作者：胡曉，張紅，夏春華，陳月江

【關(guān)鍵詞】 鹽酸伐昔洛韋片；阿昔洛韋；色譜法，高壓液相；藥代動(dòng)力學(xué)；生物利用度

Pharmacokinetics and relative bioavailability of valaciclovir hydrochloride tablets in Chinese healthy volunteers

【Abstract】 AIM: To study the pharmacokinetics and relative bioavailability of valaciclovir hydrochloride tablets and evaluate its bioequivalence. METHODS: A single oral dose 600 mg of 2 valaciclovir hydrochloride tablets was given to 18 healthy volunteers in an open randomized crossover study. The concentration of acyclovir in plasma was determined by HPLC at different time points within 14 h following administration. The pharmacokinetic parameters were calculated by BAPP 2.0 software and the bioequivalence was evaluated by two onesided t test and 90%confidence intervals. RESULTS: The calibration curve of acyclovir was linear in the range of 0.1~4.0 μg/mL (r=0.9999)， and an intraday and interday RSD of<7.00% was observed. The concentrationtime curve after administration was best fitted to a one compartment open model， and main pharmacokinetic parameters were as follows: Tmax were (1.50±0.40) and (1.40±0.40) h; Cmax were (2.70±0.68) and (2.87±0.75) μg/mL; t1/2 were (3.00±0.65) and (3.28±0.67) h; AUC0-14 were 9.07±2.43 and 9.71±2.70 μg?h/mL. The relative bioavailability of the test preparations compared with the reference preparations was (96.4±23.7)%. There was no statistically singnificant difference in parameters Tmax， t1/2， Cmax， MRT， AUC0-14 and AUC0-∞ between the 2 products (P>0.05). CONCLUSION: The 2 valaciclovir hydrochloride tablets were bioequivalent. 【Keywords】 valaciclovir hydrochloride tablet; acyclovir; chromatography， high pressure liquid; pharmacokinetics; biological availability

【摘要】 目的： 研究鹽酸伐昔洛韋片在健康人體的藥代動(dòng)力學(xué)和相對(duì)生物利用度，為臨床合理用藥提供依據(jù). 方法： 采用雙周期、單中心、開(kāi)放、自身交叉對(duì)照的研究方法，18例健康志愿者隨機(jī)分為兩組，單次，交叉口服鹽酸伐昔洛韋片600 mg后，以HPLC法測(cè)定血漿中阿昔洛韋的濃度，采用BAPP2.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù). 結(jié)果： HPLC法測(cè)定阿昔洛韋的線性范圍為0.1~4.0 μg/mL(r=0.9999)，日內(nèi)和日間RSD均小于7.00%. 試驗(yàn)與參比制劑的藥時(shí)曲線可用一室模型擬合，兩者主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)Tmax分別為(1.50±0.40)，(1.40±0.40) h; Cmax分別為(2.70±0.68)，(2.87±0.75) μg/mL. t1/2分別為(3.00±0.65)，(3.28±0.67) h；AUC0-14分別為(9.07±2.43)，(9.71±2.70) μg?h/mL. 兩種鹽酸伐昔洛韋片主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)間均無(wú)顯著性差異(P>0.05). 供試制劑對(duì)參比制劑的相對(duì)生物利用度為 (96.4±23.7)%. 結(jié)論： 供試制劑和參比制劑具有生物等效性.

【關(guān)鍵詞】 鹽酸伐昔洛韋片；阿昔洛韋；色譜法，高壓液相；藥代動(dòng)力學(xué)；生物利用度

0引言

鹽酸伐昔洛韋（valaciclovir hydrochloride）是阿昔洛韋（acyclovir）的L纈氨酸酯鹽酸鹽，為阿昔洛韋的前體藥物，口服后在體內(nèi)迅速轉(zhuǎn)化為阿昔洛韋而發(fā)揮抗病毒作用. 與阿昔洛韋相比，鹽酸伐昔洛韋具有水溶性好，口服吸收迅速，生物利用度高，血漿半衰期長(zhǎng)等藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn). 在臨床上用于水痘，帶狀皰疹及Ⅰ型，Ⅱ型單純皰疹病毒感染，包括初發(fā)和復(fù)發(fā)的生殖器皰疹病毒感染的治療，具有起效快，療效好，用藥量小，服藥次數(shù)少，療程短，不良反應(yīng)少等優(yōu)點(diǎn)［1-3］. 本研究對(duì)國(guó)內(nèi)兩廠家生產(chǎn)的鹽酸伐昔洛韋片進(jìn)行了藥代動(dòng)力學(xué)和生物等效性評(píng)價(jià)，旨在為臨床合理用藥提供依據(jù).

1材料和方法

1.1材料① 儀器： LC2010A高效液相色譜儀，日本島津；GS15R貝克曼高速冷凍離心機(jī)，XW80A旋渦混合器，Sartorius電子天平，臺(tái)灣艾柯實(shí)驗(yàn)室專用超純水機(jī)等. ② 試劑和藥品： 甲醇，庚烷磺酸鈉均為色譜純，購(gòu)自山東禹王實(shí)業(yè)有限公司；十二烷基磺酸鈉和醋酸鈉均為分析純，購(gòu)自上海試劑一廠；試驗(yàn)用水為符合美國(guó)F900實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)的超純化水；供試制劑鹽酸伐昔洛韋片(300 mg/片，批號(hào)： 040401)由宜都東陽(yáng)光制藥有限公司研制；參比制劑鹽酸伐昔洛韋片(300 mg/片，批號(hào)： 050104) 由麗珠集團(tuán)麗珠制藥廠研制；阿昔洛韋標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量為99.6%(批號(hào)： 630200001). ③ 色譜條件： 色譜柱為Diamonsil C18柱（5 μm，4.6 mm×150 mm，迪馬公司）；流動(dòng)相為甲醇∶水（含0.001 mol/L庚烷磺酸鈉，0.0004 mol/L十二烷基磺酸鈉及0.003 mol/L醋酸鈉，pH為3.9）=5∶95，流速為1.0 mL/min，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為252 nm，柱溫為28℃. 1.2方法 1.2.1血漿樣品處理取血漿0.2 mL，加入100 mL/L三氯醋酸0.2 mL，旋渦混勻1 min，19 000 g離心5 min后，取上清液30 μL進(jìn)樣. 1.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備配制成含阿昔洛韋標(biāo)準(zhǔn)品0.1， 0.2， 0.4， 0.8， 1.6， 3.2和4.0 mg/L系列血樣，分別按血漿樣品處理方法處理后進(jìn)樣. 將測(cè)得的峰面積(As)對(duì)濃度(C)進(jìn)行直線回歸，得阿昔洛韋標(biāo)準(zhǔn)曲線及其回歸方程(n=5)，血漿阿昔洛韋的線性范圍為0.1~4.0 mg/L，回歸方程為As=58196C-497.77， r=0.9999，最低定量濃度為0.1 mg/L. 1.2.3回收率試驗(yàn)精密配制含阿昔洛韋3.2，0.8和0.2 mg/L的系列血樣，各濃度均為5份，按1.2.1的方法操作，另配制相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，不經(jīng)萃取直接以等量進(jìn)樣，分別測(cè)其峰面積，兩組峰面積進(jìn)行比較，計(jì)算血漿中阿昔洛韋的絕對(duì)回收率. 再精密配制濃度為3.2，0.8和0.2 mg/L阿昔洛韋標(biāo)準(zhǔn)血樣各5份，按1.2.1的方法操作進(jìn)樣，以標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算其檢出量與加入量的比值，得相對(duì)回收率(表1).

表1人血漿中阿昔洛韋回收率（略）

RSD： 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差.

1.2.4精密度試驗(yàn)在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，選擇3.2， 0.8， 0.2 mg/L 3個(gè)濃度的阿昔洛韋標(biāo)準(zhǔn)血樣，按1.2.1的方法操作，每一濃度制備并測(cè)定5個(gè)樣品，3 d連續(xù)制備并測(cè)定3個(gè)分析批，求得日內(nèi)RSD分別為5.00%，3.85%，5.10%；日間RSD分別為5.26%，6.50%，6.84%. 1.2.5受試者及試驗(yàn)設(shè)計(jì)18名男性健康志愿者，年齡（21.2±5.3）歲，身高（170.3±3.0） cm，體質(zhì)量（61.8±3.8） kg，均在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi). 獲得倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，志愿者簽署知情同意書. 既往無(wú)心、肝、腎、消化道、神經(jīng)系統(tǒng)、精神異常、代謝異常等疾病，無(wú)藥物和食物過(guò)敏史. 試驗(yàn)前接受全面體檢，其血、尿常規(guī)、肝、腎功能、心率、血壓、心電圖等均為正常. 試驗(yàn)采用雙周期、單中心、開(kāi)放、隨機(jī)、自身交叉對(duì)照的研究方法，將18例受試者隨機(jī)分為A，B兩組，于試驗(yàn)前1 d進(jìn)入Ⅰ期臨床試驗(yàn)病房，統(tǒng)一進(jìn)清淡平衡膳食，給藥前1 d晚餐后，禁食不禁水12 h后，于次日晨分別服用供試制劑或參比制劑600 mg，用200 mL溫開(kāi)水送服. 于服藥前（0 h）及服藥后0.5， 1.0， 1.5， 2.0， 3.0， 4.0， 5.0， 6.0， 8.0， 10.0， 12.0和14.0 h采集上肢靜脈血4 mL至肝素化試管中，3000 rpm離心10 min，分離出血漿置-20℃冷凍保存，14 d內(nèi)待測(cè). 交叉服藥前有1 wk洗凈期.

2結(jié)果

2.1色譜行為在上述色譜條件下，獲得給藥前空白血漿、 空白血漿加標(biāo)準(zhǔn)阿昔洛韋及受試者服用鹽酸伐昔洛韋片后的血漿樣品色譜圖（圖1），可見(jiàn)阿昔洛韋保留時(shí)間約為13.5 min，各峰分離良好，無(wú)雜峰干擾測(cè)定. 2.2藥代動(dòng)力學(xué)18名受試者單次口服鹽酸伐昔洛韋片受試制劑或參比制劑600 mg后平均藥時(shí)曲線均符合一房室模型(圖2). 供試制劑和參比制劑的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)分別為： Tmax (1.50±0.40)和(1.40±0.40) h; T1/2(ke) (3.00±0.65)和(3.28±0.67) h. Cmax (2.70±0.68)和(2.87±0.75) mg/L. 平均滯留時(shí)間（MRT ）(4.11±0.55)和(4.29±0.67 ) h. AUC0-14 (9.07±2.43)和(9.71±2.70) mg/L， AUC0-∞(9.66±2.42)和(10.36±2.75) mg/L.

2.3生物等效性評(píng)價(jià)兩制劑藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)AUC0-t， Cmax經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換，進(jìn)行方差分析和雙向單側(cè)t檢驗(yàn)，Tmax取實(shí)測(cè)值進(jìn)行非參數(shù)秩和檢驗(yàn). 結(jié)果表明l n(AUC0-t)， l n(Cmax)在制劑間、周期間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而個(gè)體間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義. AUC0-t的［12α］置信區(qū)間為85.25%～103.27%，在80%~125%內(nèi)；供試制劑和參比制劑的相對(duì)生物利用度為(96.4±23.7)%. Cmax的［12α］置信區(qū)間為86.00%～104.02%，在70%~143%內(nèi)，表明兩制劑具有生物等效. Tmax非參數(shù)檢驗(yàn)結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義S=16.5>S0.05(10)=8， P>0.05.

A： 空白血漿；B： 空白血漿＋阿昔洛韋標(biāo)準(zhǔn)品；C： 受試者口服鹽酸伐昔洛韋后4 h的血樣. 圖1阿昔洛韋血漿樣品分析色譜圖 （略）

圖2健康志愿者口服600 mg鹽酸伐昔洛韋片的平均藥時(shí)曲線（略）

3討論

阿昔洛韋體內(nèi)濃度測(cè)定多采用高效液相紫外檢測(cè)法，由于水溶性大，難以采用液液萃取法將阿昔洛韋從血漿樣品中獲得滿意的分離. 本實(shí)驗(yàn)采用直接蛋白沉淀法，比較了多種蛋白沉淀劑對(duì)血樣的處理效果，結(jié)果是用等體積100 mL/L三氯醋酸沉淀蛋白效果好. 在流動(dòng)相的考察中，發(fā)現(xiàn)在單純的甲醇水［4-6］體系中，阿昔洛韋峰形差且無(wú)法與血漿中雜質(zhì)分離. 考慮到阿昔洛韋的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，在甲醇水體系中加入適量離子對(duì)試劑使其成為離子對(duì)色譜，在考察中發(fā)現(xiàn)，單用庚烷磺酸鈉作為離子對(duì)試劑［7］，雖然阿昔洛韋峰形得到很好的改善，但還是無(wú)法與血漿中雜質(zhì)完全分離. 經(jīng)過(guò)摸索發(fā)現(xiàn)在含0.001 mol/L庚烷磺酸鈉及0.003 mol/L醋酸鈉的甲醇水體系加入0.0004 mol/L十二烷基磺酸鈉，改變流動(dòng)相的選擇性，結(jié)果阿昔洛韋峰形好，保留時(shí)間恒定，且血漿中無(wú)雜峰干擾測(cè)定. 采用本方法測(cè)定血漿中阿昔洛韋的濃度在0.1~4.0mg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9999），精密度和準(zhǔn)確性均符合生物樣本分析的要求，適用于伐昔洛韋的人體藥代動(dòng)力學(xué)和生物等效性研究. 本試驗(yàn)供試與參比兩制劑的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，如Cmax， AUC， Tmax， T1/2與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致［6］，且差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明兩者在吸收程度及吸收速度上具有生物等效性.

［1］ Erik DC， Hugh JF. Antiviral prodrugsthe development of successful prodrug strategies for antiviral chemotherapy ［J］. Br J Pharmacol， 2006，147(1):1-11.

［2］ 陳宏，賴永旭. 鹽酸伐昔洛韋的臨床研究綜述［J］. 四川醫(yī)學(xué)，2005，26(4):467-468.

［3］ 張宏宇. 單劑量伐昔洛韋治療復(fù)發(fā)性生殖器皰疹［J］. 中國(guó)新藥與臨床雜志， 2001，20(2):151-152.

［4］ 廉江平，豐航，毛幼樺. 阿昔洛韋片在健康志愿者體內(nèi)的相對(duì)生物利用度［J］. 第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)， 2004，25(19):1802-1804.

［5］ 許小紅，李銅鈴，王瑋，等. 鹽酸伐昔洛韋緩釋片家犬藥動(dòng)學(xué)研究［J］. 中國(guó)新藥雜志， 2004，13(5):414-416. ［6］ 葉冬梅，蘭順，池泮才，等. 2種萬(wàn)乃洛韋片劑的藥代動(dòng)力學(xué)及生物利用度［J］. 中國(guó)藥房， 2001，12(10):607-608.

［7］ 黃桂華，鄧樹(shù)海，王芳，等. 阿昔洛韋片人體的生物等效性研究［J］. 沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)， 2001，18(4):260-262.