作者：王桂紅，劉丹，吳杰，邴飛虹，張國斌，鄭國華

【摘要】 目的研究霉茶總黃酮在大鼠體內的藥代動力學。方法以蛇葡萄素為指標，高效液相色譜法(HPLC)測定給藥后大鼠血清中蛇葡萄素的濃度。結果大鼠灌胃0.5 h后血清中即可檢測出蛇葡萄素，霉茶總黃酮在大鼠體內呈一室模型分布，且藥物在高、中、低劑量時的藥物濃度變化比較一致。結論HPLC法適用于測定大鼠體內霉茶總黃酮血藥濃度，總黃酮在大鼠體內吸收很快，濃度對藥物的體內代謝行為沒有明顯影響。

【關鍵詞】 霉茶總黃酮； 蛇葡萄素； 藥代動力學； 大鼠； 高效液相色譜法

霉茶系葡萄科蛇葡萄屬植物大葉蛇葡萄Ampelopsis.megalophylla Diels et. Gilg的枝葉加工而成，其主要活性成分為霉茶總黃酮，臨床上用于降血壓、降血脂［1］。有關霉茶總黃酮的藥代動力學研究報道較少，為了進一步了解霉茶總黃酮的降壓機制，本實驗對霉茶總黃酮在大鼠體內的藥代動力學進行了研究。

1 材料與儀器

1.1 藥品與試劑

霉茶總黃酮、蛇葡萄素對照品（自制），乙腈(色譜純)，霉茶總黃酮用4% CMC-Na溶液加熱溶解成所需濃度。

1.2 動物

SD大鼠，體重200～250 g，雌雄各半，由華中科技大學同濟醫學院實驗動物學部提供，許可證號：SCXY（鄂）2004-00070。室溫18～20℃，實驗期間飼以該中心提供的固體飼料，自由飲水。

1.3 儀器

LG16-W型離心機（北京醫用離心機廠）；XW-80A旋渦混合器（上海醫科大學儀器廠）；Agilent-1100系列高效液相色譜儀（四元泵）、紫外檢測器及配套色譜工作站；Mettler-Toledo AG285型分析天平。

2 方法

2.1 色譜條件

色譜柱為Aichrom Bond-AQ C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）； YWG-C18 保護柱，檢測波長為292 nm，流動相為乙腈-0.2%磷酸水（25∶75），流速為1.0 ml·min-1；柱溫：30℃；進樣量：5 μl。

2.2 血液樣品的制備與處理［2］

取36只大鼠，禁食過夜，隨機分為霉茶總黃酮高、中、低3個劑量組（灌胃劑量分別為：360，180，90 mg·kg-1），每只大鼠取6個時間點、3個平行，單次灌胃給藥后分別于0.5，1.0，1.5，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，10.0，12.0 h眶靜脈取血0.5 ml，4 000 r·min-1離心10 min，分離出血漿，定量吸取血漿0.2 ml，加0.6 ml乙腈沉淀蛋白，渦流混旋10 min，4 000 r·min-1離心10 min，取上清液，濾膜濾過(0.45 μm)，進樣5 μl，以峰面積進行定量。

2.3 對照品系列溶液的制備

分別精密稱取蛇葡萄素對照品適量，以甲醇溶解并稀釋至刻度配制成不同濃度的對照品儲備液（1 200，800，600，400，200 μg·ml-1），4℃保存備用。精密吸取蛇葡萄素對照品儲備液適量，加甲醇定容，梯度稀釋為800，200，120，80，40，8，4 μg·ml-1的對照品溶液。

2.4 對照品系列模擬血漿樣品的制備

分別精密吸取上述稀釋的系列對照品溶液各0.1 ml，然后用大鼠空白血漿分別定容至1 ml，使血漿濃度分別為80，20，12，8，4，0.8，0.4μg·ml-1的對照品溶液。

2.5 數據處理 藥物代謝動力學參數由MCPKP軟件計算［3］。

3 結果

3.1 標準曲線的建立

含藥血漿按前述“2.2”項下方法進行操作，分別進樣0.002，0.004，0.02，0.04，0.06 μg，測定并記錄蛇葡萄素的峰面積。以進樣量為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），標準曲線如下：Y= 3 258X- 1.236，R = 0.999 9，線性范圍0.002～0.06 μg，最低檢測限為0.000 4 μg·ml-1。

3.2 方法回收率和精密度的考察

按照含藥對照品系列溶液配制方法，配制不同濃度的血漿對照品溶液，依次為12，8，4μg·ml-1。然后按照“2.2”項下同法操作，精密進樣5 μl，記錄蛇葡萄素的峰面積。按照外標法，代入線性方程計算蛇葡萄素的血漿藥物濃度，計算所得濃度與實際濃度的比值，并計算日內精密度。方法的回收率分別為：91.83%，93.75%，86.25%，日內精密度為：7.56%，6.40%，5.68%。連續3 d測定上述濃度樣品，結果日間精密度為：8.02%，7.08%，6.72%。符合生物樣品中藥物定量分析研究的方法學要求。

3.3 穩定性實驗

取與回收率實驗用同樣血漿對照品溶液9份，濃度為 12，8，4 μg·ml-1，每個濃度3個平行。按照血液樣品制備方法預處理后室溫放置4 h，24 h和經3，5，7 d 3次冷凍-解凍循環后蛇葡萄素的穩定性，RSD分別為：1.97%，2.90%，2.60%。不同濃度的含藥血漿樣品在放置7 d之內RSD<3%，表明樣品在7 d內基本穩定。

3.4 蛇葡萄素的血藥濃度測定

霉茶總黃酮高、中、低劑量組大鼠體內的蛇葡萄素血藥濃度均在1.5～2.5 h達高峰，2.5 h后開始下降。血藥濃度-時間數據由MCPKP軟件處理，各項動力學參數見表1，血藥濃度變化見圖1。表1 藥動學參數（略）

4 討論 霉茶總黃酮的體內藥物代謝符合一室模型。藥物在高、中、低劑量時的藥物濃度變化比較一致。整個藥物的體內代謝符合一室模型，且藥物均有一定的肝腸循環，在體內的生物半衰期時間為4.5～5.5 h左右，血藥濃度較快到達最大值，但是會持續一個時間段，可能與蛇葡萄素的結構有相關性。

對于大部分的黃酮類化合物，肝臟和消化道是藥物代謝的主要場所，藥物在胃腸道內即發生代謝、吸收，進入體內的是其代謝產物而非原形成分［4］。據文獻報道［5］，小鼠灌胃給藥180 mg·kg-1，血清中僅有痕量蛇葡萄素。本實驗在霉茶總黃酮最大耐受量［6］范圍內按360，180，90 mg·kg-1給藥，0.5 h后即可檢測出蛇葡萄素，與以往報道不同。至于霉茶總黃酮在大鼠胃腸道內是否完全代謝分解，有待進一步研究。