作者：李安源 呂紅 孫蓉 呂麗莉 張希林 王平

【摘要】 目的 探討寧動(dòng)顆粒對(duì)抽動(dòng)穢語綜合征的藥效學(xué)及其毒性的影響。方法 采用寧動(dòng)顆粒灌胃法觀察對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響、對(duì)閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠率的影響、對(duì)去水嗎啡(APO)引起小鼠攀爬行為的影響、對(duì)小鼠腦內(nèi)多巴胺（DA）含量的影響及對(duì)小鼠急性毒性的影響。結(jié)果 寧動(dòng)顆粒高、低劑量均可明顯抑制小鼠的自主活動(dòng)能力；高劑量有協(xié)同閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠的作用；高、低劑量均有明顯抑制APO引起的小鼠黑質(zhì)-紋狀體系統(tǒng)內(nèi)DA功能增強(qiáng)的作用，明顯縮短持續(xù)垂直攀爬時(shí)間；高劑量可以降低腦內(nèi)DA含量，低劑量也有降低腦內(nèi)DA含量的作用趨勢(shì)。急性毒性試驗(yàn)1 d內(nèi)給小鼠藥量相當(dāng)于兒童用量的77.3倍，小鼠生存良好。結(jié)論 藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)證明寧動(dòng)顆粒能降低腦內(nèi)DA含量，有鎮(zhèn)靜、拮抗APO引起的攀爬行為增強(qiáng)及助睡眠作用；毒理學(xué)表明寧動(dòng)顆粒無明顯毒副反應(yīng)。

【關(guān)鍵詞】 寧動(dòng)顆粒/治療應(yīng)用； 多動(dòng)穢語綜合征/中醫(yī)藥療法； 藥理學(xué)； 藥物毒性； 動(dòng)物，實(shí)驗(yàn)

【Abstract】 Objective To study the pharmacodynamics and toxicity of Ningdong granule for Tourette syndrome (TS). Methods Ningdong granule was given to the mouse by intragastric administration.After that， observe the effect on autonomic activities of mouse，the mouse sleep rate at subthreshold dose of sodium pentobarbital，the special climbing behavior caused by Apomorphine(APO)， the dopamine(DA) content in mouse brain and the acute toxicity. Results Both the high and low dose of Ningdong granule could obviously inhibit mouse special climbing behavior.High dose could function together with subthreshold dose of sodium pentobarbital to cause mouse sleep.Both the high and low dose could inhibit DA function of mouse substantia nigracorpus striatum，and could obviously shorten mouse continual vertical creeping.The high dose could lower brain DA content.The low dose had the tendency of lowering brain DA content.In the acute toxicity test，the dose corresponding to 77.3 times of children dose was given to the mouse.The mouse lived well. Conclusion Ningdong granule can lower brain DA content.It has the function of sedation，antagonizes creeping caused by APO and helps sleep.Toxicology certifies that it has no obvious toxic action.

【Key words】 Ningdong granule/Application to treatment； Tourette syndrome/TCM therapy； pharmacology； Toxicology； Animal expertimental;

抽動(dòng)穢語綜合征是小兒神經(jīng)系統(tǒng)的一種疑難病。目前尚無理想的治療藥物，寧動(dòng)顆粒是臨床治療抽動(dòng)穢語綜合征的有效藥物。

為進(jìn)一步探討其作用機(jī)制及安全性，山東省中醫(yī)藥研究院藥理室和山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院中醫(yī)科于200512～200608進(jìn)行了藥效學(xué)和毒理學(xué)研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠210只，雌雄各半，體質(zhì)量18～22 g，由山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)SCXK（魯）20030004。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 寧動(dòng)顆粒：由山東省立醫(yī)院藥劑科提供，批號(hào)：20041216。

1.1.3 藥效學(xué)劑量折算 20 kg兒童日用量30 g，按公式折算60 kg成人日用量［1］：20 kg兒童日用量×1.7×成人體表面積／兒童體表面積=30 g／d×l.7×1.65／0.8=105.2 g／d。小鼠給藥高、低劑量，按體表面積比值折算分別為27.4，13.7 g／（kg·d），相當(dāng)于臨床20 kg兒童每千克日用量的18.2，9.1倍；按0.2 mL／kg鼠重的體積灌胃給藥。

1.1.4 儀器與試劑 高效液相色譜儀、電化學(xué)檢測(cè)器、C18色譜柱ODS：10 μm流動(dòng)相：0.015 mol/L氯乙酸-氫氧化鈉緩沖液：甲醇的混合液(94∶6)。多巴胺(DA)標(biāo)準(zhǔn)液配制：分析純DA溶于0.1 mol/L HCl，質(zhì)量濃度為1.0 g／L，然后稀釋10倍，冰箱保存，再稀釋100倍作為標(biāo)準(zhǔn)液，質(zhì)量濃度為1.0 mg／L，進(jìn)樣量為4 μL。

1.2 方法

1.2.1 寧動(dòng)顆粒對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響 取昆明種小鼠52只，按體質(zhì)量隨機(jī)分成4組：空白對(duì)照組、高劑量組、低劑量組、安定組，每組13只。給藥劑量分別為：藥物高、低劑量組給寧動(dòng)顆粒27.4，13.7 g／(kg·d)，安定組給安定6.5 mg／(kg·d)，高、低劑量組分別按25 mL/kg給藥，空白對(duì)照組給等體積水灌胃，每日1次，連續(xù)10 d；安定組采取一次性給藥，末次藥后1 h，記錄2 min內(nèi)自主活動(dòng)數(shù)，結(jié)果進(jìn)行組間統(tǒng)計(jì)學(xué)處理［2］。

1.2.2 寧動(dòng)顆粒對(duì)閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠率的影響 取昆明種小鼠52只，按體質(zhì)量隨機(jī)分成4組：空白對(duì)照組、高劑量組、低劑量組、安定組，每組13只。給藥劑量分別為：藥物高、低劑量組給寧動(dòng)顆粒27.4，13.7 g／(kg·d)，安定組給安定6.5 mg／(kg·d)，高、低劑量組分別按25 mL/kg給藥，空白對(duì)照組給等體積水灌胃，每日1次，連續(xù)10 d；安定組采取一次性給藥，末次藥后1 h，逐只稱重、腹腔注射閾下劑量戊巴比妥鈉30 mg/kg，按10 mL/kg給藥，記錄15 min各小鼠的睡眠情況，結(jié)果進(jìn)行組間統(tǒng)計(jì)學(xué)處理［2］。

1.2.3 寧動(dòng)顆粒對(duì)去水嗎啡（APO）引起小鼠攀爬行為的影響 取昆明種小鼠52只，按體質(zhì)量隨機(jī)分成4組：空白對(duì)照組、高劑量組、低劑量組、氟哌啶醇組，每組13只。給藥劑量分別為：藥物高、低劑量給寧動(dòng)顆粒27.4，13.7 g／(kg·d)，氟哌啶醇組給氟哌啶醇0.2 mg／(kg·d)，高、低劑量組分別按25 mL/kg給藥，空白對(duì)照組給等體積水灌胃，每日1次，連續(xù)10 d；氟哌啶醇組采取一次性給藥，末次藥后45 min，皮下注射APO 1.0 mg/kg，放入鐵絲籠內(nèi)適應(yīng)環(huán)境15 min，將動(dòng)物放到垂直懸掛的鐵絲網(wǎng)上，開始計(jì)時(shí)，記錄動(dòng)物連續(xù)攀爬的時(shí)間(以持續(xù)停止攀爬10 s視為不攀爬的標(biāo)志)，結(jié)果進(jìn)行組間統(tǒng)計(jì)學(xué)處理［2］。

1.2.4 寧動(dòng)顆粒對(duì)小鼠腦內(nèi)DA含量的影響 取昆明種小鼠32只，按體質(zhì)量隨機(jī)分成4組：空白對(duì)照組、高劑量組、低劑量組、氟哌啶醇組，每組8只。給藥劑量分別為：藥物高、低劑量給寧動(dòng)顆粒27.4，13.7 g/(kg·d)，氟哌啶醇組給氟哌啶醇0.2 mg／(kg·d)，高、低劑量組分別按25 mL/kg給藥，空白對(duì)照組給等體積水灌胃，每日1次，連續(xù)10 d；氟哌啶醇組采取一次性給藥，末次藥后1 h，將動(dòng)物麻醉后處死，迅速取腦，按Glowinsky法，取下丘腦，干冰固化后稱重，質(zhì)量在8～12 mg，放入塑料管中，每管加入0.05 mol／L冰HCLO4，用勻漿器打勻漿1 min低溫離心30 min，去上清液50 μL，進(jìn)樣檢測(cè)腦內(nèi)DA含量，結(jié)果進(jìn)行組間統(tǒng)計(jì)學(xué)處理［3］。

1.2.5 寧動(dòng)顆粒對(duì)小鼠急性毒性的影響 取體質(zhì)量在18～22 g小鼠20只，按體質(zhì)量隨機(jī)分為寧動(dòng)顆粒組和空白對(duì)照組，每組10只，首先進(jìn)行LD50預(yù)試，發(fā)現(xiàn)無法測(cè)定LD50，故進(jìn)行MTD測(cè)試。實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物禁食12 h，然后按最大濃度、最大體積給藥，1 d內(nèi)給藥5次，連續(xù)觀察7 d，記錄實(shí)驗(yàn)前后體質(zhì)量變化并密切觀察動(dòng)物用藥后生命體征變化。

2 結(jié)果

2.1 寧動(dòng)顆粒對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響 結(jié)果表明，寧動(dòng)顆粒高劑量可以明顯抑制動(dòng)物的自主活動(dòng)能力，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。低劑量也能明顯抑制動(dòng)物的自主活動(dòng)能力，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。表1 寧動(dòng)顆粒對(duì)小鼠自主活動(dòng)能力的影響注：與空白對(duì)照組比較，aP<0.05，bP<0.01，cP<0.001。

2.2 寧動(dòng)顆粒對(duì)閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠率的影響 結(jié)果表明，寧動(dòng)顆粒高劑量有一定的協(xié)同閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠的作用，與空白對(duì)照組比較呈現(xiàn)一定的作用趨勢(shì)，低劑量作用不顯著。見表2。表2 寧動(dòng)顆粒對(duì)閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠率的影響 注：與空白對(duì)照組比較，aP<0.001。

2.3 寧動(dòng)顆粒對(duì)APO引起小鼠攀爬行為的影響 結(jié)果表明寧動(dòng)顆粒高、低劑量均可以明顯抑制APO引起的動(dòng)物黑質(zhì)-紋狀體系統(tǒng)內(nèi)DA功能增強(qiáng)的作用，能明顯縮短持續(xù)垂直攀爬時(shí)間，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。 表3 寧動(dòng)顆粒對(duì)APO引起小鼠攀爬行為的影響注：與空白對(duì)照組比較，aP<0.05，bP<0.001。

2.4 寧動(dòng)顆粒對(duì)小鼠腦內(nèi)DA含量的影響 結(jié)果表明寧動(dòng)顆粒高劑量可以降低腦內(nèi)DA含量，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。表4 寧動(dòng)顆粒對(duì)小鼠腦內(nèi)DA含量的影響注：與空白對(duì)照組比較，aP<0.05。

2.5 寧動(dòng)顆粒對(duì)小鼠急性毒性的影響 寧動(dòng)顆粒組小鼠給藥量達(dá)到116 g／（kg·d)，相當(dāng)于臨床20 kg兒童每千克日用量的77.3倍，藥后小鼠明顯安靜，進(jìn)食、飲水、神經(jīng)反射及體質(zhì)量變化均未見明顯異常，小鼠生存良好，無一只死亡。表明寧動(dòng)顆粒用于臨床安全、低毒。見表5。表5 寧動(dòng)顆粒對(duì)小鼠的急性毒性試驗(yàn)

3 討論

抽動(dòng)穢語綜合征是一種兒童精神障礙性疾病。臨床以反復(fù)發(fā)作、不自主的多發(fā)性肌肉抽動(dòng)、喉中發(fā)出奇特叫聲或罵詈不避親疏為特征，多見于學(xué)齡期兒童。近年來發(fā)病率明顯升高，發(fā)病原因目前尚不十分清楚，其發(fā)病機(jī)制似與DA活性過度有關(guān)［4］。西藥治療以氟哌啶醇、安定為主要藥物取得了較好的療效，但具有副反應(yīng)多，停藥后復(fù)發(fā)率高的特點(diǎn)。本病屬于中醫(yī)“驚風(fēng)”、“抽搐”、“瘛疭”、“筋惕肉瞤”等范疇。該病發(fā)生的關(guān)鍵是心肝虧虛，虛風(fēng)內(nèi)動(dòng)；復(fù)遇精神刺激，情緒波動(dòng)及學(xué)習(xí)緊張等因素導(dǎo)致耗神傷精，陰血虧虛，出現(xiàn)肌肉筋脈失養(yǎng)、言語欠聰，諸癥逢生。治療以養(yǎng)心柔肝、熄風(fēng)止痙原則。

寧動(dòng)顆粒由黨參、麥冬、白芍、龍骨、牡蠣、地龍、甘草等組成。實(shí)驗(yàn)研究表明寧動(dòng)顆粒對(duì)提高患兒免疫力有明顯作用。有關(guān)研究表明黨參多糖對(duì)體液免疫有較強(qiáng)促進(jìn)作用，并在小劑量給藥時(shí)對(duì)細(xì)胞免疫有促進(jìn)作用［5］；地龍肽激活并促進(jìn)自然殺傷細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞，對(duì)溶血性鏈球菌、草綠色鏈球菌有抑制作用［6］；白芍具有抗炎作用；甘草配伍有較強(qiáng)的協(xié)同作用。白芍總苷對(duì)金葡菌、溶血性鏈球菌、草綠色鏈球菌、肺炎球菌、傷寒桿菌均有不同程度抑制作用，且抗菌作用強(qiáng)，抗菌譜廣［7］。藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)證明寧動(dòng)顆粒有鎮(zhèn)靜、拮抗APO引起的攀爬行為增強(qiáng)并有一定的助睡眠作用，并能降低腦內(nèi)DA含量；毒理學(xué)表明安全、低毒，為寧動(dòng)顆粒的臨床應(yīng)用提供了藥理學(xué)依據(jù)及安全保障。