微泡菌ALW1褐藻膠裂解酶AlgL14的表達及信息學分析
摘要：以微泡菌（Microbulbifer sp.）ALW1的基因組為模板，使用褐藻膠裂解酶AlgL14特異性引物進行PCR擴增，將擴增產物克隆至pMD18-T載體后進行測序，并對該基因編碼的蛋白質序列進行生物信息學分析。將目的基因插入pET-28α（＋）表達載體，轉入Escherichia．coli BL21（DE3）中進行誘導表達，并利用親和層析進行重組蛋白純化。結果顯示，克隆基因的大小為1350bp，預測編碼含有449個氨基酸殘基的蛋白質。該蛋白質序列與其他菌株來源的褐藻膠裂解酶序列具有一定的相似性，預測克隆的目的基因編碼褐藻膠裂解酶，歸屬于PL-14家族。褐藻膠裂解酶AlgL14的理論分子質量大小為48．772ku，理論等電點為6．27。采用同源建模法建立菌株ALW1褐藻膠裂解酶AlgL14的三維結構，富含盧一折疊。將目的基因在E．coli BL21（DE3）中進行誘導表達，并純化獲得重組褐藻膠裂解酶。SDS—PAGE分析顯示，表達的目的蛋白分子質量約為48．8ku。
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