作者：馬小林 李英倫 崔恒敏 趙玲

【摘要】 目的研究細菌性前列腺炎病理模型下，鹽酸左氧氟沙星(Levofloxacin Hydrochloride)在大鼠體內的藥代動力學特征。方法36只大鼠造成細菌性前列腺炎病理模型后，單劑量一次灌胃內服鹽酸左氧氟沙星［80 mg/(kg·bw)］；采用高效液相色譜法測定血藥濃度，血藥濃度最低檢測限0.001μg/ml，并以DAS 2.0藥動學軟件對所得數據進行分析。結果藥物體內過程符合一級吸收二室模型（權重=1/CC），主要動力學參數及擬合方程如下：T1/2Ka為(45.294±2.07) min，T1/2α為(63.963±15.258)min，T1/2β為(280.535±214.601) min，Tmax為(50±17.321)min，Cmax為(14.905±3.143) mg/L，AUC(0-1440)為(2 561.219±430.592)(mg·min·L-1)，Ka為(0.015±0.001)min-1，MRT（0→1440）為（196.865±50.656）min，擬合方程為：C=66.697·e-0.011t+6.031·e-0.004t-72.728·e-0.015t。結論鹽酸左氧氟沙星在細菌性前列腺炎模型大鼠體內吸收迅速，血藥濃度較高，分布廣泛，消除較為緩慢。

【關鍵詞】 鹽酸左氧氟沙星 細菌性前列腺炎 藥代動力學 大鼠 高效液相色譜

Abstract:ObjectiveTo study the pharmacokinetics of Levofloxacin Hydrochloride in pathological model of rats with bacterial prostatitis. MethodsGive the drug to 36 rats with bacterial prostatitis model at a dosage of 80 mg per kilogram of body weight orally.Plasma Levofloxacin Hydrochloride concentrations were determined by high performance liquid chromatography，with a limit of detection of 0.001μg of Levofloxacin Hydrochloride per milliliter of plasma.Plasma Levofloxacin Hydrochloride pharmacokinetic data were calculated by using DAS2.0 pharmacokinetics software. ResultsThe fate of drug was consistent with finst order absorption and two compartement models (weight=1/CC)， major kinetia parameters of pharmacokinetics and equation were as follows: T1/2ka=(45.29±2.07) min， T1/2a=(63.963±15.258) min， T1/2β=(280.535±214.601) min， Tmax=(50±17) min， Cmax=(14.905±3.143) mg/L，AUC(0～1440)=(2561.219±430.592)(mg·min-1·L-1)，Ka=(0.015±0.001)(1/min)，MRT(0～1440)=(196.865±50.656)min，C=66.697·e-0.011t+6.031·e-0.004t-72.728·e-0.015t.ConclusionLevofloxacin Hydrochloride in pathological model of rats with bacterial prostatits is quickly absorbed with high concentration in plasma， distributed widespread， and eliminated slowly.

Key words:Levofloxacin Hydrochloride； Prostatitis； Pharmacokinetics； Rats； HPLC 前列腺炎(prostatitis)是男性泌尿系統的常見病與多發病，具有病因病理復雜，癥狀表現多樣化，病程遷延，反復發作，經久難愈的特點，且有逐年增多的趨勢，對男性健康有巨大的危害。由于前列腺特殊的解剖結構，目前，許多藥物在前列腺的濃度都非常低，使得對人的前列腺炎的治療效果都不理想。探索和尋找其有效的治療方法是目前臨床研究的重點［1］。鹽酸左氧氟沙星(Levofloxacin Hydrochloride)系第3代氟喹諾酮類抗菌藥物，為左旋氧氟沙星(Levofloxaein，LVFX)的鹽酸鹽，對革蘭陰性桿菌、革蘭陽性球菌和非典型病原體均有良好的抗菌活性，且組織滲透性好，在體內吸收后廣泛分布至各組織、體液，是目前醫治前列腺炎的有效藥物，臨床使用較廣，但其治療效果仍有待于臨床的進一步驗證［2］。目前，關于左氧氟沙星在動物體內的藥代動力學方面的研究，人們僅對人［3］、狗［4，5］、雞［6］、兔［7］、豬［8］以及健康大鼠［9，10］等動物進行了研究。但是，關于左氧氟沙星在前列腺炎病理模型下動物體內的藥代動力學研究國內外尚未見報道。本實驗采用細菌性前列腺炎病理模型研究，大鼠體內鹽酸LVFX的藥代動力學特征，旨在為左氧氟沙星在前列腺炎疾病治療的臨床應用方面提供理論依據。

1 器材

1.1 動物清潔級健康SD大鼠36只，雄性，體重(335±20) g，4月齡，四川大學實驗動物中心提供。大鼠購進后常規飼養，觀察2周無異常后進行實驗。

1.2 儀器

日本島津SHIMADZU LC-2010C HT(CLASS-VP 6.13multi)高效液相色譜系統(含島津色譜工作站軟件)；JD100-3電子天平(沈陽龍騰電子有限公司)；800型離心沉淀器(上海手術器械十廠)；800B臺式離心機(上海安亭科學儀器廠)；SK250LH超聲波清洗機(上海科導超聲儀器有限公司)；XW-80A旋渦混合器(上海青浦滬西儀器廠)；D-37520osterode高速冷凍離心機（美國科峻儀器公司)；PHS-25型酸度計（成都方舟科技開發公司）。

1.3 造模菌種 大腸埃希氏桿菌(ATCC-25922)，由中國藥品生物制品檢定所提供，經本實驗室增菌至1.8×1010cfu/ml。

1.4 藥品與試劑

鹽酸左氧氟沙星原料藥，購自浙江康裕制藥有限公司，批號KY-LH-M20060203，含量為89.8%。鹽酸左氧氟沙星標準品，購自中國藥品生物制品檢定所，編號130537-200301。鹽酸左氧氟沙星標準品及原粉在105℃下烘干至恒重備用。甲醇、乙腈、四丁基溴化銨、磷酸二氫鉀、磷酸均為色譜級；實驗用水為超純水；水合氯醛、三氯乙酸、鹽酸等均為國產分析純試劑。

2 方法

2.1 細菌性前列腺炎模型的制作大鼠實驗前禁食12 h，但供給充足飲水。參照文獻［11，12］前列腺炎模型的制作方法，將72只大鼠以10％水合氯醛(350 mg/kg)腹腔麻醉，麻醉成功后，用手術膠布將大鼠四肢固定在手術臺上，剪毛，備皮，消毒，在無菌條件下于大鼠尿生殖膈上方行約1.5 cm大小縱形切口，沿腹中線切開腹壁，直達腹腔，暴露位于膀胱頸外側的前列腺腹葉(分左右兩葉)，然后用鑷子輕輕提出膀胱及兩側精囊，暴露附于精囊內側的前列腺背葉，再于前列腺左、右背側葉包膜下分別注入標準大腸桿菌菌液(1.8×1010cfu/ml)各0.1 ml，0.5％碘伏棉球輕輕按壓針眼后，回納前列腺于原位，分層縫合腹壁肌肉、皮膚，碘酊消毒創口，造模結束，放回鼠籠，自由飲食，術后5 d即可形成大鼠細菌性前列腺炎模型［12］。

2.2 分組及給藥方法大鼠前列腺炎病理模型制作完成后，常規飼養，日糧不含任何抗生素。每天觀察大鼠傷口愈合情況。術后第5天，將36只大鼠，按12個采樣時間點隨機分為12組，每組各3只。按80 mg/kg的給藥劑量以灌胃方式（ig）給藥。

2.3 藥液配制精密稱取烘干的鹽酸LVLX原料藥(含量89.8%)4.58g以0.1 mol/L鹽酸溶解后用蒸餾水定容至500 ml，即得8 mg/mL的鹽酸LVLX藥液（pH 3.16）。 精密稱取烘干的鹽酸LVFX標準品30 mg，先用適量0.1 mol/L的鹽酸溶解，然后用流動相(甲醇－乙腈－0.01 mol/L KH2PO4－0.5 mol/L四丁基溴化銨，體積比為30∶30∶430∶10)稀釋定容至10 ml，配制成3 mg/ml的貯備液，再進一步稀釋后制成不同濃度的標準品溶液。

2.4 給藥和血液采樣給藥前12 h，大鼠禁食不禁水。分別于給藥前(0 h)和給藥后5，10，30 min，1，2，4，6，8，10，12，24 h大鼠心臟采血各2.0 ml于加有肝素鈉的試管中，以4 000 r/min離心10 min后，取血漿于1.5 ml塑料離心管中，-20℃冰箱中保存備用。

2.5 血漿樣品處理方法 取解凍后血漿0.5 ml于1.5 ml塑料離心管中，加入色譜級甲醇0.5 ml，漩渦混合60 s，超聲波振蕩60 s，再以13 000 r/min 4℃離心15 min后，取上清液過0.45μm濾膜，上機進樣10 μl。

2.6 色譜條件色譜柱為Diamonsil(TM)鉆石 C18柱（5μm，150 mm×4.6 mm）。流動相為甲醇－乙腈－0.01 mol/L KH2PO4－0.5mol/L四丁基溴化銨=30∶30∶430∶10(體積比)，1.5 mol/L的H3PO4調pH至3.0。流速1.0 ml/min，柱溫35℃；紫外檢測波長295 nm；進樣量10 μl。

2.7 數據分析將鹽酸LVFX在前列腺炎大鼠體內的血藥濃度時間數據用DAS 2.0藥動學軟件進行處理，根據R2最大，AIC最小的原則選取最佳藥代動力學模型，求算給藥后，鹽酸LVFX在大鼠體內的藥代動力學參數。

3 結 果

3.1 標準曲線取大鼠空白血漿各0.5 ml于1.5 ml塑料離心管中，分別加入適當濃度的鹽酸LVFX標準品溶液0.1 ml，制成含藥為50，10，2.5，1.0，0.1，0.05，0.001 μg/ml的系列濃度，同照“2.5”項下操作，分別記錄峰面積。以鹽酸LVFX峰面積（Y）與血漿藥物濃度（X）進行線性回歸，得到標準曲線方程為：Y=21 875X+5 090.2，r=0.999 9。血藥濃度在0.001～50μg/ml之間線性關系良好，最低檢測限為0.001μg/ml。標準曲線見圖1。 3.2 樣品提取方法回收率及精密度參照《生物藥物分析》［13］關于回收率及精密度的測定方法，選取高、中、低3個濃度測得方法回收率分別為93.40％，99.08％和102.74％。日內及日間精密度分別為2.27％，1.05％和3.31％以及2.67％，3.77％和2.73％。結果見表1～2。表1 血藥濃度檢測方法回收率(略)表2 血藥濃度檢測方法日內及日間精密度差異(略)

3.3 標準品和樣品色譜圖見圖2～4。

3.4 血藥濃度細菌性前列腺炎大鼠灌服鹽酸LVFX（80 mg/kg)的血漿藥物濃度實測值和擬合值見表3。實測值的達峰時間較擬合值短，且達峰濃度大于擬合值，在消除相兩者變化趨勢基本一致。

3.5 藥-時曲線圖細菌性前列腺炎大鼠灌服鹽酸LVLX（80 mg/kg)后，藥物體內過程符合一級吸收二室模型（權重=1/CC），其藥-時曲線見圖5。表3 大鼠灌服鹽酸LVLX（80 mg/kg）后血漿中藥物濃度實測值與擬合值(略)

3.6 藥代動力學參數細菌性前列腺炎大鼠，按80 mg/kg單劑量灌服鹽酸左氧氟沙星所得藥時數據經DAS2.0藥動學軟件處理。其主要藥動學參數見表4。表4 藥動學參數表(略)

4 討論

4.1 HPLC測定方法本實驗采用HPLC法測定細菌性前列腺炎大鼠血漿中的鹽酸LVFX濃度，其檢測靈敏度高，最低檢測限為0.001 μg/ml；檢測方法重復性好；對于血漿樣品的預處理采用色譜級甲醇∶血漿=1∶1（體積比）直接沉淀，避免了引入其他雜質的影響，并配合超聲波振蕩，提取更加完全，以及13 000 r/min 4℃超速離心，分離更徹底。在本法色譜條件下，鹽酸左氧氟沙星與雜質峰能夠得到良好分離，而且測定一個樣品一般只需要10 min即可，快速方便。

4.2 鹽酸左氧氟沙星的藥動學分析左旋氧氟沙星(Levofloxacin，LVFX)是第3代喹諾酮類藥物，為氧氟沙(Ofloxacin，OFLX)的光學活性L-型異構體［S(-)-OFLX］，對包括厭氧菌在內的革蘭陽性菌和革蘭陰性菌、支原體、衣原體均表現出較強的抗菌活性，其體外抗菌活性約為氧氟沙星右消旋體的8～128倍［14］，為外消旋體OFLX的2倍［15］，又因其消除了無抗菌活性而有副作用的右旋部分，使其副作用和不良反應大大減少［16］，并且左旋氧氟沙星可以在前列腺組織和前列腺液中達到足夠的殺菌濃度［17］。因此，本研究選用鹽酸左氧氟沙星作為實驗藥物。 前列腺炎病理模型下，大鼠按80 mg/kg單劑量灌服鹽酸左氧氟沙星所得藥時數據經DAS 2.0藥動學軟件處理，并選取最佳藥動學模型。結果表明，鹽酸左氧氟沙星在大鼠體內的藥動學過程符合一級吸收二室模型(權重=1/CC)，其藥代動力學方程為：C=66.697·e-0.011t+6.031·e-0.004t-72.728·e-0.015t。這與LVFX在人［18］，雞［6］，犬［19］，豬［8］，兔［7］等動物體內的藥代動力學過程相一致。 前列腺炎模型下，大鼠灌胃內服鹽酸LVLX后，經藥時曲線分析發現LVFX吸收迅速，其主要藥代動力學參數：Ka為(0.015±0.001) min-1；Tmax為(50±17.321) min；Cmax為(14.905±3.143) mg/L；AUC(0-1440)為(2561.219±430.592)(mg·min·L-1)；CL/F為（0.031±0.005）L·kg-1·min-1；10，30，240 min血漿藥物濃度分別為（6.46±1.083），（13.523±4.368），（4.551±1.5733）mg/L。宋坤改等［9］采用微生物杯碟法測定了甲磺酸左氧氟沙星在大鼠體內分布和血清蛋白結合率，給健康大鼠按20 mg/kg灌胃口服后，10，30，240 min血中藥物濃度分別為（1.56±0.20），（2.62±1.14），（0.30±0.07）mg/L；李曉天等［10］采用反相高效液相色譜法測定了大鼠不同時間（8：00，16：00，24：00）口服給予左氧氟沙星20 mg/kg后，左氧氟沙星在大鼠體內的時辰藥動學，其中8：00的主要時辰藥代動力學參數為Tmax為(0.56±0.21)h；Cmax為（2.40±0.40）mg/L；AUC(0-720)為(10.9±2.8)(mg·h·L-1)；CL/F為（0.39±0.16）（L·kg-1·h-1）。上述參數表明，前列腺炎大鼠灌服鹽酸LVLX后，在體內吸收迅速，血藥濃度較高，達峰時間短，吸收迅速；較正常健康大鼠，具有藥物吸收更快、達峰更快、血藥濃度更高、有效血藥濃度維持時間更長的藥動學特征。 另據報道，狗按8 mg/kg灌服甲磺酸左氧氟沙星后，Ka為0.87 h-1，Tmax為2.62 h，Cmax為2.89 mg/L，AUC為30.95（mg·min·L-1)［4］；兔以左氧氟沙星滴眼液點眼后，Ka為0.063 min-1，Tmax為30 min，Cmax為1.21 mg/L［7］；豬按20 mg/kg口服左氧氟沙星后，Ka為(1.70±0.31)h-1，Tmax為(1.85±0.25)h，Cmax為(6.99±0.92)mg/L，AUC為(90.7±10.07)(mg·h·L-1［8］。雞按10mg/kg內服LVLX后的Ka為(0.852±0.046)h-1，Tmax為(1.624±0.073)h，Cmax為(1.715±0.106) mg/L，AUC為(9.470±0.690)/(mg·h·L-1)［6］。可見，前列腺炎模型下，大鼠內服鹽酸LVLX后，吸收較兔、狗、豬、雞都慢，血藥峰濃度比兔、雞、狗、豬都高，達峰時間較兔為慢，但比雞、狗、豬都快。 在前列腺病理情況下，鹽酸LVFX在大鼠體內分布較快，T1/2a為（63.963±15.258）min；T1/2β為（280.535±214.601）min；V1/F為(4.962±2.608)L/kg，狗［4］則為(2.01)L/kg，雞［6］為(2.904±0.206)L/kg。犬［5］T1/2a（10.4±2.1）h，雞［6］T1/2a（1.267±0.029）h，健康大鼠［10］T1/2（4.2±0.4）h。由此表明，鹽酸LVFX在前列腺炎大鼠體內吸收較好，組織穿透性強，消除較慢，有效血藥濃度維持時間較長，分布廣泛。

4.3 結論上述研究表明，LVLX在不同的種屬動物體內，以及健康和病理狀況下的藥動學特征不一樣，在前列腺炎病理模型下，大鼠灌服鹽酸左氧氟沙星，較正常健康大鼠以及其他個別種屬動物表現出吸收更快，消除半衰期更長，血藥濃度更高，有效血藥濃度維持時間更長的藥代動力學特征。