【摘要】 目的 對(duì)止癢洗劑進(jìn)行定性定量分析。方法 采用薄層色譜法對(duì)止癢洗劑中的蛇床子、黃柏、防風(fēng)進(jìn)行定性鑒別;以蛇床子素為指標(biāo)成分，采用高效液相色譜法對(duì)蛇床子素進(jìn)行了定量分析。結(jié)果 各薄層定性色譜中，在與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照未見干擾;蛇床子素在0.02～2.60 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r=0.999 9，平均加樣回收率為98.81%。結(jié)論 定性定量方法結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于止癢洗劑的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 止癢洗劑;薄層色譜法;高效液相色譜法;蛇床子素

Abstract：Objective To analysis the quality of Zhiyang Lotion. Methods Fructus Cnidii， Cortex Phellodendri Chinesis and Radix Saposhnikoviae in the preparation were identified by TLC， and the content of Osthole was determined by RH-HPLC. Results The method of TLC was simple， accurate and specific. The linear range of Osthole was 0.02~2.60 μg， r=0.999 9. The average recovery was 98.81%. Conclusion The methods were simple， reliable and accurate. It can be applied to the quality control of Zhiyang Lotion.

Key words：Zhiyang Lotion;TLC;HPLC;Osthole

止癢洗劑是本院臨床經(jīng)驗(yàn)方，主要由蛇床子、黃柏、防風(fēng)、枯礬等組成，具有清熱燥濕、殺蟲止癢之功效，用于治療濕瘡、疥癬等瘙癢性皮膚病。為了對(duì)其制劑進(jìn)行質(zhì)量控制，我們采用薄層色譜法對(duì)止癢洗劑中的黃柏、蛇床子、防風(fēng)進(jìn)行了定性控制，并以蛇床子素為指標(biāo)成分，應(yīng)用高效液相色譜(HPLC)法進(jìn)行定量分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀(Waters 515泵，Waters2487紫外檢測(cè)器，Empower色譜工作站，美國(guó));Hypersil C18色譜柱(英國(guó));BP-211D型十萬分之一電子分析天平(德國(guó)Sartarius公司);939型全自動(dòng)薄層制板器(重慶市南岸貝爾德儀器技術(shù)廠);WD-9413A凝膠成像分析儀(北京市六一儀器廠)。

止癢洗劑由本院制劑室提供(批號(hào)為090406、090519、090622);蛇床子、黃柏、防風(fēng)對(duì)照藥材(批號(hào)分別為200405、200602、200907)均購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所;蛇床子素對(duì)照品(批號(hào)11822-200305)購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所(供含量測(cè)定用)。薄層層析硅膠G(60型)、薄層層析硅膠H、薄層層析硅膠GF254均為青島海洋化工有限公司產(chǎn)品。含量測(cè)定用甲醇為色譜純(德國(guó)Merk公司);其他化學(xué)試劑均為分析純。

2 薄層色譜鑒別

2.1 蛇床子的薄層色譜鑒別

取止癢洗劑20 mL，置分液漏斗中，用乙醚萃取3次，每次10 mL，合并乙醚液，水浴蒸干，殘?jiān)颖? mL使溶解，作為供試品溶液。同法制備蛇床子缺味陰性對(duì)照溶液。另取蛇床子對(duì)照藥材1 g，加水適量提取，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法[2005年版《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)附錄ⅥB][1]試驗(yàn)，分別吸取上述3種溶液約5 μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-正己烷(3∶3∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性無干擾。

2.2 黃柏的薄層色譜鑒別

取止癢洗劑30 mL，加濃氨試液2 mL使成堿性，用氯仿萃取3次，每次20 mL，合并氯仿液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。同法制備黃柏缺味陰性對(duì)照溶液。另取黃柏對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法[2005年版《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)附錄ⅥB][1]試驗(yàn)，分別吸取上述3種溶液各約5 μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-濃氨試液(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性無干擾。

2.3 防風(fēng)的薄層色譜鑒別

取止癢洗劑20 mL，加乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，水浴蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為供試品溶液。同法制備防風(fēng)缺味陰性對(duì)照溶液。另取防風(fēng)對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法[2005年版《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)附錄ⅥB][1]試驗(yàn)，分別吸取上述3種溶液各約5 μL，點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性無干擾。

3 含量測(cè)定

3.1 色譜條件

Hypersil C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，甲醇-水(70∶30)為流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為322 nm，理論塔板數(shù)按蛇床子素計(jì)算不得低于3 000。

3.2 線性關(guān)系的考察

精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥12 h以上的蛇床子素對(duì)照品10.40 mg，置于10 mL容量瓶中，加入甲醇超聲溶解并定容至刻度(每1 mL含蛇床子素1.04 mg)。取上述對(duì)照品溶液，加甲醇稀釋，定容至刻度，依次制成130.00、65.00、32.50、16.25、8.13、4.06、2.03、1.02 μg/mL的溶液。分別精密吸取上述各對(duì)照品溶液20 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，并以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，吸收峰峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程為：Y=92 851X+27 076，r=0.999 9，蛇床子素在0.02～2.60 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

3.3 供試品溶液的制備

止癢洗劑10 mL置于25 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，密塞，稱定重量，超聲處理(功率300 W，頻率50 kHz)10 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量。精密吸取上清液，用0.45 μm的微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液。

3.4 可行性試驗(yàn)

按處方量制備蛇床子缺味陰性對(duì)照溶液。精密吸取對(duì)照品、供試品及陰性對(duì)照溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，測(cè)定。結(jié)果顯示，在與對(duì)照品色譜峰相應(yīng)的位置上，供試品溶液出現(xiàn)相同保留時(shí)間的色譜峰，蛇床子素和樣品中其他組分色譜峰可達(dá)到基線分離，蛇床子素與其相鄰色譜峰的分離度均大于1.5。陰性對(duì)照溶液在此保留時(shí)間和位置上無色譜峰，表明陰性對(duì)照無干擾。見圖1。

3.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一批號(hào)止癢洗劑10 mL，依法制備供試品溶液，精密吸取20 μL注入色譜儀，重復(fù)測(cè)定6次，RSD=0.72%(n=6)。

3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取配制好的供試品溶液，按含量測(cè)定方法，分別在0、2、4、6、8、10、12 h進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，結(jié)果顯示在12 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD=0.25%(n=7)。

3.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密吸取同一批號(hào)的止癢洗劑10 mL，共6份，依法制備供試品溶液，測(cè)定，計(jì)算，RSD=0.76%(n=6)。

3.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密吸取已知含量的止癢洗劑5 mL，共6份，稀釋至10 mL，再精密吸取5 mL，分別加入蛇床子素對(duì)照品，按樣品測(cè)定方法制備溶液，測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果蛇床子素平均回收率為98.81%。見表1。表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

3.9 樣品測(cè)定

精密吸取止癢洗劑，按“3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣，測(cè)定，計(jì)算。結(jié)果見表2。表2 蛇床子素含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

4 討論

本試驗(yàn)采用薄層色譜法對(duì)止癢洗劑中的蛇床子、黃柏、防風(fēng)進(jìn)行了定性鑒別，方法簡(jiǎn)便易行，重復(fù)性好。

在進(jìn)行色譜條件摸索時(shí)，本試驗(yàn)對(duì)2種流動(dòng)相系統(tǒng)即甲醇-水(70∶30)和乙腈-水(65∶35)[1]進(jìn)行了比較，結(jié)果以甲醇-水(70∶30)為流動(dòng)相，被測(cè)組分與其他組分有較好分離，且重復(fù)性好，精密度高，經(jīng)濟(jì)實(shí)用。

在供試品溶液(供含量測(cè)定用)的制備時(shí)，我們對(duì)兩種提取方法即甲醇超聲提取和乙酸乙酯萃取[2-3]進(jìn)行了比較，測(cè)定結(jié)果比較接近，考慮到方法的簡(jiǎn)便易行，故選擇甲醇超聲提取。