作者：金桂芳，張文軍，譚毓治

【摘要】 目的 研究鼻炎滴劑抗炎、解熱、縮血管及抑菌作用。方法 通過(guò)觀察鼻炎滴劑對(duì)棉球肉芽腫、耳廓腫脹和毛細(xì)血管通透性的影響，研究其抗炎作用;通過(guò)大鼠被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)觀察抗過(guò)敏作用;通過(guò)熱板法和扭體法實(shí)驗(yàn)觀察鎮(zhèn)痛作用;采用平板法觀察其體外抑菌作用。結(jié)果 鼻炎滴劑能顯著降低大鼠組胺性鼻炎鼻黏膜毛細(xì)血管通透性;對(duì)二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹均有非常顯著的抑制作用;對(duì)慢性炎癥大鼠棉球肉芽腫和角叉菜所致大鼠足腫脹有顯著的抑制作用;對(duì)傷寒、副傷寒甲、乙菌苗所引起的大鼠實(shí)驗(yàn)性發(fā)熱有顯著的解熱作用;鼻炎滴劑能降低兔耳灌流量，顯示收縮血管的作用;鼻炎滴劑在體外對(duì)肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯桿菌、乙型溶血性鏈球菌、甲型溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌均有較強(qiáng)的抗菌作用。結(jié)論 鼻炎滴劑具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗過(guò)敏、縮血管和抑菌作用，這些結(jié)果為鼻炎滴劑散風(fēng)、清熱、通竅，用于風(fēng)熱蘊(yùn)肺型急、慢性鼻炎等疾患提供了藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 鼻炎滴劑 抗炎 消腫 抑菌

鼻炎滴劑系佛山德眾藥業(yè)有限公司按中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)的中成藥，由鹽酸麻黃堿、黃芩苷、金銀花提取液、辛夷油、冰片等藥物組成，具有散風(fēng)、清熱、通竅功能，用于風(fēng)熱蘊(yùn)肺型急、慢性鼻炎。為進(jìn)一步為其治療作用提供藥理、藥效依據(jù)，筆者進(jìn)行了相關(guān)的藥效學(xué)研究。

1 材料

1.1 受試藥物

鼻炎滴劑(佛山德眾藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)08108，因本藥既有中藥提取液又另添加中藥有效成分，劑量無(wú)法用含生藥量表示，故本文中用樣品藥液的毫升數(shù)來(lái)表示);地塞米松磷酸鹽注射液，廣東三才醫(yī)藥集團(tuán)有限公司，批號(hào)20080855。阿司匹林腸溶片(以下簡(jiǎn)稱“阿司匹林”)，濟(jì)南永寧制藥股份有限公司，批號(hào)080108。鹽酸麻黃堿注射液(以下簡(jiǎn)稱“麻黃堿”)，東北制藥集團(tuán)公司沈陽(yáng)第一制藥廠。注射用氨芐西林鈉，山東瑞陽(yáng)制藥公司，批號(hào)：08032702;磷酸組織胺，上海生化試劑廠產(chǎn)品。角叉菜膠，遼寧省藥物研究所提供。伊文思藍(lán)，為Flucka產(chǎn)品;二甲苯(分析純)，中國(guó)人民解放軍第90662廠生產(chǎn)。傷寒、副傷寒甲、乙菌苗，衛(wèi)生部武漢生物制品研究所產(chǎn)品。

1.2 菌種

肺炎克雷伯桿菌[CMCC(B)46108]、乙型溶血性鏈球菌[CMCC(B)32204]、甲型溶血性鏈球菌[CMCC(B)32213]、變形桿菌[CMCC(B)49105]、金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26001]、大腸桿菌[CMCC(B)44101]，以上均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品菌檢定所;肺炎鏈球菌，廣東藥學(xué)院微生物學(xué)教研室提供。

1.3 動(dòng)物

NIH小鼠，體質(zhì)量19～21 g，雌雄各半，合格證號(hào)2008A001;SD大鼠，體質(zhì)量150～170 g，雌雄各半，合格證號(hào)2008A020;新西蘭兔，體質(zhì)量 2.0～2.2 kg，雌雄兼用，合格證號(hào)2008A004，均由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 抗炎實(shí)驗(yàn)

2.1.1 鼻炎滴劑對(duì)大鼠組胺性鼻炎鼻黏膜毛細(xì)血管通透性的影響[1，2] SD大鼠50只，隨機(jī)均分5組，即空白對(duì)照組(生理鹽水組)、鼻炎滴劑3個(gè)劑量組(高、中、低劑量組：高劑量組用原液，中、低劑量組分別將原液稀釋2、4倍，給藥體積均為0.04 mL/只)、地塞米松組。各實(shí)驗(yàn)組小鼠每日滴鼻給藥1次，給藥體積均為0.04 mL/只，連續(xù)3 d，末次給藥1 h后，分別給大鼠尾靜脈注射1%伊文思藍(lán)生理鹽水溶液0.4 mL/100 g，隨即滴鼻給予1%(ρ)磷酸組織胺0.02 mL/只(0.2 mg)，20 min后處死大鼠，將鼻腔分離剪下，剪碎置10 mL具塞離心管中，加7∶3(V∶V)丙酮與生理鹽水混合液4 mL浸泡，45 ℃孵育72 h，期間振搖數(shù)次，3 000 r/min離心15 min，取上清液于610 nm比色測(cè)定其吸光度。由結(jié)果可看出，鼻炎滴劑的3個(gè)劑量組吸光度均小于空白對(duì)照組，表明鼻炎滴劑能非常顯著降低大鼠組胺性鼻炎鼻黏膜毛細(xì)血管通透性，見表1。表1 鼻炎滴劑對(duì)大鼠組胺性鼻炎鼻黏膜毛細(xì)血管通透性的影響與空白對(duì)照組比較: **P<0.01(t檢驗(yàn))

2.1.2 鼻炎滴劑對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響[3] NIH小鼠50只，隨機(jī)均分5組，即空白對(duì)照組(生理鹽水組)、鼻炎滴劑3個(gè)劑量組(高、中、低劑量組：高劑量組用原液，中、低劑量組分別將原液稀釋2、4倍，給藥體積均為0.05 mL/只)、地塞米松組(0.05 mL/只，即0.25 mg)。各實(shí)驗(yàn)組小鼠每日耳廓涂藥1次，對(duì)照組涂以等量的生理鹽水，連續(xù)3次，末次涂藥后1 h，各組小鼠用蒸餾水洗去藥液，用干棉球擦凈。各組小鼠右耳涂二甲苯0.05 mL/只，左耳作對(duì)照，15 min后處死小鼠，用直徑7 mm的打孔器將雙耳相同部位等面積切下，用FA2104S電子分析天平(上海天平儀器廠)分別稱重，按下式計(jì)算右耳腫脹率：右耳腫脹率(%)=[(右耳片質(zhì)量-左耳片質(zhì)量)/左耳片質(zhì)量]×100% 。結(jié)果表明鼻炎滴劑對(duì)二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹均有非常顯著的抑制作用，且呈劑量依賴性，見表2。

2.1.3 鼻炎滴劑對(duì)大鼠棉球肉芽腫的影響[1] SD大鼠50只，隨機(jī)均分5組，即空白對(duì)照組(生理鹽水組)、鼻炎滴劑3個(gè)劑量組(高、中、低劑量組：高劑量組用原液，中、低劑量組分別將原液稀釋2、4倍，給藥體積均為4 mL/kg，分別為小鼠半數(shù)致死量的1/5、1/10、1/20)、地塞米松組(皮下注射給藥給藥)。 因局部給藥，難以觀察本項(xiàng)目的指標(biāo)，故灌胃給藥。實(shí)驗(yàn)時(shí)，用乙醚吸入麻醉，在每只鼠的左右腋窩部用碘酒消毒，75%(φ)酒精棉球脫碘后，各切開1 cm長(zhǎng)小口，用眼科鑷將30 mg的高壓滅菌棉球(各加入氨芐青霉素10 mg·mL-1·個(gè)-1，50 ℃烘干)從切口處植入皮下，隨后縫合皮膚。從手術(shù)當(dāng)日開始給藥，每日1次，連續(xù)7 d，第8天打開原切口，將棉球取出，剔除脂肪組織，70 ℃烘干，稱重。將稱得的質(zhì)量減去棉球原質(zhì)量，即為肉芽腫質(zhì)量。結(jié)果顯示，鼻炎滴劑組的棉球肉芽腫干重明顯小于空白對(duì)照組，說(shuō)明其對(duì)大鼠棉球肉芽腫有顯著的抑制作用，見表3。表2 鼻炎滴劑對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響表3 鼻炎滴劑對(duì)大鼠棉球肉芽腫的影響

2.1.4 鼻炎滴劑對(duì)大鼠足腫脹的影響[1，4] SD大鼠50只，隨機(jī)均分5組，即空白對(duì)照組(生理鹽水組)、鼻炎滴劑3個(gè)劑量組(高、中、低劑量組分別為4 mL、2 mL、1 mL樣品液/kg，中、低劑量組分別將原液稀釋2、4倍，給藥體積均為4 mL/kg，分別為小鼠半數(shù)致死量的1/5、1/10、1/20)、地塞米松組(皮下注射給藥)。 因局部給藥，難以觀察本項(xiàng)目的指標(biāo)，故灌胃給藥。連續(xù)3 d，用軟皮尺先測(cè)定每鼠右后肢正常踝關(guān)節(jié)周長(zhǎng)，末次給藥1 h后，分別在大鼠右后足跖皮下注射1%角叉菜膠混懸液0.05 mL/只，致炎。隨后分別于1、2、4、6 h各測(cè)1次右后肢踝關(guān)節(jié)周長(zhǎng)，記錄結(jié)果，按下式計(jì)算腫脹率：

腫脹率(%)=

(致炎后周長(zhǎng)-致炎前周長(zhǎng))/致炎前周長(zhǎng)×100%

結(jié)果可看出，在給藥后不同時(shí)間，與空白對(duì)照組相比，鼻炎滴劑用藥組和陽(yáng)性對(duì)照組腫脹率都有顯著下降，說(shuō)明鼻炎滴劑可有效抑制角叉菜所致大鼠足腫脹，見表4。表4 鼻炎滴劑對(duì)角叉菜所致大鼠足腫脹的影響

2.2 鼻炎滴劑對(duì)實(shí)驗(yàn)性發(fā)熱大鼠體溫的影響

取SD大鼠50只，體質(zhì)量150～170 g，雌雄兼用，先測(cè)正常肛溫2～3次，隔30 min測(cè)1次，連續(xù)2次測(cè)定體溫相差不應(yīng)大于0.2℃，取平均值為正常體溫。個(gè)體之間體溫相差不大于1.0℃。每只大鼠皮下注射傷寒、副傷寒甲、乙菌苗3 mL/kg，每隔1 h測(cè)量1次肛溫，待體溫升高0.6 ℃以上時(shí)(約1～4 h)，取符合要求大鼠隨機(jī)均分5組，每組10只，立即開始給藥。即空白對(duì)照組(生理鹽水組)、鼻炎滴劑3個(gè)劑量組(高、中、低劑量組分別為4 mL、2 mL、1 mL樣品液/kg，中、低劑量組分別將原液稀釋2、4倍，給藥體積均為4 mL/kg，分別為小鼠半數(shù)致死量的1/5、1/10、1/20)、阿司匹林組。給藥后30、60、120 min各測(cè)量體溫1次[5]。結(jié)果顯示，鼻炎滴劑3個(gè)劑量組對(duì)傷寒、副傷寒甲、乙菌苗所引起的大鼠實(shí)驗(yàn)性發(fā)熱有顯著的解熱作用，見表5。表5 鼻炎滴劑對(duì)實(shí)驗(yàn)性發(fā)熱大鼠體溫的影響

2.3 鼻炎滴劑對(duì)離體兔耳血管灌流的影響

用ρ=0.4%戊巴比妥鈉靜脈麻醉(1 mL/kg)將兔麻醉，俯臥位固定于兔臺(tái)上。剪去耳根部毛，于兔耳根凸面正中，在此血管處， 順血管走向切開皮膚，約2～3 cm即見兔耳靜脈。仔細(xì)分離兔耳動(dòng)脈約1 cm長(zhǎng)，并于其下穿二根線，結(jié)扎近心端，在此結(jié)扎點(diǎn)遠(yuǎn)側(cè)稍許作一“V”形切口，插入玻璃套管(或細(xì)小塑料管)予以結(jié)扎。用粗剪刀剪下全兔耳，用洛氏液灌注動(dòng)脈沖洗血管中存留的血液，直到流出的液體無(wú)色為止。

將兔耳固定在五角板上，以45°傾角把該板固定于鐵支架上，兔耳動(dòng)脈插管經(jīng)橡皮管與盛洛氏液瓶連接，并向瓶?jī)?nèi)持續(xù)通O2，或95%的混合氣體。貯液瓶距兔耳動(dòng)脈約60 cm左右， 并使灌流液用38 ℃水浴器保溫，調(diào)節(jié)橡皮管螺旋夾，使由耳靜脈流出的灌流經(jīng)玻板角流下的速度約為30～40滴/min，記錄3 min血流量，取恒定后的平均值。分別在不同的兔耳，于橡皮管近插管處緩慢注入洛氏液或供試藥液(高劑量組用原樣品液，中、低劑量組分別用洛氏液稀釋2、4倍)0.5 mL/只，觀察并記錄給藥前及給藥后第1、3、5、10分鐘的滴數(shù)。待前一個(gè)藥物的作用消失后才能進(jìn)行下一個(gè)藥的試驗(yàn)[ 6 ]。結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，鼻炎滴劑3個(gè)劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組均能降低兔耳灌流量，提示其有收縮血管、降低毛細(xì)血管通透性、減輕水腫的作用，見表6。表6 鼻炎滴劑對(duì)離體兔耳血管灌流的影響

2.4 鼻炎滴劑的體外抑菌試驗(yàn)[1，3]

2.4.1 菌懸液的制備 先將5種凍干菌株分別接種至血清肉湯中，37 ℃培養(yǎng)18 h，從各增菌液中分別挑取一環(huán)細(xì)菌接種至5 mL血清肉湯中，37 ℃ 18 h;離心(2 000 r/min，10 min)，棄去上清;以無(wú)菌生理鹽水洗滌，再次離心;各管沉淀以無(wú)菌生理鹽水稀釋。采用比濁法使5種菌懸液濃度均為1×105 CFU /mL ，備用。

2.4.2 樣品稀釋 采用試管系列稀釋法，將鼻炎滴劑的樣品用血清肉湯稀釋成6個(gè)不同的稀釋度，即1/5、1/10、1/20、1/40、1/80和1/160。

2.4.3 細(xì)菌接種 將比濁后的菌懸液接種至含藥肉湯中，接種量為50 μL/管。同時(shí)設(shè)立陽(yáng)性、陰性和空白對(duì)照組，其中陽(yáng)性對(duì)照：不加藥，加菌;陰性對(duì)照：加80 μg/mL的氨芐西林，加菌;空白對(duì)照：加藥，不加菌。

2.4.4 細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果 37 ℃溫箱中培養(yǎng)24 h后，觀察各細(xì)菌生長(zhǎng)的情況。以澄清管所含藥物的最低濃度確定為最低抑菌濃度(MIC)。從澄清管中各挑取一環(huán)肉湯，分別劃線接種至不含藥物的平板上。37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察有無(wú)菌落形成以確定藥物的最低殺菌濃度(MBC)。

2.4.5 抑菌試驗(yàn)結(jié)果 鼻炎滴劑在體外對(duì)肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯桿菌、乙型溶血性鏈球菌、甲型溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌均有不同程度的抗菌作用，見表7。表7 鼻炎滴劑的抗菌作用

3 討 論

鼻炎的炎癥表現(xiàn)以局部血管擴(kuò)張和毛細(xì)血管通透性增加為特征，本實(shí)驗(yàn)選擇慢性炎癥大鼠棉球肉芽腫、二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹和角叉菜所致大鼠足腫脹3個(gè)炎癥模型進(jìn)行研究，結(jié)果顯示鼻炎滴劑有較好地抑制炎性水腫發(fā)生的作用;組胺在變應(yīng)性鼻炎發(fā)病機(jī)制中具有重要作用，它是目前確定的唯一能誘發(fā)出全部鼻變態(tài)反應(yīng)癥狀如鼻癢、噴嚏、鼻清涕及鼻塞等的炎癥介質(zhì)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，鼻炎滴劑能有效拮抗組胺的致炎作用，減輕鼻黏膜毛細(xì)血管通透性增加，從而有利于鼻炎的治療;兔耳血管灌流量實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，鼻炎滴劑組可以降低兔耳灌流量，具有縮血管的作用;結(jié)合鼻炎滴劑對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性發(fā)熱顯著的解熱作用及體外抑菌結(jié)果，提示鼻炎滴劑具有較好的抗炎、抑菌、收縮血管、減輕水腫的作用，從而為闡明鼻炎滴劑具有散風(fēng)、清熱、通竅功能，臨床用于風(fēng)熱蘊(yùn)肺型急、慢性鼻炎等疾患引起的鼻黏膜水腫、鼻塞提供了藥理學(xué)參考。鼻炎的炎癥表現(xiàn)以局部血管擴(kuò)張和毛細(xì)血管通透性增加為特征，本實(shí)驗(yàn)選擇慢性炎癥大鼠棉球肉芽腫、二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹和角叉菜所致大鼠足腫脹3個(gè)炎癥模型進(jìn)行研究，結(jié)果顯示鼻炎滴劑有較好地抑制炎性水腫發(fā)生的作用;組胺在變應(yīng)性鼻炎發(fā)病機(jī)制中具有重要作用，它是目前確定的唯一能誘發(fā)出全部鼻變態(tài)反應(yīng)癥狀如鼻癢、噴嚏、鼻清涕及鼻塞等的炎癥介質(zhì)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，鼻炎滴劑能有效拮抗組胺的致炎作用，減輕鼻黏膜毛細(xì)血管通透性增加，從而有利于鼻炎的治療;兔耳血管灌流量實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，鼻炎滴劑組可以降低兔耳灌流量，具有縮血管的作用;結(jié)合鼻炎滴劑對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性發(fā)熱顯著的解熱作用及體外抑菌結(jié)果，提示鼻炎滴劑具有較好的抗炎、抑菌、收縮血管、減輕水腫的作用，從而為闡明鼻炎滴劑具有散風(fēng)、清熱、通