【摘要】 目的 研究德康產通博益腦片與通博益腦膠囊在正常人體的藥理學與生物等效性。方法 18名健康男性志愿受試者隨機交叉口服40mg受試制劑通博益腦片和參比制劑通博益腦膠囊40mg后，采用高效液相色譜法，以卡馬西平為內標，測定兩種制劑的血漿藥物濃度。結果 受試制劑和參比制劑均符合一級吸收開放性一室模型，主要藥物代謝動力學參數0～12h藥-時曲線下面積(AUC0～12)分別為(2719.9±1551.7)和(2820.8±1668.1)ng·h/ml;鋒濃度(Cmax)分別為(820.1±420.1)和 (760.0±415.4)ng/ml;達峰時間(Tmax)分別為(2.4±0.6)和(2.5±0.6)h;血漿半衰期(T1/2) 分別為(2.2±0.8)和 (2.4±0.9)h。相對生物利用度為 (99.69±13.51)%。結論 通博益腦片與通博益腦膠囊為生物等效制劑。

【關鍵詞】 通博益腦片;通博益腦膠囊;藥動學;生物等效性

【Abstract】 Objective To study the pharmacokinetics and bioequivalence in Dekang Pharmaceutical limited company and reference products Tong Bo Benefician Brain tab. Methods Tong Bo Benefician Brain capsules and Tong Bo Benefician Brain tab were given to 18 male healthy volunteers with a dose of 40mg according to a randomized cross over design. Plasma concentrations of omeprazole were determined by HPLC. Results The concentration-time curves of both preparations fitted to a one-compartment model. The main pharmacokinetic parameters AUC0 12，Cmax，Tmax ，T1/2 were (2719.9±1551.7) and (2820.8±1668.1) ng.h/ml、(820.1±420.1) and (760.0±415.4) ng/ml，(2.4±0.6) and (2.5±0.6) h ，(2.2±0.8) and (2.4±0.9) h respectively. Relative bioavailability was (99.69±13.51)%.Conclusion Tong Bo Benefician Brain tab，Tong Bo Benefician Brain capsules were bioequivalent.

【Key words】 Tong Bo Benefician Brain capsules ;Tong Bo Benefician Brain tab;pharmacokinetics;bioavailability

湖南德康制藥股份有限公司生產的通博益腦膠囊(CTB)對于提高腦組織的供血狀況，保護腦細胞，改善腦細胞功能具有較好功效，且能抗凝。該藥上市后，療效卓著，深受歡迎。為了吞咽更便利，應部分患者服用習慣的要求，本廠又擬開發第8類新藥-通博益腦片(TTB)。為更好地對TTB人體藥物代謝動力學和相對生物利用度進行深入研究，并進一步評價其生物等效性，為臨床用藥提供參考。特對兩種通博益腦制劑的不同劑型進行實驗研究。

1 藥品、試劑與儀器

1.1 藥品

受試制劑(T制劑)為湖南德康制藥股份有限公司生產的通博益腦片TTB，規格為20mg/粒，批號為20080901;參比制劑(R制劑)為湖南德康制藥股份有限公司生產的通博益腦膠囊CTB，規格為20mg/粒，批號為20080902;CTB對照品(湖南德康制藥股份有限公司);卡馬西平(內標，中國藥品生物制品檢定所，批號20080201)。

1.2 試劑

甲醇、乙腈為色譜純，磷酸二氫銨為分析純，所有試驗用水均為重蒸餾水。

1.3 儀器

Agilent 1100 型高效液相色譜儀及Agilent 1100 型VWD檢測器(美國Agilent公司);INV-2044固相萃取儀 (美國);梅特勒-托利多AB135-S電子天平(瑞士)。

2 方法與結果

2.1 血藥濃度測定方法[2]

色譜條件：采用Hypurity ODS2柱(150mm×4.6mm，5μm)為色譜柱，柱溫為30℃，流動相為0.05mol/L NH4H2PO4-乙腈(62.6：37.4，V/V)，流速為1.0ml/min，進樣量40μl。在此色譜條件下，空白血漿、標準溶液、空白血漿中加入標準溶液和受試者服藥后血漿樣品的色譜圖見圖1。保留時間CTB、TTB約為4.0min，內標約為5.1min，血漿內源性物質及其他雜質不干擾樣品的分離測定。 圖1 高效液相色譜圖 標準溶液的配置：精確稱取CTB對照品21.7mg，置25ml容量瓶中，以少量甲醇溶解并用硼酸-氯化鉀緩沖液定容至刻度，得濃度為868mg/ml 的CTB標準溶液，再用硼酸-氯化鉀緩沖液進一步稀釋成濃度為86.8、8.68、0.868mg/ml 的CTB標準溶液。稱取卡馬西平6.5mg ，置25ml 容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，應用時進一步稀釋為10.4g/ml的內標溶液。血漿樣品處理：取待測血漿0.5ml，置5ml離心管中，加入10μl內標溶液(濃度為10.4μg/ml)，充分搖勻，全部取出，放入預先用2ml甲醇和2ml重蒸餾水活化好的固相萃取柱(ODS C18)中，用30%甲醇1ml充分洗滌，棄去洗滌液，用1ml甲醇洗脫，洗脫液用氮氣吹干，殘渣用100μl流動相溶解，取40μl進樣。標準曲線制備：用空白血漿將CTB標準溶液稀釋成濃度為6.944、13.888、27.776、69.44、138.88、277.76、694.4、2604.0ng/ml的系列標準溶液，按血漿樣品處理方法處理并測定，以TTB、CTB峰面積與內標峰面積之比對TTB、CTB濃度進行線性回歸，得標準曲線方程。回歸方程為AreaOmz/AreaIS= 0.00169257C-0.0034733，相關系數r=0.9997。線性范圍為6.944～2604.0ng/ml，最低定量限為6.944 ng/ml。以信噪比S/N大于3計，方法的最低檢測限為1.7ng/ml。萃取回收率：在空白血漿中加入標準溶液，分別配制成低(27.776 ng/ml)、中(277.76ng/ml)、高(2604.0ng/ml)3個濃度，按血漿樣品處理方法處理并測定;另用甲醇配制相應濃度的TTB標準溶液，不經任何處理，取40μl直接進樣，以此為標準，將兩組峰面積進行比較并計算。結果TTB的低、中、高濃度的萃取回收率分別為84.5%、82.5%、75.2%，內標的萃取回收率為88.0%。方法回收率及精密度: 取空白血漿及標準溶液，按“線性范圍和最小可定量濃度”項下方法制備TTB低、中、高3個濃度(27.776、277.76、2604.0ng/ml)的質量控制樣品，每一濃度平行操作5份，代入線性方程計算濃度，以測得值與加入值的比值計算回收率，并計算日內精密度。連續3天配制并測定上述濃度樣品，考察方法的日間精密度。結果見表1。方法的回收率均在85%～115%之內，日內、日間精密度的RSD均小于15%，符合生物等效性研究的方法學要求。表1 TTB回收率及精密度樣品穩定性：用空白血漿配制3個不同濃度(10、100、400ng/ml)的樣品，分別進行凍融試驗、樣品-20℃凍存及室溫穩定性試驗。結果樣品反復凍、融4次、-20℃凍存條件下40d、室溫放置12h，穩定性均良好。

2.2 生物利用度試驗及生物等效性評價

受試者：18名健康志愿受試者均為男性，年齡(21.8±0.9)歲，身高(170.8±3.5)cm，體重(61.7±5.7)kg，無煙酒嗜好，試驗前經詢問病史、體格檢查和實驗室檢查未發現異常，無藥物過敏史和藥物依賴史，無慢性病史，兩周內未服用任何藥物。受試期間統一進食清淡飲食，不使用除試驗(參比)制劑以外的任何藥物，不接受煙、酒及含咖啡飲料。受試者試驗前簽署知情同意書，試驗方案經醫學倫理委員會批準。 試驗方法：采用兩周期雙交叉試驗設計。將受試者隨機等分成兩組，每組9人。兩組受試者禁食12h后，于早上8:00分別口服T制劑或R制劑40mg，用溫開水200ml送服。服藥后2h可自由飲水，服藥后4h及10h統一進食。于受試者服藥前及服藥后0.5、1.0、1.5、2、2.5、3、3.5、4、5、6、8、10、12h 取靜脈血3ml。清洗1周后，交叉單劑量服用R制劑或T制劑，并于相同時間點采集血樣。將血樣置肝素管中，立即離心，分離出血漿，并在2h 內通過固相萃取處理，氮氣吹干，密封，于冰箱冷藏放置。藥代動力學分析：18名受試者血藥濃度-時間數據經DAS藥動學程序(中國數學藥理學會，孫瑞元等編)處理，符合一室模型。0～12h的藥-時曲線下面積(AUC0～12)以梯形面積法求得，達峰時間(Tmax)及峰濃度(Cmax)均用實測值，相對生物利用度( F)= AUC0～12(T)/ AUC0～12(R) ×100%。其他主要藥代動力學參數T1/2Ka (吸收速率常數)、T1/2Ke (消除速率常數)、 Tlog(滯后時間)用DAS藥動學程序處理求得。數據統計方法：AUC0～tn和Cmax經對數轉換后進行藥物間、周期間、個體間的三因素方差分析，再以雙、單側t檢驗進行等效性判斷。若T制劑AUC0～tn對數值的90%可信限落在R制劑80～125%范圍內，Cmax對數值的90%可信限落在R制劑70%～143%范圍內，則認定T制劑與R制劑生物等效[2，3]。Tmax經對數轉換后進行方差分析。血藥濃度測定結果：18例受試者口服T制劑和R制劑40mg后各時間點的平均血藥濃度-時間曲線見圖2。圖2 平均血藥濃度-時間曲線 藥代動力學參數：主要藥代動力學參數見表2。生物等效性評價[4]：將AUC0～12、Tmax、Cmax分別經三因素方差分析，僅個體間差異有極顯著(P<0.01)，藥物間、周期間差異均無顯著性(P>0.05)。經雙向單側t檢驗，log AUC0～12TL=6.24，TH=4.81，均大于T0.05(1.74)，P<0.05;log AUC0～12TL=5.51，TH=2.46，均大于T0.05(1.74)，P<0.05。等效性檢驗結果合格，說明T制劑與R制劑均在規定的80%～120%范圍內，90%置信區間AUC0～12為96.30%～112.26%，Cmax為101.31%～122.17%。T制劑相對于R制劑的生物利用度為(99.69±13.51)%，兩制劑具有生物等效性。表2 單劑量口服T制劑和R制劑40mg后的主要藥代動力學參數

3 討論

通博益腦片中主要成分為遠志、五味子、石菖蒲、萊菔子等藥。通博益腦片中遠志Polygala tenuifolia Willd含遠志皂苷元、細味遠志素、遠志醇、遠志堿、N-乙酰葡萄糖。味辛、苦，性溫。歸心、腎、肺經。遠志煎劑灌胃可使小鼠自發活動減少，安靜，可使用下劑量(MED以下)的戊巴比妥鈉小鼠入睡，能明顯對抗戊四氮所致的小鼠驚厥。從而用于心腎不交、失眠多夢、健忘驚悸、神志恍惚等癥[3]。對高血壓癥及其并發癥狀有一定治療作用。是通博益腦片的君藥。通博益腦片中五味子為木蘭科植物，北五味子Schisandra Chinensis(Turcz.)Baill的干燥成熟果實。主要成分為聯苯環辛烯型木脂素，還有抗壞血酸與維生素E等。具有收斂固澀、益氣生津、補腎寧心的功效。五味子具有明顯的鎮靜作用，五味子醇甲(schizandrol-A)能減少小鼠自主活動，延長Phenobarbital的睡眠時間。可改善人的智力活動，抗疲勞，提高工作效率，可提高大鼠大腦黑質紋狀體和下丘腦中Dopamine的含量。去氧五味子素(deoxyschizandrin)有擴血管作用，對于由PGFzx、CaCl2、Noradrenaline引起的離體狗腸系膜動脈收縮有抑制作用，能增加豚鼠離體心臟及麻醉狗冠脈血流量。用含五味子的飼料喂家兔能調節心肌細胞和心腎小動脈的能量代謝，提高心肌代謝酶活性，改善心肌的營養和功能[4]。五味子為通博益腦片的臣藥。通博益腦片中石菖蒲[5]為天南星科多年草本植物Acorus gramineus soland.的根莖。味辛性溫，歸心、胃經。含丁香油酚、細辛醛、細辛酮、棕櫚酸。可治中惡卒死，客忤癲癇，善開心孔，通達九竅，明益耳目，補養五臟。用于痰濕蒙閉清閉，清陽不升所致的神識昏謎。石菖蒲是通博益腦片的佐藥。通博益腦片中萊菔子為十字花科植物Raphnus sativus L.的干燥成熟種子。含芥子堿(sinapine)、萊菔子素、鄰苯二甲酸丁二酯。味辛、甘，性平。歸肺、脾、胃經。它的主要降壓成分是白芥子堿。中醫認為萊菔子能開宣肺氣，順氣化痰，潤腸通便，調節人體整個氣機升降，平穩降壓[6]。萊菔子水提物對麻醉犬、貓、兔、鴨靜脈注射均可引起血壓下降，作用緩慢而持久。醇的總提物亦有降壓作用。芥子堿硫酸氫鹽亦有顯著的降壓作用。芥子堿靜脈注射能明顯降低實驗性肺動脈高壓，還明顯降低體動脈壓。萊菔子1ml/kg給麻醉犬靜脈注射后可使平均動脈壓、肺動脈平均壓、體血管阻力明顯降低，左室作功指數、右室作功指數減少;心輸出量、每博輸出量、心臟指數、心搏指數變化不明顯[7]。萊菔子可作為一血管擴張劑。萊菔子對高血壓癥及其并發癥狀有一定治療作用。是通博益腦片的佐藥。本研究建立的HPLC法采用偏中性的磷酸鹽溶液為流動相，以卡馬西平作為內標，色譜條件穩定。血漿樣品采用固相萃取進行預處理，方法簡便，特異性高，無內源性物質及其他雜質干擾。方法的回收率、精密度等符合藥代動力學和生物利用度研究的要求。本研究所選流動相、內標和樣品預處理方法均有較大改進。AUC0～12、Tmax、Cmax分別經三因素方差分析，周期間差異無顯著性(P>0.05)，說明實驗設計合理，無周期間影響。T制劑和R制劑的各主要藥動學參數之間差異沒有顯著性(P>0.05)。雙、單側t檢驗結果表明，兩者為生物等效制劑。本實驗表明，通博益腦片口服吸收好，約2.5h 達血藥濃度峰值，在人體內符合一級吸收開放性一室模型特征。消除較快，其消除半衰期約2h，與通博益腦膠囊相似。結論：本實驗表明，通博益腦片與通博益腦膠囊具有相似的藥物代謝動力學過程和生物利用度，兩者為生物等效制劑。