利用RNA干擾技術沉默稻縱卷葉螟幾丁質合成酶A基因
摘要：稻縱卷葉螟(Cnaphalocrocis medinalis)是一種主要的水稻害蟲,幾丁質合成酶是昆蟲體內幾丁質合成通路中的一個關鍵酶,在昆蟲生長發育中具有重要作用,是控制害蟲的理想靶標。本文采用RNA干擾(RNAi)技術,以稻縱卷葉螟幾丁質合成酶A基因(CmCHSA)為靶標,設計兩個靶位點CmCHSA-I和CmCHSA-II,在體外分別合成其雙鏈RNA(dsRNA),用顯微注射法導入3齡幼蟲體內,然后通過表型觀察和熒光定量PCR(RT-q PCR)檢測干擾效應。結果表明,注射兩種dsRNA后縱卷葉螟對水稻的取食明顯下降,生長發育阻滯,蟲體變小變黑和畸形,有的出現死亡。RT-q PCR表明,注射CmCHSA-I和CmCHSA-II兩種dsRNA在96 h后,CmCHSA的表達量相比對照分別下降了59%和64%。注射CmCHSA-I和CmCHSA-II兩種dsRNA 7 d后,稻縱卷葉螟的死亡率分別為80%和83.33%,與對照組相比,分別增加了66.67%和70%。本研究用注射法RNAi技術成功實現了對稻縱卷葉螟幾丁質合成酶A基因的沉默,為利用該技術研究昆蟲基因的功能,以及通過轉基因RNAi技術防治稻縱卷葉螟奠定了基礎。
注: 保護知識產權,如需閱讀全文請聯系貴州大學學報雜志社
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