【摘要】 按照化學(xué)成分、藥理作用、質(zhì)量控制方法、提取工藝方法將文獻(xiàn)分類綜述。板藍(lán)根化學(xué)成分復(fù)雜，具有抗菌、抗病毒、促進(jìn)免疫等多種藥理作用，質(zhì)量控制方法和提取工藝有待于改進(jìn)。

【關(guān)鍵詞】 板藍(lán)根 化學(xué)成分 藥理作用 質(zhì)量控制 提取工藝

Recent Progress in the Studies of Chemistry，Pharmacology，Quality Control and Extraction Methods on the Radix Isatidis

AbstractObjectiveTo make a review of Radix Isatidis in chemistry，pharmacology，quality control and extraction methods．MethodsThe documents were classified and summarized by chemical constituents，pharmacological effects ，quality control and extraction methods．Results and ConclusionThe Radix Isatidis possesses complex chemical constituents， has actions as antibacterial，antivirus and stimulating immunity，but the quality standards and extraction process are not quite suitable and should be improved．

Key wordsRadix Isatidis； Chemical constituents； Pharmacological effects； Quality control； Extraction process

板藍(lán)根Radix Isatidis是我國的傳統(tǒng)中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。《中國藥典》（2005年版）收載的是十字花科植物菘藍(lán)Isatis indigotica Fort．的干燥根，具有清熱解毒、涼血利咽的功能；廣泛用于溫病發(fā)熱、發(fā)斑、喉痹、丹毒、癰腫、風(fēng)熱感冒等；可防治流行性乙型肝炎、急慢性肝炎、流行性腮腺炎、骨髓炎。現(xiàn)將板藍(lán)根化學(xué)成分、藥理作用、質(zhì)量控制及提取方法的研究進(jìn)展做如下綜述。

1 化學(xué)成分研究［1～7］

1.1 生物堿類物質(zhì)所含生物堿類物質(zhì)中，吲哚類化合物有依靛藍(lán)酮、靛玉紅、靛藍(lán)、羥基靛玉紅、吲哚-3-乙腈-6-O- D-葡萄糖苷、2，3-二氫羥基地-氧吲哚-3-乙腈、(E)-3-(3′，5′-二甲氧基-羥基)-2-吲哚酮；(E)-2-［(3′-吲哚)腈基亞甲基］-3-吲哚酮；喹唑酮類化合物有3-羥苯基喹唑酮、4(3H)-喹唑酮、2，4，(1H，3H)- 喹唑二酮、色胺酮、板藍(lán)根二酮B；喹啉類化合物有依靛藍(lán)雙酮；含硫類化合物有告依春、表告依春、1-硫氰基-2-羥基-3-丁烯；芥子苷類化合物有黑芥子苷、葡萄糖蕓薹素、新葡萄糖蕓薹素、1-硫代-3-吲哚甲基芥子油苷。

1.2 氨基酸類精氨酸、谷氨酸、酪氨酸、脯氨酸、纈氨酸、氨基丁酸、亮氨酸、色氨酸、天門冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、甘氨酸、丙氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、組氨酸、賴氨酸。

1.3 有機(jī)酸類化合物吡啶3-羧酸、順丁烯二酸、2-羥基-1，4-苯二甲酸、苯甲酸、水楊酸、丁香酸、鄰氨基苯甲酸、3-(2-苯甲酸)-4(3)喹唑酮、棕櫚酸、亞油烯酸、芥酸、琥珀酸。

1.4 甾醇類化合物β-谷甾醇、γ-谷甾醇。

1.5 其他類化合物腺苷、多糖、板藍(lán)根木脂素苷Ａ、胡蘿卜苷、遠(yuǎn)志醇、β正丁基-D-塔格糖苷［8］、板藍(lán)根異香豆素A［9］、丁香苷、吲哚-3-乙腈-6-O-β-D-葡萄糖苷、(+)-異落葉松樹脂醇［10］(2R)-2-O-β-D-吡喃葡萄糖基- 1，4-苯并噁嗪-3-酮、(2R)-2-O-β-D-吡喃葡萄糖基-4-羥基-1，4-苯并噁嗪-3-酮、松脂酚-4-O-β-D-芹菜糖基- (1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷和尿苷［11］等。

2 藥理作用研究

2.1 抗菌作用［12］板藍(lán)根水浸液對金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、枯草桿菌、八聯(lián)球菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、甲型鏈球菌、肺炎雙球菌、流感桿菌、腦膜炎雙球菌均有抑制作用。

2.2 抗病毒作用

2.2.1 對一般病毒的作用［13］對板藍(lán)根注射液作抗病毒實驗，表明其對甲型流感病毒、乙型腦炎病毒、腮腺炎病毒、流感病毒有抑制感染并用抑制增殖作用。

2.2.2 對出血熱病毒、單皰病毒的作用［14］將腎病出血熱病毒（HFRSV）和單皰病毒(HSV-2)分別吸附于Vero-6細(xì)胞和BGM細(xì)胞，并分別加入不同濃度的板藍(lán)根針劑做抗病毒實驗，結(jié)果表明有明顯的殺病毒作用。

2.2.3 對肝炎病毒的作用［15］板藍(lán)根及地上部分（大青葉）有抑制HBsAg活性的作用，在體內(nèi)膽紅素單位時間排出量明顯增加。

2.2.4 對人巨細(xì)胞病毒（HCMV）的作用人巨細(xì)胞病毒（HCMV）是宮內(nèi)感染造成胎兒畸形、死胎的重要原因，同時也是免疫缺陷患者感染致死及器官移植失敗的根源。孫廣蓮等［16］以3-(4，6-二甲基噻唑-2-xl)-2，5-乙苯基-四唑溴（MTT）法檢測，考察板藍(lán)根煎劑（φ=50%）對HCMV的抗毒效應(yīng)。結(jié)果表明煎劑在1:200稀釋度時即有顯著的抗毒效應(yīng)。

2.3 對內(nèi)毒素的作用［17～20］內(nèi)毒素是由細(xì)菌產(chǎn)生的能引起恒溫動物體溫異常升高的致熱物質(zhì)。板藍(lán)根具有抗大腸桿菌內(nèi)毒素的作用。經(jīng)家兔熱原檢查法、鱟實驗法研究證實，板藍(lán)根氯仿提取物有抗大腸桿菌O111B4內(nèi)毒素的作用，比較發(fā)現(xiàn)，不同產(chǎn)地板藍(lán)根抗內(nèi)毒素作用差異較大，有的抗內(nèi)毒素作用為0.4U·L-1，而較低的只有0.001 U·L-1。有研究認(rèn)為，板藍(lán)根中抗內(nèi)毒素活性物質(zhì)為有機(jī)酸類。

2.4 對免疫系統(tǒng)的作用已證明板藍(lán)根多糖對特異性及非特異性、體液免疫、細(xì)胞免疫均起到一定促進(jìn)作用［21］。腹腔注射板藍(lán)根多糖50 mg·kg-1可顯著促進(jìn)小鼠免疫功能，如能明顯增加正常小鼠脾重、白細(xì)胞總數(shù)和淋巴細(xì)胞數(shù)，對氫化可的松所（HC）致免疫功能抑制小鼠脾指數(shù)、白細(xì)胞總數(shù)和淋巴細(xì)胞數(shù)的降低有明顯對抗作用；顯著增強(qiáng)正常及環(huán)磷酰胺所致免疫抑制小鼠的遲發(fā)性過敏反應(yīng)；增強(qiáng)正常小鼠外周血淋巴細(xì)胞ANAE陽性百分率，并明顯對抗HC所致的免疫抑制作用；促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)功能，增加小鼠靜注碳粒廓清速率。多形核白細(xì)胞（PMN）吞噬和殺滅細(xì)菌的過程是機(jī)體的一項重要免疫功能，化學(xué)發(fā)光是PMN呼吸爆發(fā)的標(biāo)志，產(chǎn)生多種具有強(qiáng)烈殺菌作用的氧活性基團(tuán)，板藍(lán)根低極性流分對PMN化學(xué)發(fā)光有雙向免疫活性，在低濃度時具有激活作用，在高濃度時具有抑制作用［22］。

2.5 抗癌作用在體外細(xì)胞培養(yǎng)時，板藍(lán)根注射液（φ=50%）對小鼠Friend病毒感染后誘導(dǎo)產(chǎn)生的3CL-8細(xì)胞有強(qiáng)大的殺傷作用，其最低作用劑量可達(dá)1∶80；小鼠注射3CL-8細(xì)胞處皮下注射50%板藍(lán)根0.2 ml，1次/d，連續(xù)7 d，對實體瘤有一定的治療作用，但腹腔注射本品對3CL-8細(xì)胞無殺傷作用，板藍(lán)根中的有效成分靛玉紅是抗腫瘤的主要活性物質(zhì)［23］。

3 質(zhì)量控制研究 板藍(lán)根中所含化學(xué)成分較多，其中抗病毒成分還不是十分明確，因此國內(nèi)各專家學(xué)者對板藍(lán)根藥材及其制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的爭議很大。目前主要有將下列成分作為質(zhì)量的控制的方法。

3.1 以靛藍(lán)、靛玉紅為指標(biāo)性成分的質(zhì)量研究以靛藍(lán)、靛玉紅為指標(biāo)性成分的質(zhì)量研究的報道較多，測定方法主要有高效液相色譜法、薄層掃描法和紫外分光光度法等。羅巍偉等［24］將板藍(lán)根用70%乙醇提取，揮去乙醇后用氯仿萃取，采用HPLC法測定板藍(lán)根的提取物中靛藍(lán)和靛玉紅的含量，色譜條件：Dikma DiamonsilTM C18色譜柱，流動相為甲醇-醋酸銨-醋酸(70∶30∶1)，流速1ml·min-1，檢測波長280 nm，柱溫40℃。外標(biāo)法定量，靛藍(lán)進(jìn)樣量在0.015 2～0.304 μg，靛玉紅進(jìn)樣量在0.016 6～0.331 2范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。測得樣品中靛藍(lán)平均含量為8.820 μg·g-1，RSD=1.05%，平均回收率為97.3%；靛玉紅平均含量為1.862 μg·g-1，RSD=1.26%，平均回收率為96.6%。鄧慧敏等［25］采用雙波長掃描法測定靛玉紅的含量，將樣品用定量毛細(xì)管吸取10 μl，對照品溶液1，3 μl分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，用苯-氯仿-丙酮（5∶4∶1）為展開劑展開，采用雙波長反射法線性掃描，λs=540 nm，λR=700 nm，測定樣品及對照品峰面積值，用外標(biāo)兩點(diǎn)法計算靛玉紅的平均含量為1.45%。另有程力惠等［26］研究在薄層色譜板上采用“展開-挖點(diǎn)”法取樣，用紫外分光光度法測定板藍(lán)根中靛玉紅含量，測得靛玉紅含量為7.756 4 μg·g-1，回收率達(dá)96.58%。由于板藍(lán)根制劑多為水煎煮提取，靛藍(lán)、靛玉紅成分在水中溶解度較小，且有文獻(xiàn)報道板藍(lán)根中的靛藍(lán)、靛玉紅主要存在于殘留的葉柄、葉片和根莖中，根中含量很低［27］，因此將靛藍(lán)、靛玉紅作為板藍(lán)根的指標(biāo)成分進(jìn)行控制仍需進(jìn)一步探討。

3.2 以多糖為指標(biāo)性成分的質(zhì)量研究板藍(lán)根多糖具有免疫調(diào)節(jié)作用，對特異性免疫和非特異性免疫、體液免疫均有一定的促進(jìn)作用，因此，板藍(lán)根多糖也是評價板藍(lán)根質(zhì)量的一個指標(biāo)。魯建江等［28］用水提醇沉法提取板藍(lán)根多糖，用酚-硫酸比色法測定多糖含量，測得板藍(lán)根中多糖含量0.809 9%，平均回收率為98.74%，RSD=1.86%(n=5)，結(jié)果顯示板藍(lán)根中多糖含量不是很高。而盛家榮等［29］運(yùn)用硫酸-蒽酮比色法測定板藍(lán)根多糖含量，測得南板藍(lán)根中多糖含量3.26%，北板藍(lán)根中多糖含量達(dá)12.76%，從而說明北板藍(lán)根的多糖含量較南板藍(lán)根高。盡管對板藍(lán)根總多糖有一定的研究，但到目前為止，尚未分離得到板藍(lán)根的單體成分，也沒有板藍(lán)根多糖組成的報道，因此，以板藍(lán)根多糖作為質(zhì)控指標(biāo)尚缺乏基礎(chǔ)。

3.3 以氨基酸為指標(biāo)性成分的質(zhì)量研究氨基酸為板藍(lán)根中含量較高的一類成分，達(dá)8.7%以上［30］，《中國藥典》中將氨基酸類成分進(jìn)行薄層色譜和化學(xué)反應(yīng)鑒別作為板藍(lán)根質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)之一，但無含量測定項。何軼等［31］采用異硫氰酸苯酯柱前衍生法，用高效液相色譜法測定了板藍(lán)根中精氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、脯氨酸、纈氨酸等5種游離氨基酸含量。結(jié)果顯示，在13批樣品中，精氨酸、脯氨酸含量較高，其中來源于河北安國的樣品含精氨酸最高達(dá)6.35%，來源于北京的樣品含脯氨酸最高達(dá)4.57%，此法不需要專門的氨基酸分析儀，操作簡便，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

3.4 以有機(jī)酸為指標(biāo)性成分的質(zhì)量研究現(xiàn)代研究表明，中藥材的清熱解毒功效主要集中于其有效成分的抗內(nèi)毒素作用和抗病原微生物作用，藥理實驗已證實，板藍(lán)根中有機(jī)酸類成分具有明顯的抗菌、抗內(nèi)毒素作用。金薇等［32］以電位滴定法測定復(fù)方板藍(lán)根沖劑中總有機(jī)酸含量，5批樣品平均總有機(jī)酸含量為218.08 mg/袋，馬莉等［33］對板藍(lán)根中有機(jī)酸類成分進(jìn)行分析，采用酸堿滴定法測定總有機(jī)酸含量為13.0%，RSD 2.0%，反相高效液相色譜法測定板藍(lán)根提取物中水楊酸含量為0.22%，RSD1.6%，并建議將有機(jī)酸作為板藍(lán)根提取物質(zhì)量控制的依據(jù)。

3.5 指紋圖譜控制質(zhì)量的研究近年來，中藥指紋圖譜發(fā)展迅速，指紋圖譜是反映中藥多種成分特點(diǎn)的一種質(zhì)量控制技術(shù)，也是中藥現(xiàn)代化的一個重點(diǎn)內(nèi)容。板藍(lán)根及其制劑的質(zhì)量很難找到一個指標(biāo)性成分進(jìn)行有效地控制，多成分綜合評價的質(zhì)量控制體系較為客觀。曾令杰等［34］研究了板藍(lán)根顆粒氨基酸部位的指紋圖譜，由于氨基酸沒有紫外吸收，以DNFB柱前衍生化的HPLC法，BDSC18色譜柱（4.6 mm×250 mm）為分析柱、pH 6.4的醋酸鈉緩沖液-乙腈（95∶5）梯度洗脫，紫外365 nm下建立氨基酸部位的指紋圖譜，以角余弦系數(shù)和距離系數(shù)來計算不同批次的樣品之間的質(zhì)量一致程度，結(jié)果顯示精密度、穩(wěn)定性和重現(xiàn)性良好，此方法可有效地判斷和控制板藍(lán)根的質(zhì)量及其工藝過程的穩(wěn)定性。

4 提取工藝研究

以板藍(lán)根為原料的中成藥制劑較多，如板藍(lán)根顆粒劑、板藍(lán)根注射液、板藍(lán)根片、清開靈注射液、抗病毒口服液等，所有這些制劑均是以水提取的水溶性成分作為有效部位而制成。《中國藥典》規(guī)定的板藍(lán)根顆粒的生產(chǎn)工藝也是采用水煎醇沉法。張建軍等［35］用雙波長薄層掃描法測定了板藍(lán)根水煮物、水煮物殘渣、95%乙醇提取物、50%乙醇提取物中靛藍(lán)和靛玉紅的含量，結(jié)果為醇提法中靛藍(lán)、靛玉紅的含量很高，水煮法提出的靛藍(lán)、靛玉紅的含量甚少，幾乎全留存于殘渣中。陳玉生等［36］通過用50%～90%乙醇（梯度10%）對提取靛玉紅的比較，發(fā)現(xiàn)70%乙醇對靛玉紅的提取效率最高，建議新工藝以70%乙醇作溶劑提取。

5 結(jié)語

近年來對板藍(lán)根的研究比較多，特別是板藍(lán)根對SARS的防治作用肯定后，再次成為人們研究的焦點(diǎn)和熱點(diǎn)，隨著中藥現(xiàn)代化的推進(jìn)，許多療效確切的名優(yōu)中藥的二次開發(fā)研究進(jìn)展迅速，目前板藍(lán)根抗菌、抗病毒等活性成分不是十分清晰，其質(zhì)量控制究竟以何種成分為測定標(biāo)準(zhǔn)，也存在一定的分歧，為了更有效地利用這一資源，有必要進(jìn)行深入的研究與開發(fā)。

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