龍香平喘膠囊止咳平喘藥效學實驗研究
黃永軍 馬 濤
2.2 龍香平喘膠囊對豚鼠肺溢流的影響 取豚鼠48只,體重200~300g,按文獻[2]法,動物隨機分為6組,每組8只,實驗組灌服LXP 0.2、0.4、0.8g/kg,蛇膽川貝散0.24g/kg,空白對照組灌胃給等容積0.5%CMCNa5ml/kg,每天1次,連續5天。實驗日腹腔注射烏拉坦4ml/kg麻醉,常規方法固定豚鼠并分離氣管。將氣管插管按肺溢流實驗方法連接小動物人工呼吸機,壓力換能器,自動平衡記錄儀,調解呼吸頻率65次/min,呼吸時比為1.5:1,潮氣量11ml,在豚鼠胸壁上開一小洞,造成氣胸,以抑制自發呼吸。分離十二指腸,供給藥用,分離頸靜脈,供注射組織胺。描記肺溢流曲線,待曲線穩定后靜脈注入磷酸組胺5μg/只,導致氣管痙攣,記錄水面高度,肺溢流曲線及組胺作用維持時間。待曲線恢復正常5min后,于十二指腸起始段給藥,分別于給藥后0、30、60、90min靜注同劑量磷酸組胺,觀察藥物對組胺致痙的拮抗作用,結果見表2。LXP明顯抑制麻醉豚鼠的肺溢流量增加,肺溢流曲線上升高度減少,縮短組胺致氣管痙攣作用維持時間,對組胺致豚鼠氣管痙攣有明顯的拮抗作用,LXP 0.4g/kg與臨床等效量的蛇膽川貝散和原藥材作用相比略強。
2.3 龍香平喘膠囊對豚鼠離體氣管平滑肌的解痙作用 取體重350~500g豚鼠,按文獻方法制備豚鼠離體氣管片[3],以3~4片連成一條,上端與張力換能器相連,下端掛于通氣鉤上,置于盛有40ml 37.0±0.5℃克-亨液的麥氏浴管內,其中通以95%O2和5%CO2,負荷為2g,每半小時更換1次營養液。平衡2h后加入Ach(Ach最終濃度10μg/ml),氣管收縮達峰值后立即加入受試藥物(藥物及終濃度見表3)觀察5min內曲線高度,并依下式計算氣管收縮抑制率,求IC50,然后沖洗3~5次,基線恢復正常后,分別進行下一個劑量或藥物實驗。結果LXP膠囊對Ach引起的氣管痙攣具有明顯松弛作用,所測IC50明顯小于蛇膽川貝散和原藥材。 氣管收縮抑制率=給組胺氣管收縮高度-用藥后的收縮高度/給組胺氣管收縮高度×100% 2.4 龍香平喘膠囊對小白鼠SO2引咳的鎮咳作用 取小白鼠60只,♀♂各半,體重19~22g,按體重隨機分組,每組10只。第1組給0.5%CMC 20ml/kg,第2組給原藥水煎液5.5g/kg,第3組給蛇膽川貝散0.36g/kg,4~6組分別給LXP0.3、0.6、1.2g/kg,連續灌胃給藥5天,末次給藥后1h,將小鼠放入250ml廣口瓶內,注入4ml SO2,依文獻[1]標準觀察并記錄2min內的咳嗽次數。結果見表4。LXP明顯降低SO2對小白鼠引咳次數,其作用與臨床等效量的蛇膽川貝散相近。
2.5 龍香平喘膠囊對小白鼠氨水引咳的鎮咳作用 取小白鼠60只,♀♂各半,體重19~22g,小白鼠分組、給藥劑量及時間與2.4相同,末次給藥1h后,依文獻[4]方法略加改進,將小鼠放入霧室內,氨水0.4ml滴入霧室帶孔木板上,受熱2min,觀察氨水引咳次數,結果見表5。LXP可降低氨水對小鼠的引咳次數,弱于蛇膽川貝散,但略強于原藥材水煎液。
2.6 龍香平喘膠囊對小鼠炭粒廓清速率的影響 取小白鼠60只,♀♂各半,體重19~22g,小白鼠分組、給藥劑量及時間與2.4相同,末次給藥1h后,依文獻[4]方法給小白鼠靜脈注射印度墨汁(稀釋4倍)10ml/kg,分別于靜脈注射后2min、10min眼眶取血25μl,各加入0.1%Na2CO3 2ml,搖勻,在波長600nm處測吸光度(OD),于末次取血后將小鼠處死,稱肝脾重量。按下式計算廓清指數K、吞噬指數α,結果見表6,LXP可增強小白鼠對炭末的廓清指數和吞嗜指數,中劑量組的K和α值均大于蛇膽川貝散和原藥材組。 K=logOD2-logOD10/t10-t2 α=K1/3×體重(g)/肝重(g)+脾重(g)
2.7 龍香平喘膠囊對同種被動皮膚過敏反應(PCA)的影響 取wistra大鼠48只,♀♂各半,體重150~200g,隨機分為6組,每組8只,第1組給0.5%CMC 10ml/kg,第2組給原藥水煎液5.5g/kg,第3組給蛇膽川貝散0.36g/kg,4~6組分別給LXP 0.15、0.3、0.6g/kg,每天1次,連續灌胃給藥5天。給藥后2天脊背部脫毛,次日于脫毛部皮內注射不同稀釋度(1:16,1:32)大鼠抗卵白蛋白血清共4點,0.1ml/點,并于末次給藥前2h靜注1%伊文思蘭和卵白蛋白10mg/kg混合液1ml/只,2h后斷頭處死。翻開背部皮膚,測其藍染面積,結果見表7。LXP各組藥物明顯降低藍染面積,說明該藥能抑制大鼠的PCA反應,其作用略低于蛇膽川貝散。
2.8 龍香平喘膠囊對小鼠耐缺氧的影響 取小白鼠60只,♀♂各半,體重19~22g,小白鼠分組、給藥劑量及時間與2.4相同,末次給藥1h后,按文獻方法放入裝有15g鈉石灰的250ml密閉廣口瓶內,觀察并記錄死亡時間,結果見表8。LXP可明顯延長小鼠存活時間,作用與原藥水煎液和蛇膽川貝散相似。
2.9 龍香平喘膠囊對小鼠抗疲勞的影響 取小白鼠60只,♀♂各半,體重19~22g,小白鼠分組、給藥劑量及時間與2.4相同,于末次給藥前將小鼠放在轉棒儀上訓練,末次給藥1h后,將小鼠放在轉棒儀上(10轉/min),觀察并記錄小鼠在轉棒儀上滯留時間,結果見表9。LXP小劑量可延長滾棒時間,實驗結果表明LXP有抗疲勞作用。
3 討論 慢性支氣管炎是氣管、支氣管黏膜及周圍組織的非特異性慢性炎癥。是由于感染、物理、化學、過敏、寒冷、植物功能失調,以及機體自身呼吸道局部防御、免疫功能降低等因素,導致支氣管黏膜充血、水腫、炎性細胞浸潤、氣管平滑肌痙攣等病理改變。咳嗽,咳痰,喘息及反復發作是慢性支氣管炎的主要臨床特點,病情若緩慢進展可發展為肺氣腫、肺動脈高壓、肺源性心臟病,是一種嚴重危害人類健康的常見病。此癥屬于中醫學的“咳嗽”的范圍,多屬于內傷咳嗽,為風寒、風熱外襲,邪襲肌表,肺氣不宣、清肅失職,痰液滋生所至,肺腎兩虛,肺虛上逆,腎氣不納出現喘息。所以,除控制感染、消除致病因素外,止咳、祛痰、平喘在慢性支氣管炎的治療中尤為重要。 本實驗證明,龍香平喘膠囊可延長組胺-乙酰膽堿噴霧引起豚鼠哮喘潛伏期;對Ach引起的豚鼠離體氣管平滑肌痙攣有解痙作用;可明顯降低麻醉豚鼠的肺溢流量,肺溢流曲線上升高度減少,縮短組胺致氣管痙攣作用維持時間,對組胺致豚鼠氣管痙攣有明顯的拮抗作用,說明該藥可對抗由支氣管黏膜杯狀細胞增生、分泌亢進所產生組胺等致炎物質造成支氣管痙攣,降低呼吸道阻力;該藥可降低SO2、氨水引咳小鼠咳嗽次數,因而能顯著改善急慢性支氣管炎咳嗽、喘息臨床癥狀,減輕呼吸道的阻力。本實驗證明該藥能抑制同種被動皮膚過敏反應(PCA),可對抗由于過敏因素導致的支氣管炎發作。本藥還能增加對小鼠炭粒廓清速率,增加小白鼠的抗疲勞和耐缺氧能力,說明該藥有增加免疫及增強體力,補肺益腎功能,肺氣下行,腎氣收納,喘息緩解,使患“內傷”慢性支氣管炎患者的體力恢復,達到扶正祛邪的目的。 現代藥理實驗結果表明,方中主藥穿山龍具有止咳、平喘、祛痰、抗變態反應等作用,穿山龍總皂甙可抑制小鼠綿羊紅細胞溶血素抗體的生成和2-4二硝基氟苯(DNFB)所致遲發型超敏反應;地龍是我國傳統的平喘中藥,近年來研究結果表明,地龍體內有多種生物活性物質,除有平喘、抗炎外還可明顯增強機體免疫功能;云香草也有較好的止咳平喘作用。 總之,龍香平喘膠囊有止咳、平喘、對抗遲發性過敏反應、增加免疫、抗疲勞、耐缺氧等功效,可緩解慢性支氣管炎的臨床癥狀,增強體力,預防并發癥的產生。
1 陳奇.中藥藥理學研究方法學.北京:人民衛生出版社,1993,649;651;648;636-637. 2 高巍.穿山龍總皂甙對小鼠免疫功能的影響.承德醫學院學報,2001,18(1):9-10. 3 唐曉云.地龍肽對小鼠免疫功能的影響.中國醫科大學學報,2003,32(2):21-23.