作者：劉永靜，陳丹，邱紅鑫，葉夢屏

【摘要】 目的研究不同生長季節玳玳果中總黃酮的含量差異，以便更有效地利用玳玳果總黃酮。方法以柚皮苷為對照品，運用紫外可見分光光度法對不同生長季節的玳玳果中總黃酮含量進行定量分析，檢測波長為284 nm。結果建立了玳玳果總黃酮的含量測定方法，結果表明不同生長季節的玳玳果中總黃酮含量存在一定的差異。結論所建立的含量測定方法精密度、穩定性及重復性良好，準確度高，可做為玳玳果總黃酮的定量分析方法，且玳玳青果中總黃酮的含量最高。

【關鍵詞】 玳玳果; 總黃酮; 生長季節; 定量分析

Abstract：ObjectiveTo study the content of total flavonoids from Citrus aurantium L. var daidai Tanaka fruits gathered in different seasons for effective utilization. MethodsThe content was total flavonoids analyzed by ultraviolet spectroscopy. The naringin was used as the chemical reference substance and the detection wavelength was set at 284nm.ResultsThe determination method of total flavonoids was established. The content of the total flavonoids gathered in different growing periods was evidently different.ConclusionThe method is sensitive， accurate， reproducible and can be used to control the quality of the total flavonoids from Citrus aurantium L. var daidai Tanaka fruits， and the quality of green fruits is the best .

Key words：Citrus aurantium L. var daidai Tanaka fruits;Total flavonoids;Growing seasons;Quantitative analysis

玳玳又稱代代Citrus aurantium L. var daidai，是蕓香科柑桔亞屬植物，為酸橙的變種，在我國福建、四川、浙江等地都有栽培。玳玳的未成熟果實稱玳玳花枳殼或蘇枳殼 ，幼果有被當作枳實入藥，具有理氣寬中、行滯消脹的功效，主要用于胸腹滿悶脹痛、食積不化、痰飲、胃下垂、脫肛、子宮脫垂等病癥[1，2]。實驗證明，玳玳果中含黃酮、生物堿、揮發油等活性成分，其中黃酮類成分以柚皮苷等為主要成分，具有良好的抗氧化活性[3～5]，而不同采收期的玳玳果中總黃酮含量不同。為了確保玳玳藥材的質量穩定性和對藥材的合理利用，本研究以玳玳果總黃酮中代表性成分柚皮苷為指標成分[6]，分析比較了不同生長季節的玳玳果中總黃酮的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器BP-211D型電子分析天平(德國Sartorius公司);FA2004電子天平(上海精密科學儀器有限公司);UV-4802雙光束紫外可見分光光度計(尤尼柯上海儀器有限公司)。

1.2 試藥玳玳果(福建恒馨天然香料有限公司提供;福建中醫學院中藥鑒定教研室范世明高級實驗師鑒定);柚皮苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：110722-200610);甲醇等試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備精密稱定柚皮苷對照品5.08 mg，置50 ml量瓶中，加甲醇適量使溶解，并加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成每毫升含0.101 6 mg的溶液，即得。

2.2 供試品溶液的制備取新鮮晾干的玳玳幼果果皮、青果果皮、橙果果皮分別低溫烘干，粉碎，過20目篩，即得玳玳果皮粗粉。精密稱取玳玳果皮粗粉50 g，置250 ml錐形瓶中，用6倍量的75%的乙醇回流提取，共回流提取3次，每次2 h，合并提取液，回收乙醇使成浸膏，減壓干燥呈橙色粉末，即得玳玳幼果、青果、橙果果皮醇提粉末。

分別精密稱取玳玳幼果、青果、橙果醇提粉末各20.0 mg，置50 ml量瓶中，加甲醇適量使溶解，再加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.3 測定波長的選擇分別取對照品溶液和供試品溶液，以甲醇為溶劑空白，在230～400 nm波長范圍掃描，結果顯示，對照品溶液和供試品溶液的吸收光譜圖基本一致，最大吸收波長均在284 nm，故測定波長選擇284 nm。結果見圖1。1.玳玳果醇提液 2.柚皮苷對照品圖1 吸收光譜圖

2.4 標準曲線的制備與線性關系的考察分別精密吸取柚皮苷對照品溶液0.4，0.7，1.0，1.3，1.6，1.9，2.1 ml于10 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，以甲醇為空白，在284 nm波長處測定吸光度。以濃度(C ，mg/ml)為橫坐標，吸光度(A)為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為A=3.634×101C-4.609×10-3，r=0.999 8，柚皮苷在0.004 064～0.021 336 mg/ml范圍內呈良好的線性關系。標準曲線見表1，圖2。

2.5 精密度實驗分別精密吸取同一供試品溶液6份，按“樣品含量測定”項下同法操作，計算。結果見表2。表1 線性關系測定結果圖2 標準曲線表2 精密度實驗結果

2.6 穩定性實驗精密吸取同一供試品溶液，放置0，30，60，90，120，150 min后，按“樣品含量測定”項下同法操作，測定，計算。結果表明供試品在150 min內穩定。結果見表3表3 穩定性實驗結果

2.7 重復性實驗分別取同一批玳玳果(青果)醇提粉末6份制備供試品溶液，按“樣品含量測定”項下同法操作，測定，計算。結果見表4。

2.8 回收率實驗精密稱取玳玳青果醇提粉末10 mg(含量為0.113 mg/ mg)，置50 ml量瓶中，按高、中、低3個濃度水平，分別精密加入柚皮苷對照品溶液(1.03 mg/ml)適量，用甲醇稀釋至刻度，按“樣品含量測定”項下同法操作，測定，計算。結果見表5。表4 重復性實驗結果表5 回收率實驗結果

2.9 樣品含量測定精密吸取供試品溶液1.0 ml置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。以甲醇為空白，在284 nm波長處分別測定其吸光度，計算總黃酮含量(以每毫升生藥中所含總黃酮量計)。結果見表6。表6 3批樣品含量測定結果

3 討論

實驗結果表明，不同生長季節的玳玳果中總黃酮的含量存在一定的差異：玳玳青果中的總黃酮含量>玳玳橙果中的總黃酮含量>玳玳幼果中的總黃酮含量。用分光光度法測定玳玳果醇提物中總黃酮的含量準確度高，重復性好，可以作為其中玳玳果總黃酮控制的方法，且為更有效地在最佳季節采摘玳玳果提取分離玳玳果總黃酮有效部位提供了實驗依據。