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海洋灰綠曲霉AgveA基因響應(yīng)鹽度脅迫的功能分析

李佳欣; 劉紹梅; 任燕娜; 周祥山; 蔡孟浩; 張元興 華東理工大學(xué)生物反應(yīng)器工程國家重點實驗室; 上海200237

摘要：通過染色體步移方法克隆了基因AgveA、AgfphA、AglreA和AglreB的上下游側(cè)翼序列,并通過逆轉(zhuǎn)錄確定了各個基因的內(nèi)含子序列。通過實時熒光定量PCR發(fā)現(xiàn),基因AgveA轉(zhuǎn)錄受鹽度脅迫的作用下調(diào)較明顯,而AgfphA、AglreA和AglreB上調(diào)較明顯。通過構(gòu)建打靶質(zhì)粒以敲除AgveA,最終成功構(gòu)建了基因缺失株ΔAgveA,并從菌絲形態(tài)、菌落形態(tài)、菌絲生長速率和細胞發(fā)育表型4個方面進行了基因功能分析。結(jié)果表明,菌株ΔAgveA的菌絲形態(tài)并未產(chǎn)生明顯變化,而菌落的邊緣存在殘缺,菌絲生長速率在生長后期加快;細胞發(fā)育模式產(chǎn)生明顯改變,AgveA基因的缺失導(dǎo)致海洋灰綠曲霉在高鹽度脅迫條件下子囊果的合成完全受阻,而在低鹽度脅迫條件下產(chǎn)生分生孢子的同時也形成了極少量的子囊果。

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