作者：周春麗， 蘇虎， 王德解， 李玉萍

【摘要】 目的提取馬齒莧中多糖、生物堿、多不飽和脂肪酸和黃酮有效成分及定量，為研制治療糖尿病的功能性食品提供依據(jù)。方法分別采用不同有機溶劑提取方法提取有效成分。結果幾種有效物質的含量由大到小依次為多糖、生物堿、黃酮、多不飽和脂肪酸。結論南昌地區(qū)馬齒莧中含有以上4種有效成分且生物堿含量比其他地區(qū)稍高。

【關鍵詞】 馬齒莧 有效成分 提取

Abstract：ObjectiveTo extract and determine the contents active ingredients from polysaccharide， alkaloids， flavonoid material and polyunsaturated fatty acid of Portulace oleracea L. MethodsThe active ingredients were extracted in different organ solvent respectively. ResultsThe result showed that several active ingredients content existed in Rortulace olercaeal. The content order was subsequently polysaccharide， alkaloids， flavoinvid material， and polyunsaturated fatty acid. ConclusionThe result shows that four active ingredients really exist in Portulace oleracea L. in Nanchang and alkaloids in Nanchang are higher than the ones in other area.

Key words：Portulace oleracea L.; Active ingredients; Extraction 馬齒莧Portulaca oleracea L.屬馬齒莧科(Portulacaceae)，一年生肉質草本植物，是我國古老的菜藥兼用植物，在我國大部分地區(qū)均有分布，又名長命菜、五行草、瓜子菜、麻繩菜、五色莧、馬食菜等。馬齒莧以其豐富的營養(yǎng)、獨特的藥理作用以及菜藥兼用特性，早已被民間廣泛應用于治療熱毒血痢、癰腫、疔瘡、蛇蟲咬傷和便血等疾病［1，2］，日益受到廣泛的研究。現(xiàn)代科學研究也表明，馬齒莧含有大量維生素、礦物質、不飽和脂肪酸、微量元素和豐富的檸檬酸、蘋果酸、氨基酸、去甲腎上腺素、多巴胺、強心苷、蒽醌類、香豆素、黃酮、生物堿等多種活性成分［3～5］，具有降血脂、降血糖、抗衰老、消炎抑菌、增強免疫等多種保健功能和疾病治療作用［5～7］，被國家衛(wèi)生部認定為藥食同源的保健功能食品之一，具有廣闊的開發(fā)前景。本實驗對馬齒莧有效成分進行提取和定量分析，以期為治療糖尿病的功能性食品的研制提供依據(jù)。

1 器材與方法

1.1 儀器與試劑

LAMBDA 35 型紫外分光光度計，Heraeus 烘箱，Philips Comfort粉碎機，SORVALL Evolution RC型離心機，磁力攪拌器（SI VORTEX），通風櫥，安捷倫6820型氣相色譜、旋轉蒸發(fā)儀(RE-52AA)。 石油醚，氫氧化鉀，無水乙醇，尿素，10%硫酸，氨水，無水乙醇，氯仿均為國產(chǎn)分析純。

1.2 材料馬齒莧采自江西南昌一帶，將其于烘箱中在60℃烘干至恒重，粉碎，密封備用。

1.3 步驟

1.3.1 馬齒莧多糖的提取葡萄糖標準曲線的制作：蒽酮硫酸法測定糖含量，標準曲線方程：Y=0.584 3X+0.010 3(R2=0.997 1)。

馬齒莧多糖的提取和測定［8］：準確稱取馬齒莧粉末100 g，按照1:30(W:V)加入蒸餾水，水煎煮3次（1.5，1.0，0.5 h），過濾，合并3次提取液，濃縮提取液，冷卻后4 000 r/min離心15 min，取上清，以無水乙醇調(diào)制終濃度為75%，4℃靜置過夜，沉淀物再分別以無水乙醇、丙酮、乙醚回流洗滌，得灰白色粗多糖粉末，以適量蒸餾水溶解粉末，置4℃冰箱備用。

1.3.2 馬齒莧多不飽和脂肪酸的提取亞麻酸甲酯標準曲線的制作：利用安捷倫6820型氣相色譜制作標準曲線，采取標準品內(nèi)標法。氣相色譜條件：前進樣口溫度220℃，前檢測器溫度300℃，后檢測器溫度275℃，柱溫150℃保持時間1 min，以15℃/min升溫至200℃，以2℃/min升溫至250℃，保持5 min。載氣（N2）20ml/min，輔助氣（H2）30 ml/min，空氣（助燃氣）350 ml/min，進樣量1μl。標準曲線方程：Y=2 196.9X+1 305.4(R2=0.981 6)。 馬齒莧不飽和脂肪酸的提取和測定［9，10］：稱取馬齒莧干粉100 g，按1∶4的體積比例加入400 ml石油醚，室溫攪拌2 h，4 000 r/min，4℃離心15 min，取上清液，揮發(fā)盡石油醚，得黏稠狀褐色油狀物，稱重，稱取1/4倍于油狀物的KOH，以3∶80（W/V）的比例溶于無水乙醇中。加至油狀物中，攪拌，皂化反應45 min。再在4℃反應60 min。過濾，得透明溶液，濃縮回收乙醇，使乙醇含量不大于50%。加入等體積的蒸餾水，用濃鹽酸調(diào)至出現(xiàn)分層（pH 2.0左右）為止，取上層油相。70℃水浴制備含有一定比例（20%）尿素的乙醇溶液。按2.4倍濾液體積的比例加入油相中，70℃水浴攪拌使溶液呈均勻的透明相。置4℃冰箱放置6h，過濾或離心除去包合物，濃縮回收乙醇。加入4倍于油狀物的蒸餾水稀釋，用1/3倍體積的氯仿萃取3次，揮發(fā)氯仿，得濃縮的多不飽和脂肪酸。

1.3.3 馬齒莧生物堿的提取［11］稱取100 g馬齒莧粉末，加500 ml無水乙醇，40℃攪拌1 h。過濾，收集濾液，濾渣中加300 ml的無水乙醇，40℃攪拌1.5 h。過濾，收集濾液，濾渣中加300 ml的無水乙醇，40℃攪拌30 min。過濾，收集濾液，合并以上3次濾液。置旋轉蒸發(fā)儀中揮發(fā)盡乙醇，出現(xiàn)黑色浸膏。在浸膏中加50 ml 10%的硫酸溶解，過濾。用氨水調(diào)pH至10.0，加入10ml 飽和NaCl（36 g NaCl / 100 g）水溶液。用1/5倍體積于原溶液的氯仿萃取5次，置通風廚中將氯仿?lián)]發(fā)盡，10%乙醇溶解。

1.3.4 馬齒莧黃酮的提取

黃酮標準曲線的制作［12］：標準曲線方程：Y=0.632 7X－0.000 5(R2=0.998 2)。

馬齒莧黃酮的提取：取提取多不飽和脂肪酸后的殘渣約100 g，加75%乙醇400 ml，常攪拌1.5 h。4 000 r/min，室溫離心15 min。減壓濃縮至125 ml（1.25倍于殘渣的量）后，用去離子水稀釋6倍。按1/50（W/V）的比例加入NaCl，靜置2 d，會有絮狀殘渣析出。過濾，取上清液，揮發(fā)乙醇。用乙醚萃取后，在通風廚中揮發(fā)盡乙醚，將出現(xiàn)黃色結晶。結晶用水加熱溶解，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.5 馬齒莧總提取物的提取稱取馬齒莧粉末20 g［按1∶50（w/v）的比例分3次加水］。先加400 ml蒸餾水，煮沸攪拌1h，過濾或離心，取上清液。剩余殘渣再重復提取兩次。合并3次提取液，即為總提取液。

2 結果

見表1。表1 馬齒莧各成分提取條件及其得率（略）

由表1可見，馬齒莧各有效成分含量高低為多糖＞生物堿＞黃酮＞不飽和脂肪酸。首先，影響多糖提取得因素很多，如溫度、料液比、提取時間是較為顯著的3個影響因素。

3 討論

本文多糖提取條件是根據(jù)前人研究馬齒莧多糖提取時優(yōu)選的條件［8，13，14］，并加以改進。其次，在提取馬齒莧多不飽和脂肪酸時，需注意兩個關鍵環(huán)節(jié)：①用濃鹽酸調(diào)pH到2～3時需謹慎，鹽酸一旦過量，就會打破上下兩層之間的分界面，從而難以分離出上層油層。②做尿素包合實驗時，需配制一定比例的尿素乙醇溶液，若比例不合適將導致尿素析出，起不到尿素包合飽和脂肪酸的效果。在本實驗中使用乙醇與尿素的比例，其比值（ml/g）為3。此比值和提取華山松籽油所用比值一致［9］。馬齒莧富含ω－3不飽和脂肪酸，郭志峰等［15］測定馬齒莧全草中以亞麻酸(47.16%)、亞油酸(22.00%)及棕櫚酸(17.40%)為主，籽中以亞油酸(45.86%)及亞麻酸(30.16%)為主。鄒耀洪［16］采用2-氨基-2-甲基丙醇化學改良氣相色譜一質譜法分析鑒定出了馬齒莧的10種脂肪酸，是由C16－C22 脂肪酸組成，多不飽和脂肪酸總相對含量為70.64%，其中9，12，15-十八碳三烯酸(亞麻酸)相對含量達50.08%，還檢出了植物中極少見的5，8，11，14，17-二十碳五烯酸(EPA)和4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸(DHA) 。

本實驗以亞麻酸作為標準品，通過氣相色譜測量樣品，發(fā)現(xiàn)樣品和標準品的峰面積明顯高于標準品的峰面積，從而肯定本馬齒莧菜中含有亞麻酸。生物類黃酮是其活性成分之一，它具有降血糖、降血脂、抗心律失常等四十多種生理活性。本文采用乙醇作為提取試劑，與其他有機溶劑相比，乙醇無毒，成本低。這和從其他多數(shù)植物中提取黃酮類物質所用有機溶劑是一致的［12，17，18］。生物堿是一類含氮的堿性有機化合物，大都具有特殊而顯著的生理活性和毒性，是中草藥中重要的有效成分之一［19］。王仲英等［20］測定了太原地區(qū)馬齒莧中的生物堿含量為21.9 mg·kg-1，而本文測定南昌地區(qū)馬齒莧中的生物堿含量為60.80 mg·(100 g)-1，可見南昌地區(qū)馬齒莧中的生物堿含量比太原地區(qū)的高。

現(xiàn)代醫(yī)學實驗也證明，馬齒莧含有多種功能因子，對人體有著各種保健及疾病治療作用，它主要有降血脂、降血糖、抗衰老、消炎抑菌、增強免疫等多種功效。本實驗的目的是證實南昌地區(qū)馬齒莧中幾種有效成分的存在和含量，為研制治療糖尿病的功能性食品提供依據(jù)。

【參考文獻】 ［1］國家藥典委員會.中國藥典，Ⅰ部［J］.北京：化學工業(yè)出版社，2000：27. ［2］王曉玲，王紅霞．馬齒莧的傳統(tǒng)應用和現(xiàn)代研究概況［J］.首都醫(yī)藥，2004，4：45. ［3］李利峰.馬齒莧-野生蔬菜中的保健珍品［J］.遼寧農(nóng)業(yè)科學，1997（4）：56. ［4］王書榮.“菜中之魚-馬齒莧”［J］.中國蔬菜，1998，1：51. ［5］曹滌環(huán).渾身是寶的馬齒莧［J］.中國土特產(chǎn)，1996，3：34. ［6］張兆洪，孫美榮.保健植物馬齒莧［J］.生物學雜志，1991，1：26. ［7］翟瑋瑋，顧立眾.馬齒莧功能因子及保健食品的開發(fā)［J］.食品科技，2003，2：20. ［8］周 晶，劉景文，符敬偉，等. 馬齒莧中多糖的提取與含量測定［J］.中草藥，2001，32（2）：124. ［9］上官新晨，李景栓，陳錦屏，等.華山松籽油中多不飽和脂肪酸德分離研究［J］.西北植物學報，2004，24（7）:1303. ［10］吳 慶，蔡昭玲，叢 威，等.從微藻中提取多不飽和脂肪酸［J］.北京化工大學學報，2004，31（4）：5. ［11］張忠良，王照利，吳萬興.魔芋中總生物堿提取試驗［J］.工藝技術，2004，25（9）：102. ［12］孫崇魯，黃克瀛，陳叢瑾，等.香樟葉中黃酮類化合物的提取［J］.應用化工，2006，35（2）：142. ［13］劉存芳，王 曉，田光輝，等.馬齒莧多糖的提取與其單糖組成研究［J］.陜西理工學院學報，2006，22（3）：29. ［14］李海燕，王旭深.馬齒莧多糖提取方法的比較［J］.第一軍醫(yī)大學分校學報，2005，28（2）：186. ［15］郭志峰，劉鵬巖，傅承光.離子排斥色譜法測定馬齒莧中低分子羧酸［J］.色譜，1996，14(1)：50. ［16］鄒耀洪.2-氨基-2-甲基丙醇化學改良氣相色譜-質譜法分析馬齒莧脂肪酸［J］.食品科學，2004，25(5)：154. ［17］高 健，付 進.鹽地堿蓬總黃酮的提取工藝條件研究［J］.鹽城工學院學報（自然科學版），2007，30（1）：57. ［18］黎乃維，趙玉平，楊建榮，等.水浸提發(fā)提取洋蔥黃酮類化合物的工藝條件研究［J］.食品科技，2007，3：110. ［19］陳發(fā)奎.常用中草藥有效成分含量測定［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1997：211. ［20］王仲英，李香蘭，宜春生.馬齒莧總生物堿的測定［J］.太原理工大學學報，2001，32（2）：197.