【摘要】 目的 考察硫酸長春新堿脂質體的體外釋放度及其藥效。方法 采用pH梯度法制備硫酸長春新堿脂質體，用透析法測定其體外釋放度和血漿釋放度，通過抗小鼠S180腫瘤的抑瘤率評價藥效。結果 硫酸長春新堿脂質體體外釋放度符合零級動力學模型；聚乙二醇單甲醚2000膽固醇琥珀酸酯修飾的硫酸長春新堿脂質體釋放度降低，抑瘤率顯著提高。結論 長循環硫酸長春新堿脂質體降低藥物釋放度，提高藥效。 【關鍵詞】 硫酸長春新堿 脂質體 長循環脂質體 釋放度 藥效學 Abstract:Objective To investigate the release rate and pharmacodynamics in vitro of of vincristine sulfate liposomes. Methods Vincristine sulfate liposomes was prepared by pH gradient method. The release rate was measured by dialysis method. Pharmacodynamics of vincristine sulfate liposomes was evaluated by its antitumor efficacy. Results The release rate of vincristine sulfate liposomes in vitro was fitted to zeroorder model. After modification with longcirculating adjuvant， the release rate of vincristine sulfate liposomes decreased and antitumor efficacy increased obviously. Conclusion Longcirculating vincristine sulfate liposomes decrease release rate and increase curative effect. Key words:vincristine sulfate; liposome; longcirculating liposome; release rate; pharmacodynamics 硫酸長春新堿（vincristine， VCR）為長春花生物堿類抗腫瘤藥物，對白血?⒘馨土鼉哂邢災钚?。临礌Nτ玫牧蛩岢ご盒錄釵⑸浼?，存灾k乓┪鋨胨テ詼獺⒋豢臁⑸窬低澈臀賦Φ藍拘鄖康熱鋇?。有研究钡a鰨侍遄魑怪琢鲆┪鐫靨蹇梢愿納埔┪錮砘災省⑻岣吡菩?、綑n拖低澈吞囟ú課唬ㄈ縲腦?、捎z┑畝靖弊饔茫?］。Peter MK等人的研究也表明，硫酸長春新堿制成脂質體能改善藥物體內行為、提高療效、降低毒副作用［2］。因此，抗腫瘤藥物與脂質體結合的處方設計越來越受到關注。 本文采用主動載藥法中的pH梯度法，以氫化大豆卵磷脂/膽固醇（HSPC/Chol）為脂質體膜制備硫酸長春新堿脂質體。考察硫酸長春新堿脂質體的釋放度和抗小鼠S180腫瘤抑瘤率，同時考察長循環輔料聚乙二醇單甲醚2000膽固醇琥珀酸酯（CHSPEG2000）對釋放度和抑瘤率的影響，以期為該藥臨床應用提供更好的給藥劑型。 1 實驗材料 1.1 試藥 硫酸長春新堿（廣州環葉制藥有限公司），硫酸長春新堿對照品（中國藥品生物制品鑒定所），氫化大豆卵磷脂（HSPC，德國），膽固醇（Chol，藥用，溫州市甌海食品生化廠），CHSPEG2000 (聚乙二醇單甲醚2000膽固醇琥珀酸酯，自制)，陽離子樹脂（上海樹脂廠），其他試劑均為分析純。 1.2 儀器 P230高效液相色譜儀（大連依利特），FC204分析天平（上海精科儀器廠），電熱恒溫水浴鍋（大連醫療器械廠），PHS25型pH計（上海精科雷磁），DF101磁力攪拌器（鞏義市英峪予華儀器廠），透析袋（美國VIKASE公司），M110L型微射流儀（美國microfluids公司）。 1.3 動物 小白鼠（18～22 g，沈陽藥科大學實驗動物中心，SCXK 遼2005-008）；家兔（2～3 kg，沈陽藥科大學實驗動物中心，SCXK 遼2005—008）；S180腫瘤（遼寧省腫瘤研究所）。 2 方法與結果 2.1 pH梯度法制備硫酸長春新堿脂質體及包封率測定［3］ 2.1.1 HPLC條件 色譜柱：Kromasil C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇水二乙胺(體積比70∶30∶0.5)（磷酸調pH7.0）；柱溫：35 ℃；流速：1.2 mL/min；紫外檢測波長：298 nm。 2.1.2 空白脂質體的制備 將HSPC、Chol按2∶1（質量比）混合，加適量無水乙醇，65 ℃水浴中加熱溶解，揮除乙醇，加枸櫞酸緩沖液(0.3 mol/L，pH 4.30)，65 ℃水化30 min，用微射流儀循環數次，依次通過0.8和0.45 μm的微孔濾膜整粒，得空白脂質體。將HSPC、Chol、CHSPEG2000按2∶1∶0.2（質量比）混合，其他操作同上，得長循環空白脂質體。 2.1.3 硫酸長春新堿脂質體的制備 取空白脂質體0.2 mL、硫酸長春新堿溶液（1.0 g/L）1.0 mL和Na2HPO4溶液（0.375 mol/L；pH 9.0）0.8 mL混勻（pH 7.3），于60 ℃孵化10 min，得硫酸長春新堿脂質體。取長循環空白脂質體同法操作，得長循環硫酸長春新堿脂質體。 2.1.4 硫酸長春新堿標準曲線制備 取硫酸長春新堿對照品儲備液（0.1 g/L），用70％（體積分數）甲醇配制成1.0，2.5，5.0，7.5，10.0，12.5 mg/L的系列溶液，濾過，HPLC測定；以峰面積（A）對質量濃度（ρ）線性回歸，得回歸方程A=14.5ρ+3.1（r=0.999 9），線性范圍1.0～12.5 mg/L。 2.1.5 硫酸長春新堿脂質體藥物回收率測定 取0.8，1.0，1.2 g/L的硫酸長春新堿溶液各1 mL，分別加入空白脂質體0.2 mL和Na2HPO4溶液0.8 mL，制備不同濃度硫酸長春新堿脂質體。取各濃度脂質體各0.3 mL分別置于5 mL量瓶中，以去離子水定容，搖勻，再取1.5 mL于5 mL量瓶中，以甲醇定容，搖勻，濾過，HPLC法測定。代入標準曲線計算藥物含量，進而計算回收率。結果表明，硫酸長春新堿脂質體中藥物回收率為98.1%～101.8%。 2.1.6 硫酸長春新堿脂質體包封率的測定 1.2”中硫酸長春新堿脂質體0.3 mL兩份，一份置5 mL量瓶中，以去離子水定容，再取1.5 mL于5 mL量瓶中，以甲醇定容，混勻，濾過；另一份上陽離子樹脂柱，以去離子水洗脫，收集5 mL洗脫液，再取1.5 mL于5 mL量瓶中，以甲醇定容，混勻，濾過。HPLC測定，計算包封率：包封率=A過柱/A未過柱，其中A過柱表示脂質體包封的硫酸長春新堿的色譜峰面積；A未過柱表示總的硫酸長春新堿的色譜峰面積。 結果表明，硫酸長春新堿脂質體的包封率為86.9％，長循環硫酸長春新堿脂質體包封率提高到92.8％。 2.2 硫酸長春新堿脂質體體外釋放度的考察 2.2.1 分析方法建立 將4 mL空白脂質體裝入預處理好的透析袋中，于37 ℃生理鹽水（100 mL）中透析10 h，取外層透析液用紫外分光光度計于298 nm測定吸光度（λVCR 297.8 nm），吸收值為零。說明空白脂質體在10 h內未通過透析袋，可采用透析法測定硫酸長春新堿脂質體的體外釋放度。 2.2.2 硫酸長春新堿脂質體體外釋放度的測定 取硫酸長春新堿溶液、硫酸長春新堿脂質體和長循環硫酸長春新堿脂質體各4 mL，分別加入預處理好的透析袋中，再分別置于37 ℃生理鹽水中透析，定時取透析液2 mL，并補加等量生理鹽水。將透析液濾過，測定藥物濃度，計算通過半透膜的藥物累積釋放量Mt，進而計算累積釋放度，結果見圖1。 Mt=cnV0+∑ni=1ci-1V 其中，V0為釋放介質體積，cn為第n次取樣時濃度，V為取樣體積。 圖1 硫酸長春新堿溶液和脂質體累計釋放度

［2］PETER M K， GRAY M K， GRAY M B， et al. Liposome encapsulated vincristine :preclinical toxicologic and pharmacologic comparison with free vincristine and empty Liposomes in mice， rats and dogs［J］.Anti Cancer Drug，1994(5): 579.

［3］趙妍，于彬，鄧意輝，等.主動載藥法制備硫酸長春新堿脂質體及其包封率的測定［J］.中國藥學雜志，2005，40(20):1 559.