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聚乙二醇定點修飾β-乳球蛋白谷氨酰胺殘基條件優(yōu)化及其對蛋白抗原性的影響

羅舜菁; 甘克明; 陸旭麗; 成娜娜; 劉成梅 南昌大學食品科學與技術(shù)國家重點實驗室; 江西南昌330047

摘要：采用谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶(TG酶)催化聚乙二醇(PEG)定點修飾技術(shù)對β-乳球蛋白(β-LG)的谷氨酰胺殘基進行修飾,探究其對蛋白抗原性的影響。通過SDS-PAGE結(jié)合凝膠過濾色譜對修飾產(chǎn)物的修飾率進行分析,通過優(yōu)化得最佳修飾條件為pH 7.0,溫度25℃,β-LG與PEG摩爾比1:15,TG酶與β-LG質(zhì)量比3:1,緩沖液中乙醇添加量25%(體積分數(shù)),該條件下修飾率為60.17%。采用陽離子交換色譜對修飾產(chǎn)物進行分離純化,SDS-PAGE分析顯示,純化得到的修飾產(chǎn)物表觀分子量在28kDa左右,為PEG單修飾產(chǎn)物。反相高效液相色譜分析結(jié)果表明,修飾產(chǎn)物均一,無其它位置異構(gòu)體存在。間接競爭ELISA測定結(jié)果表明,經(jīng)PEG修飾后β-LG的抗原性顯著降低,降低率為59.04%。

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