作者：何宇新， 李 玲， 李玉峰， 楊文宇

【關鍵詞】 腦康膠囊

摘要：目的對腦康膠囊中丹參、川芎、葛根進行薄層色譜定性鑒別，并測定腦康膠囊中葛根素的含量。方法采用薄層色譜法（TLC）對上述3味藥材進行鑒別，展開劑分別為苯醋酸乙酯(19∶1)、正己烷醋酸乙酯(9∶1)、氯仿甲醇水(78∶35∶10)的下層液；采用反相高效液相色譜法測定葛根素的含量，Diamonsil C18色譜柱(5 μm，150 mm×4.6 mm)，以甲醇0.015%磷酸溶液(23∶77)為流動相，流速為1.2 ml/min，柱溫35℃，檢測波長249 nm，測定。結果HPLC測定的線性范圍為0.02～0.12 μg，相關系數r=0.999 9；膠囊中葛根素的平均回收率為98.53%，RSD=1.08%，n=6；精密度(RSD＜2%)良好。結論該法操作簡便、快速、準確，適用于腦康膠囊中主要藥材的定性鑒別和葛根素的含量測定。

關鍵詞：葛根素； 腦康膠囊； 薄層色譜法； 高效液相色譜法

腦康膠囊系由葛根、川芎、丹參等藥材組成的中藥復方制劑，具有補益肝腎、填精補髓、活血通脈的功效。主要用于治療腦動脈硬化癥肝腎精虧兼瘀血阻絡證，癥見頭暈頭痛，神疲健忘，胸悶或痛，口干目澀，腰膝酸軟，虛煩少寐等。為了控制本品的質量，筆者采用TLC法對制劑中所含的川芎、丹參、葛根等3味藥材進行了薄層色譜鑒別實驗，并采用HPLC法測定本品中葛根素的含量。經方法學研究表明，該方法具有簡便易行、結果可靠、靈敏度高、重現性好、專屬性強等特點，可作為腦康膠囊質量控制標準。

1 儀器與試藥

美國Waters高效液相色譜儀(2690溶劑輸送系統，996二極管陣列檢測器，自動進樣器，Millenium32數據管理系統)：葛根素、丹參酮ⅡA、川芎對照藥材(中國藥品生物制品檢定所提供)；腦康膠囊和各種陰性膠囊由成都中醫藥大學藥學院中藥藥劑學教研室提供(批號為：040902，040906，040910)；硅膠G(薄層層析用，青島海洋化工廠)：甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其它試劑均為分析純。

2 方法

2.1 TLC鑒別實驗

2.1.1 丹參的鑒別取本品內容物5 g，加乙醚30 ml，置水浴中加熱回流1 h。濾過，濾液揮干，殘渣加乙醇0.5 ml使溶解，作為供試品溶液。同法取缺丹參的陰性樣品制成陰性對照品溶液，另取丹參酮ⅡA對照品，加乙醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法［1］實驗。吸取上述3種溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯醋酸乙酯(19∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與丹參酮ⅡA對照品色譜相應的位置上，顯相同的暗紅斑點，陰性對照品無此斑點。見圖1。

2.1.2 川芎的鑒別取本品內容物5 g，加乙醚20 ml，置水浴上加熱回流1 h，濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯1 ml使溶解，作為供試品溶液。同法取缺川芎的陰性樣品制成陰性對照品溶液。另取川芎對照藥材1 g同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法［1］實驗，吸取上述3種溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷醋酸乙酯(9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照品無此斑點。見圖2。

2.1.3 葛根的鑒別取樣品5 g，置索氏提取器中，加乙醚30 ml置50 ℃水浴上回流提取2 h，棄去乙醚液；殘渣加30 ml甲醇回流提取4 h，提取液蒸干，殘渣加水20 ml使溶解并轉移至分液漏斗中，加水飽和的正丁醇液萃取兩次，20 ml/次，合并正丁醇液，濃縮至干，殘渣加甲醇2 ml溶解，加于已處理好的聚酰胺柱(內徑1.5 cm，填充高度約15 cm)上，用水80 ml洗脫，收集水洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇2 ml溶解，作為供試品溶液。同法缺葛根的陰性樣品制成陰性對照品溶液。另取葛根素對照品，加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法［1］實驗。吸取上述兩種溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿甲醇水(78∶35∶10)的下層液(15 ℃以下放置過夜)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的淡藍色熒光斑點，陰性無干擾。見圖3。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件色譜柱Diamonsil C18(5 μm，150 mm×4.6 mm)；流動相 甲醇0.015%磷酸溶液(23∶77)；流速 1.2 ml/min；柱溫 35 ℃；檢測波長為249 nm；靈敏度0.001AUFS。在選定條件下，葛根素和樣品中其它分色譜峰可基線分離，葛根素與其相鄰色譜峰的分離度大于1.50；按葛根素峰計算，理論板數(N)為3 000以上，拖尾因子(T)為1.03［1］。

2.2.2 測定方法供試品溶液的制備：取本品內容物適量，研勻，取0.5 g，精密稱定，置平底燒瓶中，加甲醇50 ml，稱定重量，置水浴上回流45 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液1 ml，置10 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。 陰性樣品溶液的制備：取腦康陰性膠囊(缺葛根)內容物適量，研勻，取0.5 g，精密稱定，置平底燒瓶中，加甲醇50 ml，稱定重量，置水浴上回流45 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液1 ml，置10 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。對照品溶液的制備：精密稱取葛根素對照品適量，加甲醇制成每毫升含10 mg的溶液。測定：分別精密吸取對照品、供試品和陰性樣品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，記錄峰面積，根據葛根素對照品的峰面積，計算出樣品的含量。

2.2.3 測定結果標準曲線的制備：精密量取葛根素對照品溶液(10 μg/ml)2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0 μl進樣，記錄色譜圖，測定其峰面積，并以峰面積值(A)對進樣量(C)進行回歸，得標準曲線方程為：C=2.591 4×107A＋1.935 9×103，r=0.999 9。結果表明，葛根素在0.02～0.12 μg范圍內呈良好線性關系。精密度實驗：精密吸取上述對照品溶液5 μl，重復進樣5次，葛根素峰面積的相對標準差(RSD)＜2%，結果表明，精密度良好。穩定性實驗：取樣品供試液分別于0，2，4，8，12 h進樣10 μl，測得樣品中葛根素峰面積值的相對標準偏差＜2%，結果表明，樣品供試液在12 h內穩定性良好。重復性實驗：按擬定的含量測定方法，取同一批樣品五份，分別制備樣品供試液，測得峰面積值及含量，其相對標準偏差＜2%，結果表明，重復性好。回收率實驗：取6份已知含量的樣品約0.2 g，分別加入葛根素對照品溶液(10 mg/ml)75，150，225 μl照含量測定項下方法測定，結果，3種水平6次實驗的加樣回收率測定結果均在95%～105%之間，其平均值為98.53%，RSD為1.08%。

表1 回收率實驗結果測定（略）

樣品測定：照含量測定項下的方法，對三批腦康膠囊樣品進行含量測定。結果見表2。

表2 樣品含量測定結果mg批 （略）

3 討論

各薄層鑒別經做陰性對照實驗，結果表明除了被檢出藥味外，腦康膠囊中其它藥味對主斑點無干擾，專屬性強、重現性好、操作簡便，可作為該品的定性控制指標。含量測定經做陰性對照實驗，結果腦康膠囊中其它藥味對葛根素的含量測定無干擾，表明本法專屬性強，可作為該品的定量控制指標。

［1］ 國家藥典委員會.中國藥典，Ⅰ部［S］.北京:化學工業出版社，2000:158，附錄ⅥB.