2 結(jié)果 2.1 急性毒性學(xué)實(shí)驗(yàn) 通過(guò)急性毒性實(shí)驗(yàn)得到LD50值分別為：CABBG 36.8937mg/kg，CAABG 89.23549mg/kg，CAIBG 767.7753mg/kg；95%可信區(qū)間分別為CABBG組32.0052～42.5289mg/kg，CAABG組76.7182～103.8025mg/kg，CAIBG組663.748～888.106mg/kg。各實(shí)驗(yàn)組小鼠肉眼觀察，除肝臟增大外未見(jiàn)明顯變化，病理HE切片顯示肝細(xì)胞有不同程度的腫脹和空泡變。 2.2 外周血白細(xì)胞變化 實(shí)驗(yàn)第5、7、9天CABBG、CAABG、CAIBG組小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)、單核細(xì)胞數(shù)均顯著增高，其中第7天、第9天，CAIBG組白細(xì)胞數(shù)、單核細(xì)胞數(shù)較陽(yáng)性對(duì)照組rhG-CSF升高，差異有顯著性。

注：Note：*P＜0.05，compared with the normal control；**P＜0.05，compared with the positive control

注：Note：*P＜0.05，compared with the normal control；**P＜0.05，compared with the positive control

注：Note：*P＜0.05，compared with the positive control

2.3 脾臟、胸腺指數(shù)變化 實(shí)驗(yàn)第5、7、9天，各組小鼠胸腺指數(shù)比較，差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。各組小鼠給藥后，脾臟指數(shù)均增加。

注：Note：*P＜0.05，compared with the positive control

2.4 藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)病理組織學(xué)改變 脾臟：白髓、紅髓分界不甚清楚，紅髓內(nèi)細(xì)胞數(shù)增多，與空白對(duì)照組比較，CABBG、CAABG、CAIBG組脾竇出現(xiàn)較多的巨核細(xì)胞；骨髓：實(shí)驗(yàn)組小鼠骨髓細(xì)胞增生活躍，與空白對(duì)照組比較，CABBG、CAABG、CAIBG組的巨核細(xì)胞數(shù)增多，提示巨核細(xì)胞系增生活躍。 3 討論 多能造血干細(xì)胞具有多向分化的潛能，成年小鼠體內(nèi)的多能造血干細(xì)胞主要分布在脾臟和骨髓［3］。本研究顯示，實(shí)驗(yàn)第7天時(shí)，各實(shí)驗(yàn)組白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)都較rhG-CSF高(P＜0.05)；實(shí)驗(yàn)第7天、第9天，CAIBG升高外周血白細(xì)胞、單核細(xì)胞數(shù)明顯高于CABBG、CAABG和rhG-CSF(P＜0.05)，說(shuō)明β-葡聚糖，尤其是CAIBG可刺激血液系統(tǒng)白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞數(shù)不同程度的升高。實(shí)驗(yàn)第7天，CABBG、CAABG、CAIBG組小鼠脾臟指數(shù)均與rhG-CSF差異有顯著性(P＜0.05)；第9天，CAIBG脾臟指數(shù)較rhG-CSF、CABBG、CAABG組高，統(tǒng)計(jì)學(xué)表明差異均具有顯著性(P＜0.05)。與成年小鼠體內(nèi)造血干細(xì)胞的分布一致，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)CABBG、CAABG、CAIBG組小鼠的組織病理學(xué)改變主要體現(xiàn)在骨髓和脾臟。與空白對(duì)照組比較，三組小鼠脾臟、骨髓巨核細(xì)胞數(shù)增多，CAIBG組要更明顯。因此，綜合外周血細(xì)胞數(shù)、脾臟指數(shù)、組織改變，我們推測(cè)β-葡聚糖在刺激小鼠外周血白細(xì)胞總數(shù)升高的過(guò)程中可能與刺激CFU-S增殖，向粒系、巨核系組細(xì)胞分化，進(jìn)而生成粒細(xì)胞、單核細(xì)胞。 造血器官中基質(zhì)細(xì)胞是造血微環(huán)境中重要的成分，與造血有關(guān)的基質(zhì)細(xì)胞涉及到巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、網(wǎng)狀細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和載脂肪細(xì)胞。其中，巨噬細(xì)胞被證明是在造血發(fā)生過(guò)程中有重要作用的一個(gè)微環(huán)境因素。巨噬細(xì)胞可通過(guò)細(xì)胞相互作用和分泌CSF、Epo、BPA、PGE和IL-1因子，調(diào)節(jié)所有四系血細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化［4］。以往研究證實(shí)念珠菌多糖可刺激巨噬細(xì)胞釋放細(xì)胞因子（CK）如IL-6、IL-8、IL-1、TNF等［5，6］。這些細(xì)胞因子可調(diào)控造血細(xì)胞的增殖活動(dòng)：IL-1、TNF可刺激內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生粒細(xì)胞集落刺激因子（G-CSF）及粒-巨噬系集落刺激因子（GM-CSF），G-CSF 和GM-CSF是使粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的母細(xì)胞增殖分化的特異性誘導(dǎo)劑，并能刺激骨髓向外周血液釋放成熟的中性粒細(xì)胞，縮短中性粒細(xì)胞的成熟期［7］。同時(shí)，CSF可作用于粒-單系祖細(xì)胞（CFU-GM），誘導(dǎo)其增殖分化。IL-1還能激活干細(xì)胞從G0期進(jìn)入增殖周期，擴(kuò)大干細(xì)胞池；可為早期干細(xì)胞對(duì)CSF起反應(yīng)做準(zhǔn)備，并誘導(dǎo)輔助細(xì)胞產(chǎn)生CSF及其他CK，從而間接調(diào)節(jié)造血。 β-葡聚糖是念珠菌重要的抗原決定簇［8］，單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞上都存在β-葡聚糖的特異性受體［9］。白色念珠菌的三種溶解性的β-葡聚糖，在結(jié)構(gòu)上都是符合單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞上β-葡聚糖受體對(duì)于配體的要求，即能被特異識(shí)別β-（1→3）和β-（1→6）糖苷鍵［10］。巨噬細(xì)胞作為一類抗原遞呈細(xì)胞（APC）攝取β-葡聚糖抗原，隨后誘導(dǎo)性的表達(dá)高水平MHC，MHC與Th細(xì)胞上的TCR和CD4相互作用。使Th細(xì)胞功能增強(qiáng)，IL-2分泌增多，IL-2又能保持T細(xì)胞的存活與增殖Th細(xì)胞被激活后刺激B細(xì)胞分化、增殖［11］。實(shí)驗(yàn)中，小鼠脾臟指數(shù)的明顯增加、脾臟、骨髓細(xì)胞增生，說(shuō)明了β-葡聚糖在升高外周血白細(xì)胞的同時(shí)，也對(duì)激活機(jī)體的整個(gè)免疫系統(tǒng)活性產(chǎn)生影響。因此，CAABG、CABBG、CAIBG升高小鼠外周血白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的作用可能與各組β-葡聚糖能不同程度的被單核、巨噬細(xì)胞識(shí)別從而產(chǎn)生一系列細(xì)胞因子，刺激造血系統(tǒng)和促進(jìn)中性粒細(xì)胞增殖有關(guān)。 免疫調(diào)節(jié)劑作為一種免疫治療的藥物已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床。多糖作為一類免疫調(diào)節(jié)劑，不僅毒副作用小，資源豐富，而且具有明顯的調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)的作用。本研究說(shuō)明白色念珠菌β-葡聚糖尤其是不溶性的β-葡聚糖能顯著增加小鼠脾重，并能對(duì)抗由CTX所致的小鼠脾臟萎縮及白細(xì)胞水平降低，是一種較好的免疫增強(qiáng)物質(zhì)。

1 Kouki Ishitani.Antitumor activity of polygalactosamine isolated from Paecilomyces sp.I-1 strain.J Pharmacobio Dyn，1988，11：58. 2 Gopal PK，Sullivan PA，ShepHerd MG.Analysis of wall glucans from yeast，hypHal and germ-tube forming cells of Candida albicans.J Gen Microbiol，1984，130：3295-310. 3 祝彼得.造血干細(xì)胞研究進(jìn)展.重慶醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1985，10：295. 4 徐豐彥，張鏡如.人體生理學(xué).北京：人民衛(wèi)生出版社，1989，952-970. 5 LI Min，CHEN Yun，SHAO Feng，et al.Isolation and Purification of the Alkali-soluble β –glucan from Cell Wall of Candida albicans.Chin J Dermatol，2000，33(5)：311-313. 6 Manners D J，Masson A J，Patterson J C，et al.The structure of beta-(1→3)- D-glucan from yeast cell walls.Biochemical Journal，2000，135：31-36. 7 楊藻宏.臨床用藥的藥理學(xué)基礎(chǔ).北京：北京科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，1997，133. 8 Cassone A，Bistoni F，Cenci E，et al.Immunopotentiation of anticancer chemotherapy by Candida albicans，other yeasts and insoluble glucan in an experimental lympHoma model.Sabouraudia，1982，20(2)：115-125. 9 馬學(xué)清.中藥多糖的免疫增強(qiáng)作用.中國(guó)實(shí)驗(yàn)臨床免疫學(xué)雜志，1996，8(2)：40. 10 LI Min，CHEN Qing，SUN Jun-jiang，et al.The effect of β–glucan of cell wall from Candida albicans on interleukin-6 and interleukin-8 production by human peripHeral blood mononuclear cells in vitro.J Clin Dermatol，2002，31(6)：349-350. 11 周光炎.免疫學(xué)，第6版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002，87-100；105-115；148-160.