【摘要】 目的:探討煤焦油洗劑治療銀屑病的藥效學機制。方法:采用小鼠尾鱗片表皮、鼠陰道上皮實驗模型，觀察其對上皮細胞分裂及表皮細胞分化的影響；采用豚鼠磷酸組織胺致癢閾模型，觀察其抑制瘙癢的作用；采用角叉菜致大鼠足跖腫脹模型，觀察其抗炎作用。結果 煤焦油洗劑有顯著的抑制小鼠陰道上皮細胞有絲分裂及增殖細胞核抗原表達、促進小鼠尾鱗片表皮顆粒層形成的作用，能顯著提高磷酸組織胺對豚鼠的致癢閾，使角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹顯著減輕。結論:煤焦油洗劑有抑制角質形成細胞增殖、促進角質形成細胞正常分化、明顯抑制瘙癢和急性炎癥的作用。 【關鍵詞】 煤焦油洗劑;藥效學;銀屑病 煤焦油洗劑主要成分為煤焦油，適用于銀屑病、神經性皮炎、脂溢性皮炎、脂溢性脫發、頭皮屑過多等皮膚病，臨床療效良好。為探討煤焦油洗劑的藥效學機制，筆者對煤焦油洗劑進行了與治療銀屑病相關的藥效學研究，現報告如下。 1 材料和方法 1.1 材料:Wistar種大白鼠，體重200g±20g；昆明種小白鼠，體重20g±2g；白色豚鼠，體重300g±20g；陰道上皮模型用雌性小鼠，鼠尾鱗片模型用雄性小鼠。以上動物由山東魯抗醫藥股份有限公司動物中心提供，清潔級動物，普通飼料喂養，動物室溫度20~23℃，許可證號SCXK(魯)20050017。1%、2%及4%煤焦油洗劑均為自制，復方蒽林軟膏為武漢愛民制藥有限公司生產，PCNA單克隆抗體由美國NeoMarkers公司生產，SP試劑盒由北京中山生物技術有限公司生產。 1.2 方法。 1.2.1 對小鼠陰道上皮細胞有絲分裂的影響[1]:取雌性小鼠30只，腹腔注射乙烯雌，0.2mg/只，1次/d，連續3天。第4天將小鼠隨機分成5組(n=6)，以生理鹽水作為陰性對照、復方蒽林軟膏作為陽性對照，分別于上午8時陰道灌注1%、2%及4%煤焦油洗劑、復方蒽林軟膏、生理鹽水各0.05ml。上午10時給每組小鼠腹腔注射秋水仙堿2mg/kg，并分別再做與前相同的陰道灌注。6h后處死小鼠，切取陰道組織，作常規組織切片，HE染色，在光鏡下計數500個小鼠陰道基底細胞中所出現的有絲分裂數，換算成每100個基底細胞的有絲分裂數(分裂指數)。 1.2.2 對小鼠陰道上皮細胞PCNA的影響[1]:取雌性小鼠30只隨機分成5組(n=6)，分別做與前相同的雌化及陰道灌注，但不注射秋水仙堿，末次給藥后6h處死小鼠，切取陰道組織，作常規石蠟切片，經抗原修復、山羊血清工作液孵育，加入1:100的一抗、室溫1h，滴加二抗工作液，辣根過氧化物酶—鏈霉素卵白素工作液37℃孵育30min。每步驟間均用pH7.4的PBS沖洗3次。用新配制的DABH2O2顯色。其中以淋巴結為陽性對照，以PBS緩沖液替代一抗作陰性對照。光鏡下觀察PCNA陽性表達率。PCNA的染色陽性物質呈棕黃色顆粒，主要位于細胞核。采用Garcia半定量分級法[2]：觀察10個高倍視野，細胞核棕黃色反應為陽性。①陽性反應著色深度:多數細胞核淺著色為1，深著色邊界清楚為2。②陽性著色細胞比例:<20%為1級，20%~50%為2級，>50%為3級。以上兩項相加:2為(+)，3為(2+)，≥4為(3+)。 1.2.3 對小鼠尾鱗片表皮顆粒層形成的影響[2]:取30只雄性小鼠隨機分成5組(n=6)，分別以1%、2%及4%煤焦油洗劑、復方蒽林軟膏、生理鹽水各0.05ml涂抹尾部，2次/d，連續涂藥20天后處死小鼠，取鼠尾根部1~3cm表皮，常規組織切片，HE染色，光鏡下觀察，凡是一個鱗片有連續成行的顆粒層細胞者，判定為有顆粒層形成的鱗片，計數每100個鱗片中有顆粒層的鱗片數(△)。 1.2.4 對角叉菜致大鼠足跖腫脹的影響[3]:取Wistar大鼠，雌雄各半，隨機分為5組(n=6)，分別以1%、2%及4%煤焦油洗劑、復方蒽林軟膏、生理鹽水各0.05ml涂抹每鼠右后肢足跖，2次/d，連續給藥5日。末次給藥后1h，每鼠右后肢足跖皮下注射1％角叉菜混懸液0.1ml/只致炎，以千分尺測量右后足趾致炎后0.5、1、3、5h的厚度，計算各組大鼠足趾腫脹率：腫脹率=(致炎后足跖厚度－致炎前足跖厚度)/致炎前足跖厚度×100％。 1.2.5 對豚鼠磷酸組織胺致癢閾的影響[4]:取豚鼠，雌雄各半，隨機分為5組(n=6)，分別以1%、2%及4%煤焦油洗劑、復方蒽林軟膏、生理鹽水各0.05ml涂抹每鼠每只豚鼠右后足背，2次/d，連續給藥5日。末次給藥后2小時，每只豚鼠右后足背剃毛，并用粗砂紙擦傷剃脫毛處表皮面積約1cm2。10分鐘后開始在創面滴以0.01％磷酸組織胺溶液0.05ml/只。此后每隔3min滴一次，每次0.05ml/只，依0.01％、0.02％、0.03％、0.04％……遞增濃度，至出現豚鼠回頭舔右后足時所給予的總量即為致癢閾。 2 結果 實驗結果見表1、2、3、4、5。各濃度的煤焦油洗劑與陰性對照組相比，對小鼠陰道上皮細胞有絲分裂有顯著的抑制作用，且能顯著抑制小鼠陰道上皮PCNA的表達，對小鼠尾鱗片表皮顆粒層的形成有顯著的促進作用，可使角叉菜膠所致的大鼠足跖腫脹顯著減輕(P＜0.05)，能顯著提高磷酸組織胺對豚鼠的致癢閾(P＜0.05)。上述各項作用中，不同濃度煤焦油洗劑的作用呈量效相關性；且各濃度的煤焦油洗劑的各項作用均明顯優于復方蒽林軟膏。 表1 對小鼠陰道上皮細胞有絲分裂的影響(n=6，X-±SD)

與陰性對照組比較，*P＜0.05；與陽性對照組比較，＃P＜0.05 表2 對小鼠陰道上皮細胞PCNA表達的影響(n=6)

與陰性對照組比較，*P＜0.05；與陽性對照組比較，＃P＜0.05 表4 對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響(n=6，X-±SD)

與陰性對照組比較，*P＜0.05；與陽性對照組比較，＃P＜0.05 表5 對豚鼠磷酸組織胺致癢閾的影響(n=6，X-±SD)

與陰性對照組比較，*P＜0.05；與陽性對照組比較，＃P＜0.05 3 討論 煤焦油洗劑主要成分是煤焦油，外用治療銀屑病等皮膚病療效良好。本實驗表明，煤焦油洗劑有抑制角質形成細胞增殖、促進角質形成細胞正常分化的作用，可使角叉菜膠所致的大鼠足跖腫脹顯著減輕對急性炎癥有抑制作用，能明顯提高磷酸組織胺對豚鼠的致癢閾有抑制瘙癢的作用。煤焦油洗劑可作為治療銀屑病的良好備選藥劑之一，且能避免皮質類固醇激素類外用藥的諸多副作用。