【摘要】 目的 研究復(fù)發(fā)及難治急性髓細(xì)胞白血病（AML）病人多藥耐藥基因（mdr1）的表達(dá)及其與臨床療效的關(guān)系。方法 采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RTPCR）檢測65例AML病人（其中初診組38例，完全緩解組14例，復(fù)發(fā)難治組13例）、27例非白血病病人和健康人（包括健康人15例、缺鐵性貧血病人10例、特發(fā)性血小板減少性紫癜病人2例）mdr1基因的表達(dá)水平，并分析其臨床意義。結(jié)果 AML病人mdr1基因表達(dá)陽性率高于對照組，復(fù)發(fā)難治組mdr1基因表達(dá)陽性率高于初診組和完全緩解組，臨床耐藥組mdr1基因表達(dá)陽性率顯著高于非臨床耐藥組，CR率非臨床耐藥組顯著高于臨床耐藥組，差異均有顯著性(χ2=8.334～49.630，P<0.01)。結(jié)論 mdr1基因陽性表達(dá)與AML病人臨床耐藥密切相關(guān)，是影響預(yù)后的重要因素，可作為檢測臨床耐藥和判斷預(yù)后的指標(biāo)之一。 【關(guān)鍵詞】 白血病 髓樣 多藥耐藥相關(guān)蛋白質(zhì)類 抗藥性 腫瘤 ［ABSTRACT］ObjectiveTo study the expression of multidrug resistance gene (MDRG) and the curative effect in relapse or refractory acute myelogenous leukemia (AML).MethodsA semiquantitative reverse transcription polymerase chain reaction (RTPCR) was used to investigate the transcription levels of the human MDRG in 65 AML patients and 27 controls， and analyze the its clinical significance.ResultsMDRG expression was significantly higher in AML patients than in the controls， and higher in relapsed/refractory AML patients than in those newly diagnosed or in complete remission. The gene expression was significantly lower in nonresistant patients than in resistant ones. Complete remission (CR) rate of nonresistant patients was higher than resistant ones (χ2=8.324-49.630，P<0.01).ConclusionMDRG overexpression is significantly associated with clinical multidrug resistance and prognosis， and it is one of the indicators for predicting the prognosis of AML. ［KEY WORDS］leukemia， myeloid; multidrug resistanceassociated proteinsmdr1; drug resistance， neoplasm 國內(nèi)外研究證明，多藥耐藥基因（mdr1）的存在及表達(dá)是產(chǎn)生多藥耐藥（MDR）的主要機(jī)制。本文應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RTPCR）技術(shù)檢測了65例急性髓細(xì)胞白血病（AML）病人、27例非白血病病人和健康人的mdr1基因表達(dá)水平，分析mdr1基因表達(dá)水平與臨床耐藥的關(guān)系。 1 材料和方法 1.1 細(xì)胞系與細(xì)胞培養(yǎng) K562/A02由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液學(xué)研究所惠贈，用阿霉素（ADM）誘導(dǎo)K562細(xì)胞建立的多藥耐藥細(xì)胞株[1]，具有典型的MDR表型。K562/A02細(xì)胞在培養(yǎng)過程中加1 ng/L的阿霉素，使用前3 d撤藥。 1.2 病人及分組 根據(jù)白血病診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]，選擇急性髓細(xì)胞白血病(AML)病人65例，男39例（年齡18～63歲），女26例（年齡22～59歲），中位年齡34.2歲。其中初診組（AMLP）38例，完全緩解（CR）組(AMLC)14例，復(fù)發(fā)難治組(AMLR)13例；M0和M1各1 例，M219例，M315 例，M414 例，M59例，M62例，M71例，雜合型白血病（HAL）3例。對照組27例，其中男16例（年齡19～52歲），女11例（年齡15～46歲），中位年齡30.9歲，包括健康人15例、缺鐵性貧血病人10例、特發(fā)性血小板減少性紫癜病人2例。15例健康人取外周血，余均取骨髓。病人為青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院及聊城市人民醫(yī)院住院病人。 臨床耐藥診斷標(biāo)準(zhǔn)：①對一線方案誘導(dǎo)治療2個療程無效；②第1次緩解后6個月內(nèi)復(fù)發(fā)；③第1次緩解后6個月以上復(fù)發(fā)經(jīng)誘導(dǎo)治療無效；④2次或2次以上復(fù)發(fā)。 1.3 半定量RTPCR 細(xì)胞總RNA的提取：用TRIzol提取細(xì)胞總RNA。經(jīng)MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶合成cDNA，以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物加dNTPs、PCR Buffer、mdr1引物進(jìn)行PCR，取PCR產(chǎn)物定量10 μL 擴(kuò)增產(chǎn)物，25 g/L瓊脂糖凝膠電泳，灌膠前加EB（1 mL 1×TAE 加1 μL EB），75 V，30～60 min，紫外線燈下觀察并照相，用Kodak Digital Science 1D Image Analysis Software及GD1數(shù)字化凝膠成像分析儀掃描，計算mdr1基因與βactin的比值。 1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用醫(yī)學(xué)統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 12.0處理，結(jié)果用±s表示，數(shù)據(jù)間比較用F檢驗及χ2檢驗。 2 結(jié)果 2.1 AML病人mdr1基因的表達(dá) AMLP組、AMLC組、AMLR組和對照組mdr1基因表達(dá)值分別為0.78±0.76、0.54±0.45、1.64±1.75、0.20±0.13，AML病人mdr1基因表達(dá)值高于對照組，且AMLR組高于AMLP組、AMLC組，差異有顯著性(P<0.001)。見圖1。 圖1 mdr1基因表達(dá)的RTPCR檢測 ①Marker；②AMLP；③AMLR；④AMLC；⑤AMLM5；⑥Normal；⑦K562/A02；⑧K562 根據(jù)對照組和AML各組mdr1基因在不同組別的表達(dá)，將mdr1/βactin的比值≥1.0定為mdr1基因陽性表達(dá)，對照組mdr1與βactin比值均<0.1，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)，AMLR組mdr1基因陽性表達(dá)率顯著高于AMLP組和AMLC組，差異有顯著性（χ2=9.578、8.324，P<0.05）。見表1。表1 各組AML病人mdr1基因陽性表達(dá)組別n陽性例數(shù)陽性率AML病人臨床耐藥組mdr1基因陽性表達(dá)率顯著高于非臨床耐藥組，差異有顯著性（χ2=32.42，P<0.01），CR率非臨床耐藥組顯著高于臨床耐藥組，差異有顯著性（χ2=49.63，P<0.01）。見表2。 表2 AML病人mdr1基因表達(dá)與臨床耐藥的關(guān)系組 別nmdr1陽性(例)表達(dá)率(χ%)CR(例)CR率(χ%)臨床耐藥251768.0416.0非臨床耐藥40410.03895.0

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