【關(guān)鍵詞】 鼻咽腫瘤

關(guān)鍵詞: 鼻咽腫瘤;形態(tài)學(xué);體視學(xué)

摘 要:目的 探討鼻咽癌發(fā)生發(fā)展過程中形態(tài)學(xué)變化規(guī)律. 方法 應(yīng)用體視學(xué)技術(shù)測算鼻咽癌發(fā)生發(fā)展過程中不同時期鼻咽上皮細胞胞質(zhì)泡狀系統(tǒng)（ER&GO）和張力原纖維/微絲（TMF&TF）的數(shù)量，并進行統(tǒng)計學(xué)比較. 結(jié)果 胞質(zhì)泡狀系統(tǒng)和張力原纖維/微絲的數(shù)量在不同鼻咽上皮細胞中數(shù)量不同，在統(tǒng)計學(xué)有顯著性差異. 結(jié)論 鼻咽上皮在逐漸癌變過程中，向鱗狀上皮分化的趨勢加強，而向柱狀上皮分化的趨勢減弱，這一形態(tài)改變具有病理學(xué)意義.

Keywords: nasopharyngeal neoplasms; morphology;sterololgy

Abstract:AIM To study the morphological changing law of develepment of nasopharyngeal carcinoma.METHODS Quantity sterological parameters of ER&Go and TMF&TF of different periodical nasopharyngeal epithelia cells were measured analysed and calculated by sterological and statisti-cal method.RESULTS Parameters were different statisti-cally among different periodical nasopharyngeal epithelia cells.CONCLUSION During the canceyation courses of na-sopharyngeal epithelia，epithelia squamous maturial tredency becomes strengther and columnar maturial tredency becomes weeker，which has pathological significance.

0 引言

許多病理學(xué)和流行病學(xué)的研究表明，鼻咽癌（NPC）的發(fā)生是一個多因素、多階段的形態(tài)發(fā)生過程.中山醫(yī)科大學(xué)通過動物模型觀察NPC發(fā)生過程病理形態(tài)改變及NPC癌旁上皮組織病變（往往是不典型增生/化生的組織所在）的觀察分析，提出NPC的發(fā)生存在“由正常鼻咽上皮→不典型增生/化生→NPC”的譜系發(fā)展的觀點［1］ .但在這一過程中，人鼻咽部的假復(fù)層纖毛柱狀上皮是如何轉(zhuǎn)變?yōu)轺[癌的，則是人們關(guān)注的問題，因為臨床所見的NPC絕大多數(shù)是低分化鱗狀細胞癌，且發(fā)生位置多位于人鼻咽部的柱狀上皮披覆區(qū)域，而人鼻咽部主要披覆假復(fù)層纖毛柱狀上皮［2］ .過去有研究曾以鼻咽上皮細胞在超微結(jié)構(gòu)形態(tài)上的分化特征標志為線索，探討NPC的上述問題，但都以定性描述為主，所討論的分化標志分別是①胞質(zhì)張力微絲或張力原纖維（TMF:tonomi-crofilamen&TF:tonofiber;向鱗狀上皮分化的標志）;②胞質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體等泡狀系統(tǒng)（ER:endoplasmic reticulum&GO:golgi complex;向柱狀上皮分化的標志）［3，4］ ，思路設(shè)計和分析有一定的合理性和科學(xué)性.本研究借鑒這一思路，應(yīng)用體視學(xué)技術(shù)，按前述的NPC的譜系發(fā)生發(fā)展的觀點，通過對正常鼻咽上皮、NPC癌旁上皮和NPC組織三組NPC形態(tài)發(fā)生過程中的上皮細胞超微結(jié)構(gòu)分化特征標志（TMF&TF，ER&G0）的定量測試與比較，從量化角度探討NPC形態(tài)發(fā)生的規(guī)律.

1 材料和方法

1.1 病例

南方醫(yī)院就診病例.所選標本是臨床鼻咽癌診室醫(yī)師鉗取（鼻咽鏡下）的新鮮鼻咽癌組織，共取20例鼻咽癌患者的正常鼻咽上皮、鼻咽癌旁上皮、鼻咽癌組織，共計20×3=60個標本.癌組織經(jīng)病理活檢均為低分化鱗癌.要求被取活檢的鼻咽癌患者均未經(jīng)任何抗腫瘤治療（放、化療），且為臨床首次被確診的鼻咽癌患者.

1.2 標本

標本采集后，立即放入25mL?L-1 的戊二醛固定液中固定保存.鉗取的標本切取部分（對應(yīng)剩余部分用戊二醛固定）做石蠟包埋切片，明確病理診斷.光鏡下觀察為預(yù)期標本者（指鼻咽正常柱狀上皮、癌旁不典型增生/化生上皮、癌上皮），再將上述對應(yīng)剩余部分作半薄切片定位.如果光鏡觀察結(jié)果為間質(zhì)組織或受擠壓變形的組織，則放棄處理，重新按要求取材.全部癌組織經(jīng)病理活檢均為低分化鱗癌.

1.3 超薄切片

擬包埋的電鏡標本隨機取自固定好的組織標本塊.每例的正常組織、癌旁組織和癌組織各取5塊.包埋好的標本再作半薄切片和光鏡觀察，為下一步的超薄切片定位目標組織.需要定位組織包括正常鼻咽上皮組織，癌旁不典型增生/化生組織和標本內(nèi)的癌組織，半薄切片為2.0μm，在LKB超薄切片機上切制.用LKB型超薄切片機制備超薄切片，200目銅網(wǎng)撈片，醋酸雙氧鈾-硝酸鉛雙重染色，干燥后用JEM-1200EX型透射電鏡觀察.

1.4 超微視野的隨機確定與體視學(xué)測試

每個組織塊在定位的基礎(chǔ)上進行超薄切片并隨機選一個含有目標組織的超薄切片進行電鏡觀察（15000倍）.每個超薄切片隨機選5個胞質(zhì)視野進行觀察和拍照，即每個標本共得5×5=25幅照片，以細胞為參照系進行測試，再按體視學(xué)原理和測算公式求得每例標本的形態(tài)定量體視學(xué)參數(shù)值 ［5］ ，進行統(tǒng)計比較處理.本實驗所用方網(wǎng)測試系統(tǒng)系手法繪制，是規(guī)格為90mm×120mm×5mm的方網(wǎng)測試系統(tǒng)（測試點間距d=5mm），測試系統(tǒng)復(fù)印在透明膠片上，然后將其直接覆蓋在電鏡照片上進行測試.用點計數(shù)、交點計數(shù)和粒子截面計數(shù)法進行測試.

1.5 體視學(xué)參數(shù)選擇［5］

選用的體視學(xué)參數(shù)包括:TMF&TF的體積密度Vv，長度密度Lv;ER&Go的體積密度Vv，表面積密度Sv，表面積與體積比Rsv.Vv，Sv，Lv的測試參照系取被測試細胞器所在對應(yīng)細胞的胞質(zhì).照片放大倍數(shù)均為15000倍.

1.7 統(tǒng)計學(xué)處理

采用Spss6.0軟件包，對三組上皮細胞質(zhì)TMF&TF，ER&Go所測算的體視學(xué)參數(shù)值進行單因素分析和組間的兩兩比較分析（LSD）法［6］ .

2 結(jié)果

正常鼻咽粘膜上皮，鼻咽癌旁粘膜上皮、鼻咽癌上皮細胞質(zhì)TMF&TF的體視學(xué)參數(shù)（Lv，Vv）和胞質(zhì)泡狀系統(tǒng)（ER&Go）的體視學(xué)參數(shù)（Vv，Sv，Rsv）的值經(jīng)過統(tǒng)計分析比較，有顯著性差異（P<0.05）.各組所測得的體視學(xué)參數(shù)值及各組有關(guān)體視學(xué)參數(shù)值的比較分別見Tab1，2.通過比較，可以發(fā)現(xiàn):①胞質(zhì)TMF&TF的Vv，Lv二個體視學(xué)參數(shù)值按正常鼻咽上皮→鼻咽癌旁上皮→鼻咽癌組織的順序逐漸增大;②胞質(zhì)泡狀系統(tǒng)（ER&Go）的Vv，Sv二個體視學(xué)參數(shù)值按正常鼻咽上皮→鼻咽癌旁上皮→鼻咽癌組織的順序逐漸減小，Rsv的參數(shù)值變化無明顯規(guī)律.表1 正常鼻咽上皮、鼻咽癌旁上皮、鼻咽癌上皮體視學(xué)參數(shù)比較（略）表2 正常鼻咽上皮、鼻咽癌旁上皮、鼻咽癌上皮體視學(xué)參數(shù)比較（略）

3 討論

正常鼻咽粘膜上皮大部分由假復(fù)層纖毛柱狀上皮披覆，只有小部分才是由鱗狀上皮覆蓋.Ali等［2］ 通過法醫(yī)解剖和病理觀察注意到，鼻咽頂后壁的上3/4側(cè)壁及下壁的表面及隱窩均為假復(fù)層纖毛柱狀上皮組織，鼻咽頂后壁的1/4則為非角化的鱗狀上皮所披覆，在柱狀上皮鱗狀上皮的交界處則是過渡性上皮.但臨床所見的絕大多數(shù)鼻咽癌多位于柱狀上皮披覆區(qū)域，且多屬于低分化的鱗狀細胞癌.這樣的結(jié)果提示鼻咽部假復(fù)層纖毛柱狀上皮的鱗狀化生與鼻咽上皮的癌變過程很可能緊密相關(guān).這一組織改變在微觀結(jié)構(gòu)是如何完成的，我們通過對鼻咽上皮組織超微結(jié)構(gòu)的定量研究探討這一問題. Vv，Sv，Lv是體視學(xué)的三個相對參數(shù)，分別表示被測試對象的體積、表面積、長度在單位參照系體積中的數(shù)量，用百分數(shù)表示.當(dāng)細胞癌變時，核相對變大，胞質(zhì)的空間體積相對變小，使得Vv，Sv，Lv的分母表現(xiàn)減小的趨勢，惡性腫瘤細胞中細胞器數(shù)量常較來源細胞少.當(dāng)胞質(zhì)TMF&TF（分子值）減少的趨勢小于胞質(zhì)相對空間體積（分母值）的減小趨勢時，TMF&TF的Vv，Lv值就表現(xiàn)遞增的趨勢.而胞質(zhì)ER&Go的情況可能正好相反，所以表現(xiàn)為遞減的趨勢.Rsv是體視中的形狀參數(shù)，用于定量表達結(jié)構(gòu)的形狀變化，對于反映細胞器形態(tài)及其功能有參考價值，如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，高爾基體增殖擴張時，Rsv會變小.

以往的鼻咽癌超微結(jié)構(gòu)研究［3，4］ 表明，以下三種細胞器的變化對于分析鼻咽癌的分化跡向與類型有重要的參考價值，包括①張力原纖維/微絲;②胞質(zhì)管泡狀系統(tǒng);③細胞連接等.①、②分別標志著上皮細胞向鱗狀上皮和柱狀上皮的分化趨勢，我們選擇了①、②作為定量分析的標志.

本結(jié)果表明，在鼻咽上皮癌變的過程中，上皮組織細胞質(zhì)中TMF&TF的相對量越來越多，ER&Go的相對量越來越弱，提示上皮細胞越越來表現(xiàn)出鱗狀上皮細胞的分化特征;而柱狀上皮細胞分化的特征越來越弱，這樣的分化特點提示鼻咽部正常柱狀上皮的鱗狀化生在鼻咽上皮的逐漸癌變過程中是一個主要的形態(tài)改變過程，是導(dǎo)致臨床低分化鱗癌多見的主要原因.這一組織改變過程也有可能是鼻咽上皮演變成低分化鱗癌前的一個必需的病理過程.

正常人體某些部位組織（如呼吸道、生殖道）的柱狀上皮受慢性刺激，容易發(fā)生鱗狀化生，但不一定發(fā)生癌變，這是上皮組織形態(tài)改變所允許的，是機體適應(yīng)外界刺激的結(jié)果.但當(dāng)刺激過度，達到可以導(dǎo)致上皮細胞癌變時，上皮細胞有可能先發(fā)生不典型增生，再發(fā)生鱗狀化生;也有可能先發(fā)生鱗狀化生，再發(fā)生不典型增生;或者兩者同時發(fā)生，我們傾向于鼻咽上皮細胞的鱗狀化生與上皮細胞的不典型改變是同時發(fā)生的推測.現(xiàn)有的研究發(fā)現(xiàn)，EB病毒的編碼蛋白LMP-1在體內(nèi)能使上皮細胞分化發(fā)生障礙，并發(fā)生明顯形態(tài)學(xué)變化，因為大部分鼻咽癌都是未分化或分化不良的，估計LMP-1在鼻咽上皮癌變早期起主要作用［7，8］ ，但EB病毒轉(zhuǎn)染與鼻咽上皮的鱗狀化生到底是什么關(guān)系，目前還不得而知，研究這個問題，對于揭示鼻咽癌的癌變機制具有重要意義.

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