【摘要】 目的 考察人參總皂苷脂質體在羧甲基殼聚糖環境下的透皮效率以及對皮膚癌治療的有效性。方法 使用改良Franz擴散池法測定透皮效率，以化學誘導皮膚癌的小鼠為藥效學實驗對象。結果 羧甲基殼聚糖對人參總皂苷透皮效率的影響通過兩小樣本t檢驗計算，P<0.05;以上兩因素對于小鼠皮膚癌的作用組間比較采用配對t檢驗，P<0.05。結論 羧甲基殼聚糖對人參總皂苷脂質體透皮效率的促進有統計學意義;羧甲基殼聚糖和人參總皂苷的混合物對小鼠皮膚癌有效。

【關鍵詞】 脂質體;透皮;皮膚癌

Abstract：Objective To study transdermal efficiency and pharmacodynamics of ginseng con-saponin liposome.Methods By using the method of modified Franz diffusion cell to test transdermal efficiency of the liposome of total ginsenoside in the environment of Chitosan， with mice suffering from skin cancer as the sample. Results The effect of rboxymethyl chitosan on total ginsenoside transdermal efficiency was tested and calculated by two small samplest， P<0.05，the effect of the two factors mentioned above on skin cancer in mice groups was tested by comparing between different groups or by Fisher exact test， P<0.05. Conclusions The effect of carboxymethyl chitosan on total ginsenoside liposome transdermal efficiency and on the skin cancer are statistically significant.

Key words: liposome; transdermal; skin cancer; drug effect

人參是在最早的藥學經典《神農本草經》上就有記載的藥物，人參總皂苷是人參中的主要生理活性物質，它有改善學習記憶、抑制細胞凋亡、降糖降脂等藥理活性[1]。脂質體具有延長療效、避免耐藥性，還可以減少給藥劑量和降低不良反應的效果。羧甲基殼聚糖是天然的透皮促滲劑，具有成膜性、抗炎性、生物相容性，同時可以抑制腫瘤血管內皮細胞形成使腫瘤的毛細血管不能加長，腫瘤組織不能向周圍組織浸潤或轉移。因此，羧甲基殼聚糖可作為一種良好的藥用基質廣泛應用[2]。

本文將人參總皂苷脂質體置于羧甲基殼聚糖環境中研究其透皮效率變化以及其對由化學致癌物所誘導皮膚癌治療的有效性，該研究將為皮膚癌的臨床治療提供新的思路。

1 材 料

1.1 實驗動物

昆明種小鼠，雌雄各半，體重為(18±4)g(遼寧醫學院實驗動物中心)。

1.2 儀器

RE—52AA型旋轉蒸發儀(上海安亭電子儀器廠);JY96-Ⅱ型超聲波細胞粉碎儀(寧波新芝科學儀器研究所);紫外分光光度計(日本島津);TP-3型智能透皮擴散儀(南京新聯電子設備有限公司南京紅藍電子科技中心)。

1.3 試劑

人參總皂苷原料藥(遼寧鑫泰藥業有限公司);大豆磷脂酰膽堿 (上海金伴藥業有限公司，批號20020904);膽固醇 (天津東方試劑廠，進口分裝);羧甲基殼聚糖(北京潔爾爽高科技有限公司，型號SCJ-920);二甲基苯蒽(DMBA)(Fluka公司產品);丙酮(沈陽新化試劑廠);巴豆油(上海貝基生物科技有限公司，進口分裝);乙醇(天津市科密歐化學試劑有限公司);三氯甲烷(國藥集團化學試劑有限公司);乙醚(沈陽新化試劑廠)。

2 實驗方法

2.1 羧甲基殼聚糖濃度的選擇

配制1%～9%梯度濃度的羧甲基殼聚糖溶液，觀察其在試管中的狀態，以外觀良好呈現半透明乳白色為標準。各濃度羧甲基殼聚糖均能在較長時間穩定保存脂質體，可以根據具體情況所需選擇濃度。

2.2 羧甲基殼聚糖濃度對脂質體的影響

分別將各濃度的羧甲基殼聚糖溶液中加入等體積的人參總皂苷脂質體中混合均勻。于24、48、72 h后觀察，發現混合液穩定性良好。將其涂于置于37℃水浴中的玻璃板上，觀察各溶液的成膜時間。

2.3 實驗動物的處理

將健康的昆明種小鼠采取頸椎脫臼的方法處死。用手術剪剪去其背部皮膚上較長的毛，然后用電動除毛刀除盡余毛。剪取背部皮膚上約2 cm×2 cm大小區域于生理鹽水中沖洗干凈。在電熱板上快速移動以除去鼠皮上的皮下脂肪及粘液組織。將處理好的鼠皮置于生理鹽水中在4 ℃儲存，鼠皮必須在24 h內用完，以保證其生理活性。

2.4 體外透皮實驗

體外透皮實驗是采用改良Franz擴散池進行實驗的，接受液為37 ℃的生理鹽水。該裝置由上下兩個杯狀玻璃組件對合而成，皮膚加在中間形成上下兩室，上室是供給室，下室為接收室，在接收室的一側連有一個上傾的管道，供取樣、補充接收液或排除氣泡使用。主體組件外有恒溫水套層，實驗時通入恒溫水控制接收液溫度。接收室底部放置磁力攪拌子，裝置上下兩部分用鐵夾夾在一起。

將處理好的小鼠皮膚固定在供給池與接受池中間，角質層面向供給池，皮內層面向供給池。上下加緊后在接受池中注滿接受液，在供應池分別取未加殼聚糖的人參總皂苷脂質體和溶液中有9%殼聚糖的人參總皂苷脂質體各1.0 mL置于供給池中;并在接受池中注滿接受液，于(37±0.2)℃下恒溫水浴。開啟磁力攪拌器，將轉子的轉動速度調節為150 r×min定速攪拌。

于1，2，3，4，6，8，10，12 h共計8個時間點分別取出1.0 mL接受液，隨后向接受池中補充等量等溫的新鮮接受液。將取出的接受液用0.45 μm微孔濾膜過濾后，放入EP管中，置冰箱內保存，待測。

將處理好的接收液用濃度為95%的乙醇破乳后，分別用紫外分光光度法測定。

2.5 腫瘤誘發

將小鼠隨機分組，每組10 只，雌雄各半。各組均給相同劑量的DMBA，即在第1天、5天和7天，分別將DMBA丙酮液(150 μg/200 μL)涂抹于小鼠背部脫去毛發暴露的皮膚處(脫毛于涂藥前1 d進行)，共3 次;促癌階段各組均給同劑量的巴豆油，在相同部位涂抹巴豆油丙酮液(0.25%)，每次200 μL/只，每周2 次，直至試驗結束。

到實驗結束時，空白組腫瘤誘發率80%，平均每鼠荷瘤數2.5個。

2.6 藥效的初步考察

將等體積的殼聚糖環境下的人參總皂苷、人參總皂苷水溶液和蒸餾水涂布于小鼠無毛區，1 日3 次。

將殼聚糖環境下的人參總皂苷的涂布厚度達到1～1.5 mm，空白對照組涂抹至相同厚度。

2.7 統計分析方法 采用spss11.0統計軟件進行數據分析。