【關(guān)鍵詞】 鼻咽腫瘤

關(guān)鍵詞: 鼻咽腫瘤;預(yù)后;增殖細(xì)胞核抗原;AgNoRs

1 材料和方法

1.1 材料 選取南方醫(yī)院耳鼻咽喉科1980/1993鼻咽部活檢組織的存檔蠟塊共計(jì)100例.病理診斷為鼻咽粘膜炎癥22例，鼻咽癌78例，其中病理分化Ⅰ級者19例，分化Ⅱ級者20例，分化Ⅲ級者20例，泡狀核細(xì)胞癌19例.

1.2 方法 免疫組化染色采用LAS-SP方法，第1抗體為鼠抗人PCNA單克隆抗體PC10（美國ZYMED公司產(chǎn)品），工作液稀釋度1∶200;第2，第3抗體采用MOSP Kit試劑盒（美國ZYMED公司產(chǎn)品），工作液均稀釋為1∶300.每例染片3張，包括陰性對照，PCNA染色并進(jìn)行蘇木精染色，復(fù)染結(jié)果用于計(jì)數(shù)增殖指數(shù).AgNoRs染色選用高進(jìn)介紹的一步法［1，2］ .PCNA染色結(jié)果判定是選擇切片中最有代表性的視野.多例計(jì)數(shù)1000個(gè)癌細(xì)胞中PCNA的陽性細(xì)胞核數(shù)，按下列合成計(jì)算增殖指數(shù)（PI）:增殖指數(shù)（PI）=（陽性細(xì)胞數(shù)/1000）×100%.炎癥粘膜中不計(jì)數(shù)炎性細(xì)胞和淋巴結(jié)反應(yīng)中心細(xì)胞的陽性核數(shù).PI≤0.05者視為陰性，在本研究中只對PI>0.05者進(jìn)行討論.AgNoRs染色后，應(yīng)用LUZEX-F型圖像分析系統(tǒng)，40倍鏡下測定并打印100個(gè)癌細(xì)胞核內(nèi)所含的AgNoRs總數(shù)，不同大小直徑的顆粒數(shù)（C≥2.5μm按5個(gè)顆粒換算），顆粒總面積（AgNoRs總面積/100核）的值.

2 結(jié)果

2.1 細(xì)胞增殖指數(shù)（PI）、AgNoRs計(jì)數(shù)、圖像分析結(jié)果 根據(jù)NPC病理改變將NPC病例分為5個(gè)組，PI，AgNoRs計(jì)數(shù)、圖像分析結(jié)果各組有差異（表1）.

表1 炎癥鼻咽粘膜與NPC各型PI，AgNoRs計(jì)數(shù)、圖像分析結(jié)果 （略）

統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，病理分化Ⅰ級者、分化Ⅱ級者與分化Ⅲ級者各組之間PI差異有顯著性，即隨病理上惡性度的增高，PI亦增大.但泡狀核細(xì)胞癌與病理分化Ⅲ級者之間無差別，病理上其惡性度與分化Ⅲ級者之間也很相近.

2.2 NPC組織中PCNA陽性細(xì)胞的分布情況 PCNA呈棕褐色的陽性反應(yīng)，絕大多數(shù)PCNA陽性染色定位于細(xì)胞核，呈棕褐色顆粒或彌漫性分布，胞質(zhì)幾乎無表達(dá)，粘膜炎癥及陰性對照無表達(dá).鼻咽癌分化Ⅰ級者陽性細(xì)胞散在分布，棕色顆粒較均勻地分布于細(xì)胞核內(nèi)，但染色較淺;分化Ⅱ級者陽性細(xì)胞數(shù)目較多，染色較深，棕色顆粒在核內(nèi)分布也較均勻;分化Ⅲ級者陽性細(xì)胞數(shù)目多，分布密集，染色深;泡狀核細(xì)胞癌陽性細(xì)胞表達(dá)較多，但著色淺，棕色顆粒在核內(nèi)呈網(wǎng)狀分布.

2.3 PI指數(shù)與鼻咽癌預(yù)后的關(guān)系 我們將每位患者（均行放射治療）追蹤隨訪資料整理分析，其中有46例隨訪到5a，通過壽命表法計(jì)算出5a生存率，病理分化Ⅰ級者為75%，分化Ⅱ級者為73%，分化Ⅲ級者為61%，泡狀核細(xì)胞癌組為65%.統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，細(xì)胞增殖指數(shù)與5a生存率呈負(fù)相關(guān)，即細(xì)胞增殖指數(shù)高，5a生存率則降低（P<0.01）.

2.4 AgNoRs染色圖像分布情況 鼻咽部炎癥粘膜組織的AgNoRs形態(tài)可見核仁區(qū)個(gè)別AgNoRs團(tuán)塊，細(xì)胞核中銀染顆粒分布少而且直徑很小;鱗癌細(xì)胞核AgNoRs顆粒甚為豐富，散在于核內(nèi)，大小不等形狀不規(guī)則，有的甚至形成聚集區(qū)，多以核仁型和彌散型為主，隨細(xì)胞分化程度的逐步降低，胞內(nèi)AgNoRs顆粒≥2.5μm的逐步增多;泡狀核細(xì)胞癌呈彌散分布，且表達(dá)量較鱗癌相對較少.隨統(tǒng)計(jì)結(jié)果可以看出，Ag-NoRs計(jì)數(shù)與總面積隨分化的增高而減少. 2.5 AgNoRs顆粒計(jì)數(shù)結(jié)果與NPC預(yù)后關(guān)系 分析Ag-NoRs計(jì)數(shù)與NPC預(yù)后關(guān)系隨訪資料，其中有40例記錄到5a，包括目前患者狀況，計(jì)算5a生存率，病理分化Ⅰ級者72%，分化Ⅱ級者69%，分化Ⅲ級者為60%，泡狀核細(xì)胞癌組為63%.統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，AgNoRs計(jì)數(shù)與總面積與5a生存率呈負(fù)相關(guān)，即AgNoRs計(jì)數(shù)越大，5a生存率越低（P<0.01）.

上述結(jié)果表明NPC中PCNA的表達(dá)與AgNoRs計(jì)數(shù)在判定NPC的分化程度與預(yù)后方面存在明顯相關(guān)性.

3 討論

PCNA又稱周期素，是一種30ku酸性無組蛋白的細(xì)胞核多肽，其免疫反應(yīng)多局限于增殖細(xì)胞的核內(nèi)，胞質(zhì)很少或沒有，已被證明它的合成與增殖細(xì)胞的增殖周期有關(guān)，G期在核內(nèi)表達(dá)逐漸增多，S期達(dá)高峰，而G/M期很少

［3，4］ .本研究亦證實(shí)PCNA幾乎只表達(dá)于NPC的細(xì)胞核內(nèi)，且不是所有的癌細(xì)胞均表達(dá)，從增殖指數(shù)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果可以看出，其表達(dá)率與病理分級呈正相關(guān)，即病理上惡性度越高，則PCNA表達(dá)的陽性細(xì)胞數(shù)量越多.AgNoRs作為調(diào)節(jié)rDNA轉(zhuǎn)錄活動的蛋白，其計(jì)數(shù)增加與細(xì)胞增殖活躍、DNA倍體增加及rDNA轉(zhuǎn)錄活性有關(guān)［5，6］ .多數(shù)作者認(rèn)為，AgNoRs計(jì)數(shù)的主要臨床意義在于區(qū)分良、惡性病變，而我們的結(jié)果表明AgNoRs計(jì)數(shù)對于區(qū)分NPC病理惡性度有統(tǒng)計(jì)學(xué)的相關(guān)性.對于泡狀核細(xì)胞癌的PCNA表達(dá)與AgNoRs計(jì)數(shù)與未分化癌的不一致，可能與其病理形態(tài)有關(guān)，因其核的大部分呈空泡狀，無實(shí)質(zhì)之故，不過在臨床預(yù)后上，許多病例已說明，泡狀核細(xì)胞癌預(yù)后都要較未分化癌好，從側(cè)面說明泡狀核細(xì)胞癌惡性度要較未分化癌弱.本實(shí)驗(yàn)表明:NPC的PCNA表達(dá)、AgNoRs染色圖像分析的結(jié)果與NPC的分化及預(yù)后有明顯的相關(guān)性，這在PI與圖像分析后的AgNoRs計(jì)數(shù)和AgNoRs總面積在NPC的組織分型，分化程度以及預(yù)后等方面都得到證實(shí).二者不僅可用于NPC惡性度的判別，而且對NPC的預(yù)后亦有提示作用.

［1］黃 進(jìn)，周曉軍，張?zhí)┖蚭t al.AgNoRs染色影響因素的探討［J］.臨床與實(shí)驗(yàn)病理雜志，1990;6（2）:210-212.

［2］倪燦嶸.免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)新技術(shù)及應(yīng)用［M］.北京:科學(xué)技術(shù)出版社，1993:131-189.

［3］錢 翔.增殖細(xì)胞的三種免疫化學(xué)探針及在腫瘤病理研究中的應(yīng)用［J］.國外醫(yī)學(xué)生理病理科學(xué)與臨床分冊，1991;11（5）:198-203.

［4］Waseen NH，Lane DP.Antibody analysis of the proliferating cell nuclear antigen（PCNA）.Structural conservation and de-tection of anucleolar form ［J］.J Cell Sci，1990;96（5）:121-130.

［5］Boldy DAR，Crocker J，Ayres JG.Application of the AgNoR method to cell imprints of lymphoid tissue ［J］.J Pathol，1989;157（6）:75-86.

［6］Ruschoff J，Plate KH，Bittinger A.Application of the AgNoR method to cell imprints ［J］.J Pathol，1989;158（9）:333-342.