【關鍵詞】 高效液相色譜法 中藥藥代動力學

高效液相色譜法是采用高壓輸液泵將規定的流動相泵入裝有填充劑的色譜柱對樣品進行分離測定的色譜方法。對于分離分析揮發性低，熱穩定性差分子量大的高分子化合物以及離子型化合物極為有利。血藥濃度測定法是現代中藥藥代動力學常用的研究方法[1]，其中包括對指標成分明確的單味中草藥和中藥復方的研究。把藥物通過一定給藥方式加入機體后，可以通過監測藥物以及一些內源性指標成分在血液中濃度的變化來對藥物進行分析，如氨基酸、蛋白質、核酸、類脂、維生素、抗生素、生物堿等。高效液相色譜技術具有分離效能高、分析速度快、靈敏度高等優點，在現代藥代動力學研究中得到了廣泛應用。

在藥代動力學的分析過程中需要有指標成分明確的量反映資料來監測藥物的分布排泄以及內源性指標成分的變化情況，來比較影響藥物作用的因素，指導合理用藥。利用高效液相的分離分析手段便可以從體液或組織中得到這些量反映資料。但測定方法的特異性、準確性的靈敏度將直接影響藥代動力學研究的準確度，所以為了滿足不同分析對象的要求，往往需要多種類型的檢測器。本文以高效液相色譜法常用的檢測器為線索綜述了近年該方法在中藥藥代動力學研究中的應用。

1 高壓液相——紫外檢測器（UV）

紫外檢測器是高效液相色譜法最常用的檢測器，它的作用原理是基于被分析樣品對特定波長紫外光的選擇性吸收，樣品濃度與吸光度的關系服從比爾定律。繆海軍等[2]建立了以萘酚為內標測定血漿中水飛薊賓的反相高效液相色譜法，得出水飛薊賓的體內過程呈二室模型。其藥代動力學參數分別為：吸收速率常數0.76h－1，分布相速率常數為1.21h－1，消除相速率常數為0.48h－1，藥時曲線下面積為239.4ng.h.ml－1，分布體積為0.40mg.ml.ng－1，清除率為0.36mg.ml.ng－1.h－1。為水飛薊賓的臨床研究提供了一個簡便靈敏的檢測手段。

2 高壓液相——示差折光檢測器（RI）

示差折光檢測器是利用連續測定流通池中溶液折射率變化的方法來測量樣品濃度的。潘峰等[3]采用高效液相色譜示差（HPLC-RI）檢測法測定燒傷病人尿中乳果糖、甘露醇的含量，對燒傷病人腸通透性變化的評價，探索出了一種有效、可靠、靈敏、快捷的實驗方法。

3 高壓液相——熒光檢測器（FLD）

熒光檢測器的原理是，物質被紫外光照射后，二次輻射出較長的波長（熒光），通過檢測熒光的強度來確定洗脫液中有熒光效應的樣品組分的含量。張錦雯等[4]建立了測定大氧血漿中大黃酸濃度的HPLC-熒光檢測方法，并對大黃酸在大鼠體內的藥代動力學行為進行研究，得出大黃酸灌胃后的藥代動力學符合二室模型。金昔陸等[5]為闡明葛根素的代謝規律，建立了血漿中葛根素的高效液相色譜熒光檢測法，摸索出了一套靈敏度高、操作簡便的方法，把血漿經無水乙醇沉淀蛋白后上清液可直接進行測定，10min內出峰完畢，具有分析時間短、重現性好、特異性強及回收率好等優點，測得葛根素在狗體內的藥時過程為線性動力學過程，符合開放式二室模型，T1/2A、T1/2B分別為6.0、57.4min。

此外，當指標成分自身不能產生熒光時可以通過衍生化反應生成能激發熒光的物質進而進行檢測。付桂香等[6]利用反相高壓液相色譜鄰苯二甲醛柱前衍生化、熒光檢測法建立了測定血清中精氨酸含量的方法。

4 高壓液相——電化學檢測器（ECD）

電化學檢測器是一種高靈敏度的檢測器，利用測量分析物的氧化還原電勢來進行檢測。李偉榮等[7]采用高效液相電化學檢測的方法測定了大鼠下丘腦內組胺和5——羥色胺，由于HA在化學上屬咪唑類，作為原始態的胺，不能直接進行熒光或電化學檢測，須經衍生化反應以后才在電化學檢測器（ECD）上有響應，采用臨苯二甲醛——亞硫酸鈉作為衍生試劑對大鼠下丘腦勻漿上清液內的HA進行柱前衍生后進樣分析，測得結果為大鼠下丘腦內HA和5——HT的平均含量分別為0.280±0.029μg/ml和0.224±0.068μg/ml。

5 高壓液相——質譜聯用（MS）[8]

HPLC-MS聯用技術集液相色譜的高分離與質譜的高靈敏度、極強的定性專屬性于一體。質譜檢測器具有更高的靈敏度，樣品用量少，分析速度快應用范圍廣，在選擇合適電離方法的前提下，一般化合物都能被電離得到檢測，從而能獲得更多的化合物結構信息。

王素軍等[9]測定并建立了Beagle犬血漿中氧化苦參堿及其代謝物的LC——MS分析法，研究了氧化苦參堿及其代謝物藥代學過程，研究結果為氧化苦參堿的代謝物苦參堿比母藥達峰晚約0.9h，苦參堿的末段清除半衰期約為氧化苦參堿的2倍，消除較母藥慢，二者血藥濃度曲線下的面積均值之比約為0.95，表明有大量的氧化苦參堿在腸道經細菌轉化為苦參堿而吸收入血。

總之，高效液相色譜方法吸取了經典液相色譜和氣相色譜兩種方法的優點，在分析分離已知化合物方面具有很大優勢，其檢測器也從固定單波長紫外檢測器發展到可變波長紫外一可見光檢測器、示差析光、熒光、電化學以及質譜檢測器等。但由于中藥及其復方物質基礎的復雜性，在中藥藥代動力學研究中高壓液相色譜技術還有待進一步完善。