jié)合腎臟肥大指數(shù)以及腎小球微觀結(jié)構(gòu)病理結(jié)果進(jìn)行綜合分析，可以肯定，該模型處在糖尿病腎病Ⅱ期。這有利于觀察中醫(yī)藥早期防治糖尿病腎病的療效。楊霓芝教授根據(jù)糖尿病腎病臨床表現(xiàn)和現(xiàn)代病理機(jī)制，認(rèn)為氣虛血瘀證是糖尿病腎病的基本證型，益氣活血法為治療糖尿病腎病的基本治法，并且應(yīng)貫穿于糖尿病腎病治療的全過程。根據(jù)這一主導(dǎo)思想創(chuàng)制了通脈口服液，臨床治療糖尿病腎病取得了良好療效。本實驗結(jié)果表明，通脈口服液能夠改善糖尿病腎病的機(jī)理主要體現(xiàn)在以下兩方面：①控制血糖：通脈口服液能夠明顯降低血糖，說明通脈口服液對腎臟保護(hù)作用與糖代謝關(guān)系密切。②改善腎血流動力學(xué)：通脈口服液能夠降低糖尿病腎病Ⅱ期大鼠腎臟肥大指數(shù)，減輕腎小球毛細(xì)血管管腔擴(kuò)張，減輕系膜細(xì)胞的增殖和細(xì)胞外基質(zhì)在系膜區(qū)的積聚擴(kuò)張，減輕腎小球基底膜增厚和毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生，說明通脈口服液可以改善糖尿病腎病腎臟血流動力學(xué)。

2型糖尿病患者多伴有脂代謝紊亂，主要表現(xiàn)為TG升高和HDL-C水平下降，是影響糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展的一項獨立危險因素，在促進(jìn)尿蛋白排泄，加重腎臟損害中起重要作用。本實驗通脈口服液降低血脂作用不明顯，提示我們臨床應(yīng)適當(dāng)配伍既符合傳統(tǒng)中醫(yī)治療糖尿病腎病的理論和臨床實踐又具有降低血脂藥理作用的中藥可能更好。