【摘要】 目的 探討非小細胞肺癌(NSCLC)組織肺耐藥相關蛋白（LRP）表達及其臨床意義。方法 應用組織芯片技術結合免疫組化PV9000二步法檢測術前未經化療的72例NSCLC組織中LRP的表達，并采用圖像分析技術進行定量測定。結果 LRP主要在NSCLC的細胞漿表達，細胞膜有少量表達，總陽性表達率為77.78％。LRP表達強度與組織學類型有關，在腺癌中陽性顆粒的平均吸光度與積分吸光度均高于鱗癌(t=6.977、6.114，P<0.001)；LRP表達強度與腫瘤細胞分化程度有關，隨分化程度的降低平均吸光度與積分吸光度均降低（F=4.717、5.324，P<0.05）；其表達強度與臨床分期、有無淋巴結轉移、腫瘤大小及年齡無關（F=1.901、2.165，t=0.837～2.165，P>0.05）。結論 檢測LRP在NSCLC組織中的定量表達，能準確地反映NSCLC組織的耐藥性及對化療的敏感性，在指導腫瘤化療方面具有重要的臨床意義。 【關鍵詞】 肺耐藥相關蛋白 癌 非小細胞肺 組織學技術 ［ABSTRACT］ObjectiveTo study the expression of lung resistancerelated protein (LRP) in nonsmall cell lung cancer (NSCLC) and its clinical significance. MethodsNSCLC specimens (n=72) were examined by the combined techniques of tissue chip and immunohistochemistry. The expression of LRP was quantitatively assessed by computer image analysis system. Chemotherapy was not performed in all cases before surgery. ResultsExpression of LRP was found mainly in the cytoplasm of NSCLC， few in cellular membrane. The total positive rate of LRP expression was 77.78％. The intensity of LRP immunostaining was related to the tissue type and differentiation of the cancer. The average density and accumulated density of LRP were higher in adenocarcinoma than in squamous cell carcinoma （t=6.977，6.114；P<0.001）， and higher in well differentiation group than in poor differentiation group （F=4.717，5.324; P<0.05）. They were not related to the clinical stage， lymph node metastasis， patients age or tumor size （F=1.901，2.165;t=0.837-2.165；P>0.05）. ConclusionQuantitative analysis of LRP expression in NSCLC can well reflect the drug resistance of NSCLC and predict the sensitivity of cancer to chemotherapy. It is of clinical significance to guide the chemotherapy. ［KEY WORDS］lung resistancerelated protein; carcinoma， nonsmall cell lung; histological techniques 肺癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，其發病率近年來也呈迅速上升趨勢。在我國一些大城市，其發病率占成年人惡性腫瘤發病率的第一位，已經成為人類因腫瘤致死的首位病因，其中非小細胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌的75%～80%。NSCLC單純手術治療效果不佳，5年生存率平均只有50％左右。目前多采用手術與放、化療結合的綜合治療方案，化療仍是肺癌主要的治療手段之一［1］。腫瘤細胞產生的耐藥性是影響化療效果最常見而又最難解決的問題。已有許多研究表明，肺耐藥相關蛋白(LRP)過度表達與肺癌化療耐藥密切相關［2］。檢測LRP在NSCLC組織中的表達，以往多采用定性的方法，而檢測其定量表達目前未見報道。本研究應用組織芯片及免疫組織化學技術結合形態學計量，檢測LRP在NSCLC組織中的定量表達，探討其與NSCLC生物學行為的關系，預測腫瘤對化療的敏感性，從而指導腫瘤化療。 1 材料和方法 1.1 標本來源 收集青島大學醫學院附屬醫院2003～2005年經病理證實的非小細胞肺癌手術標本共72例，均為石蠟包埋標本，術前病人未進行化療，其中年齡<60歲35例，≥60歲37例；腫瘤直徑≤3 cm組30例，>3 cm組42例；鱗癌30例，腺癌42例；淋巴結轉移組39例，淋巴結無轉移組33例；高分化組16例，中分化組26例，低分化組30例；按臨床分期(1997年肺癌國際分期修正系統):Ⅰ期29例，Ⅱ期19例，Ⅲ期24例。復習全部病例的臨床病理資料及蘇木精伊紅染色切片，每例標本選取癌組織典型代表區域，直徑約2 mm，制作成2枚組織芯蠟塊。 1.2 免疫組織化學染色 鼠抗人LRP單克隆抗體、PV9000檢測試劑盒及DAB顯色劑均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。4 μｍ厚組織芯石蠟切片脫蠟，系列乙醇水化至蒸餾水，體積分數為0.03的過氧化氫滅活內源性過氧化物酶，微波修復，采用免疫組織化學PV9000二步法染色，用DAB顯色。切片不進行復染。用PBS代替一抗作為陰性對照，用已知的陽性切片作為陽性對照。 1.3 結果判定及形態學計量 以腫瘤細胞質和(或)細胞膜出現棕黃色顆粒著色為陽性。應用Simple PCI多功能真彩色病理圖像分析系統對免疫組織化學染色后的病理圖像進行定量分析。每例標本在400倍視野下隨機選取100個陽性腫瘤細胞，測定其陽性顆粒的平均吸光度和積分吸光度，以此代表陽性腫瘤細胞內LRP的相對含量。 2 結果 2.1 LRP在NSCLC組織中的陽性表達 LRP在多數腫瘤細胞質和(或)細胞膜呈棕黃色顆粒著色，以細胞質著色為主。總陽性表達率為77.78％。 2.2 LRP在NSCLC組織中的表達水平與生物學行為的關系 LRP在NSCLC組織表達水平與組織學類型有關，在腺癌中陽性顆粒的平均吸光度與積分吸光度均高于鱗癌(t=6.977、6.114，P<0.001)；LRP與腫瘤分化程度有關，高分化組平均吸光度與積分吸光度均高于中、低分化組（F=4.717、5.324，P<0.05）；在不同臨床分期、有無淋巴結轉移、腫瘤大小及年齡組之間，平均吸光度與積分吸光度差別無統計學意義（t=0.837～2.165，P>0.05）。見表1。 3 討論 化療在NSCLC的治療中占有重要地位，但腫瘤細胞對化療藥物產生的耐藥性是導致化療失敗的主要原因。已知LRP與NSCLC化療耐藥密切相表1 LRP在NSCLC組織中的表達情況關。LRP作為人體的主要穹隆蛋白，廣泛分布于細胞器上。LRP在腫瘤耐藥中的作用需依賴ATP提供能量，使腫瘤細胞內藥物外排而降低藥物濃度引起腫瘤耐藥，其主要通過兩種機制:一方面是使以細胞核為靶位的化療藥物不能進入細胞核，或把已進入細胞核的藥物轉運到細胞質;另一方面是把細胞質中的藥物轉運到囊泡，再經胞吐機制排到胞外［3］。有研究表明，LRP的表達與NSCLC化療耐藥密切相關，其在NSCLC組織中的表達水平可反映腫瘤組織對化療的敏感性［4］，且其高表達與NSCLC化療耐藥及預后不良密切相關［5］。

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