【摘要】 目的 研究臨床分離的多重耐藥鮑曼不動桿菌的OXA-23、OXA-24耐藥基因研究。 方法 用微量肉湯稀釋法測定最小抑菌濃度（MIC值）；PCR檢測OXA-23、OXA-24耐藥基因，并對擴增出的基因測序比對。 結果 90株鮑氏不動桿菌，均為多重耐藥菌株，其中同時對5種抗生素耐藥的占81.6%；檢出6株攜帶OXA-23基因（全部對美羅培南和亞安培南耐藥）、均未檢出OXA-24基。 結論 某醫院流行產OXA-23型酶的菌株，需要采取措施防止其進一步傳播。 【關鍵詞】 鮑曼不動桿菌 多重耐藥 耐藥基因 鮑曼不動桿菌廣泛存在于醫院環境中，如呼吸機設備、消毒液、透析機、水龍頭等[1]，是最常見的條件致病菌之一，可以引起多種醫院感染，如肺炎、傷口感染、敗血癥和腦膜炎等。隨著抗生素的廣泛使用，多重耐藥鮑曼不動桿菌不斷發展。因此，研究鮑曼不動桿菌多重耐藥分子機制，可為合理選擇抗生素，采取有效措施防止耐藥株進一步擴散提供理論依據。本研究對2004年1月～2008年7月臨床分離的90株鮑曼不動桿菌的耐藥譜進行了測定，對OXA-23、OXA-24耐藥基因進行了檢測。 1 材料與方法 1.1 實驗菌株 2004年1月至2008年7月分別從河北省8家醫院ICU室、呼吸內科、神經外科、急診科等收集到90株鮑氏不動桿菌，其中痰液標本82株、分泌物3株、尿液2株、咽拭子1株、耳分泌物1株、膿液1株。采用法國生物梅里埃(API) 公司生產的VITEK-32型全自動微生物分析儀及配套試劑盒對細菌進行鑒定。 1.2 試劑和主要儀器 抗生素：美羅培南（MEM）、亞胺培南(IPM)、哌拉西林/他唑巴坦(TZP)、左氧氟沙星(LEV)、頭孢他啶（CAZ）、阿米卡星（AKN）、頭孢哌酮/舒巴坦（CFP/SB）購自中國藥品生物制品檢定所；DNA分子量Maker、dNTP、Taq DNA聚合酶等分子生物學試劑，均購自Sigma公司；PCR引物由博邁德科技發展有限責任公司合成，膠回收試劑盒購自Promega公司。 主要儀器：臺式低溫高速離心機（江蘇省太倉醫療器械廠），WGP-300型電熱恒溫培養箱（重慶萬達儀器有限公司），HBPX220型PCR儀（Hybaid公司），凝膠成像系統（上海復日科技有限公司） 1.3 MIC測定 采用WHO推薦的微量液體稀釋法進行抗生素的最小抑菌濃度（MIC）測定，根據美國臨床實驗室標準委員會（CLSI）[2]標準判斷結果。大腸埃希菌ATCC25922、銅綠假單胞菌ATCC27853和肺炎克雷伯ATCC70060作為質控菌。

表2 鮑曼不動桿菌對抗菌藥物的耐藥譜（數量，%）

2.4 耐藥基因擴增結果 采用特異性引物對90株鮑曼不動桿菌分離株進行耐藥基因擴增，擴增產物經1.3%瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈下觀察特異性條帶。結果有10株OXA-23基因陽性，陽性率為10%；未擴增出OXA-24耐藥基因。耐藥基因型代表性菌株PCR擴增產物電泳結果見Fig.1。

Fig.1 The PCR product of OXA-23 gene run on 1.3 % (w/v) agarose gel electrophoresis M:Markers; 4、5、8、9、11、12: A.baumannii lsolates 3 討論 β-內酰胺酶基因是鮑曼不動桿菌最主要的耐藥基因，包括超廣譜β-內酰胺酶類（屬A類，包括TEM-型、SHV-型、SIM-型、PER-型等基因）、金屬酶類（屬B類，包括IMP和VIM基因）、OXA型酶（屬D類）等[2，3]。OXA-23型酶，水解青霉素和頭孢菌素、碳青霉烯，使菌株產生對亞胺培南類抗生素的耐藥性[4]。鮑曼不動桿菌主要分布于重癥監護病房(ICU)，占33.2%，其他依次為呼吸內科18株（20.0%）、神經外科病房7株（7.8%）、急診科6株（6.7%）等，并且在所有標本類型中痰標本的檢出率最高，占91.2%。鮑曼不動桿菌的耐藥譜廣，不易被抗菌藥物所清除，感染后治療非常棘手，特別是對那些免疫功能低下的危重患者將會導致非常嚴重的后果。D類碳青霉烯酶對亞胺培南、頭孢噻肟、頭孢他啶的水解活性較低，但常同時合并外膜通透下降和(或)主動外排系統增強等，因此耐藥性較強[4]。故對OXA-23型β-內酰胺酶基因流行病區，應及時采取有效措施，防止高耐藥和多重耐藥株的進一步傳播，以免給今后的治療帶來困難。也對醫院不合理用藥提出警告，在治療不動桿菌引起感染時， 必須合理使用抗菌藥， 避免多重耐藥現象再次發生。在醫院間轉移病人時必須注意鑒定和追蹤耐藥不動桿菌[5]。 參 考 文 獻 [1]Guenthner SH， Hendly JO， Wenzel RP. Gram-negative bacilli as nontransient flora on the hands of hospital personnel [J]. J Clin Microbiol， 1987， 25: 488-490. [2]傅愛玲， 襲燕， 李希華.20株多藥耐藥鮑氏不動桿菌β-內酰胺酶基因研究[J]. 中華醫院感染學雜志， 2008， 18(5): 622-625. [3]何崇旻， 葛庚芝. 不動桿菌耐碳青霉烯類抗生素機制的研究進展[J].中國醫學文摘·內科學，2005，26(1):121-123. [4]Livermore DM， Woodford N. Carbapenemases: a problem in waiting? [J]. Curr Opin Microbiol， 2000， 3 (5): 489-495. [5]Lua PL， Huang LY， Lian ST. How carbapenem-resistant Acinetobacter spp. established in a newly constructed hospital [J]. Int J Antimicrob Agents， 2008， 31: 463-466.