【摘要】 目的:探討煤焦油洗劑治療銀屑病的藥效學(xué)機(jī)制。方法:采用小鼠尾鱗片表皮、鼠陰道上皮實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，觀察其對(duì)上皮細(xì)胞分裂及表皮細(xì)胞分化的影響；采用豚鼠磷酸組織胺致癢閾模型，觀察其抑制瘙癢的作用；采用角叉菜致大鼠足跖腫脹模型，觀察其抗炎作用。結(jié)果 煤焦油洗劑有顯著的抑制小鼠陰道上皮細(xì)胞有絲分裂及增殖細(xì)胞核抗原表達(dá)、促進(jìn)小鼠尾鱗片表皮顆粒層形成的作用，能顯著提高磷酸組織胺對(duì)豚鼠的致癢閾，使角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹顯著減輕。結(jié)論:煤焦油洗劑有抑制角質(zhì)形成細(xì)胞增殖、促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞正常分化、明顯抑制瘙癢和急性炎癥的作用。 【關(guān)鍵詞】 煤焦油洗劑;藥效學(xué);銀屑病 煤焦油洗劑主要成分為煤焦油，適用于銀屑病、神經(jīng)性皮炎、脂溢性皮炎、脂溢性脫發(fā)、頭皮屑過(guò)多等皮膚病，臨床療效良好。為探討煤焦油洗劑的藥效學(xué)機(jī)制，筆者對(duì)煤焦油洗劑進(jìn)行了與治療銀屑病相關(guān)的藥效學(xué)研究，現(xiàn)報(bào)告如下。 1 材料和方法 1.1 材料:Wistar種大白鼠，體重200g±20g；昆明種小白鼠，體重20g±2g；白色豚鼠，體重300g±20g；陰道上皮模型用雌性小鼠，鼠尾鱗片模型用雄性小鼠。以上動(dòng)物由山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司動(dòng)物中心提供，清潔級(jí)動(dòng)物，普通飼料喂養(yǎng)，動(dòng)物室溫度20~23℃，許可證號(hào)SCXK(魯)20050017。1%、2%及4%煤焦油洗劑均為自制，復(fù)方蒽林軟膏為武漢愛民制藥有限公司生產(chǎn)，PCNA單克隆抗體由美國(guó)NeoMarkers公司生產(chǎn)，SP試劑盒由北京中山生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。 1.2 方法。 1.2.1 對(duì)小鼠陰道上皮細(xì)胞有絲分裂的影響[1]:取雌性小鼠30只，腹腔注射乙烯雌，0.2mg/只，1次/d，連續(xù)3天。第4天將小鼠隨機(jī)分成5組(n=6)，以生理鹽水作為陰性對(duì)照、復(fù)方蒽林軟膏作為陽(yáng)性對(duì)照，分別于上午8時(shí)陰道灌注1%、2%及4%煤焦油洗劑、復(fù)方蒽林軟膏、生理鹽水各0.05ml。上午10時(shí)給每組小鼠腹腔注射秋水仙堿2mg/kg，并分別再做與前相同的陰道灌注。6h后處死小鼠，切取陰道組織，作常規(guī)組織切片，HE染色，在光鏡下計(jì)數(shù)500個(gè)小鼠陰道基底細(xì)胞中所出現(xiàn)的有絲分裂數(shù)，換算成每100個(gè)基底細(xì)胞的有絲分裂數(shù)(分裂指數(shù))。 1.2.2 對(duì)小鼠陰道上皮細(xì)胞PCNA的影響[1]:取雌性小鼠30只隨機(jī)分成5組(n=6)，分別做與前相同的雌化及陰道灌注，但不注射秋水仙堿，末次給藥后6h處死小鼠，切取陰道組織，作常規(guī)石蠟切片，經(jīng)抗原修復(fù)、山羊血清工作液孵育，加入1:100的一抗、室溫1h，滴加二抗工作液，辣根過(guò)氧化物酶—鏈霉素卵白素工作液37℃孵育30min。每步驟間均用pH7.4的PBS沖洗3次。用新配制的DABH2O2顯色。其中以淋巴結(jié)為陽(yáng)性對(duì)照，以PBS緩沖液替代一抗作陰性對(duì)照。光鏡下觀察PCNA陽(yáng)性表達(dá)率。PCNA的染色陽(yáng)性物質(zhì)呈棕黃色顆粒，主要位于細(xì)胞核。采用Garcia半定量分級(jí)法[2]：觀察10個(gè)高倍視野，細(xì)胞核棕黃色反應(yīng)為陽(yáng)性。①陽(yáng)性反應(yīng)著色深度:多數(shù)細(xì)胞核淺著色為1，深著色邊界清楚為2。②陽(yáng)性著色細(xì)胞比例:<20%為1級(jí)，20%~50%為2級(jí)，>50%為3級(jí)。以上兩項(xiàng)相加:2為(+)，3為(2+)，≥4為(3+)。 1.2.3 對(duì)小鼠尾鱗片表皮顆粒層形成的影響[2]:取30只雄性小鼠隨機(jī)分成5組(n=6)，分別以1%、2%及4%煤焦油洗劑、復(fù)方蒽林軟膏、生理鹽水各0.05ml涂抹尾部，2次/d，連續(xù)涂藥20天后處死小鼠，取鼠尾根部1~3cm表皮，常規(guī)組織切片，HE染色，光鏡下觀察，凡是一個(gè)鱗片有連續(xù)成行的顆粒層細(xì)胞者，判定為有顆粒層形成的鱗片，計(jì)數(shù)每100個(gè)鱗片中有顆粒層的鱗片數(shù)(△)。 1.2.4 對(duì)角叉菜致大鼠足跖腫脹的影響[3]:取Wistar大鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為5組(n=6)，分別以1%、2%及4%煤焦油洗劑、復(fù)方蒽林軟膏、生理鹽水各0.05ml涂抹每鼠右后肢足跖，2次/d，連續(xù)給藥5日。末次給藥后1h，每鼠右后肢足跖皮下注射1％角叉菜混懸液0.1ml/只致炎，以千分尺測(cè)量右后足趾致炎后0.5、1、3、5h的厚度，計(jì)算各組大鼠足趾腫脹率：腫脹率=(致炎后足跖厚度－致炎前足跖厚度)/致炎前足跖厚度×100％。 1.2.5 對(duì)豚鼠磷酸組織胺致癢閾的影響[4]:取豚鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為5組(n=6)，分別以1%、2%及4%煤焦油洗劑、復(fù)方蒽林軟膏、生理鹽水各0.05ml涂抹每鼠每只豚鼠右后足背，2次/d，連續(xù)給藥5日。末次給藥后2小時(shí)，每只豚鼠右后足背剃毛，并用粗砂紙擦傷剃脫毛處表皮面積約1cm2。10分鐘后開始在創(chuàng)面滴以0.01％磷酸組織胺溶液0.05ml/只。此后每隔3min滴一次，每次0.05ml/只，依0.01％、0.02％、0.03％、0.04％……遞增濃度，至出現(xiàn)豚鼠回頭舔右后足時(shí)所給予的總量即為致癢閾。 2 結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1、2、3、4、5。各濃度的煤焦油洗劑與陰性對(duì)照組相比，對(duì)小鼠陰道上皮細(xì)胞有絲分裂有顯著的抑制作用，且能顯著抑制小鼠陰道上皮PCNA的表達(dá)，對(duì)小鼠尾鱗片表皮顆粒層的形成有顯著的促進(jìn)作用，可使角叉菜膠所致的大鼠足跖腫脹顯著減輕(P＜0.05)，能顯著提高磷酸組織胺對(duì)豚鼠的致癢閾(P＜0.05)。上述各項(xiàng)作用中，不同濃度煤焦油洗劑的作用呈量效相關(guān)性；且各濃度的煤焦油洗劑的各項(xiàng)作用均明顯優(yōu)于復(fù)方蒽林軟膏。 表1 對(duì)小鼠陰道上皮細(xì)胞有絲分裂的影響(n=6，X-±SD)

與陰性對(duì)照組比較，*P＜0.05；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，＃P＜0.05 表2 對(duì)小鼠陰道上皮細(xì)胞PCNA表達(dá)的影響(n=6)

與陰性對(duì)照組比較，*P＜0.05；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，＃P＜0.05 表4 對(duì)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響(n=6，X-±SD)

與陰性對(duì)照組比較，*P＜0.05；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，＃P＜0.05 表5 對(duì)豚鼠磷酸組織胺致癢閾的影響(n=6，X-±SD)

與陰性對(duì)照組比較，*P＜0.05；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，＃P＜0.05 3 討論 煤焦油洗劑主要成分是煤焦油，外用治療銀屑病等皮膚病療效良好。本實(shí)驗(yàn)表明，煤焦油洗劑有抑制角質(zhì)形成細(xì)胞增殖、促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞正常分化的作用，可使角叉菜膠所致的大鼠足跖腫脹顯著減輕對(duì)急性炎癥有抑制作用，能明顯提高磷酸組織胺對(duì)豚鼠的致癢閾有抑制瘙癢的作用。煤焦油洗劑可作為治療銀屑病的良好備選藥劑之一，且能避免皮質(zhì)類固醇激素類外用藥的諸多副作用。