作者：羅志謀，金曉龍，謝蘊(yùn)，潘玉林，浦文蘭，蔡沛然，洪亮

【摘要】 目的 探討大腸癌中增殖細(xì)胞核抗原(Ki-67)和胎盤型谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST-Pi)、拓?fù)洚悩?gòu)酶-Ⅱ(TOPO-Ⅱ)及P-糖蛋白(Pgp)耐藥基因的表達(dá)及臨床意義。 采用即用型免疫組化微波加熱法，對(duì)170例大腸癌中Ki-67和GST-Pi、TOPO-Ⅱ、Pgp耐藥基因的檢測(cè)。結(jié)果 (1)170例大腸癌中Ki-67和GST-Pi、TOPO-Ⅱ、Pgp的陽性表達(dá)率分別為56.47%和67.05%、44.11%、19.41%。(2)大腸癌中Ki-67的陽生率與GST-Pi、TOPO-Ⅱ陽性表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論 部分大腸癌患者的體內(nèi)存在多向耐藥基因，或增殖活性高的大腸癌具有介導(dǎo)癌細(xì)胞內(nèi)原發(fā)存在對(duì)GST-Pi、TOPO-Ⅱ和Pgp所介導(dǎo)的抗癌藥物的耐藥基因。因此，在化療前對(duì)大腸癌中進(jìn)行Ki-67與耐藥基因的檢測(cè)，有助于預(yù)后判斷與選擇合理聯(lián)合用藥，提高療效與存活率，延長(zhǎng)生存期，具有臨床實(shí)際意義。 【關(guān)鍵詞】 大腸癌；增殖細(xì)胞核抗原；耐藥基因；免疫組化 【Abstract】 Objective To probe into the expression and clinical significance of nucleus antigen in proliferation cell (Ki-67) and drug resistance gene as glutathione-s-transferase-pi (Gst-Pi)，topoisomerase Ⅱ(TOPO-Ⅱ，P-glycoprotein(Pgp) in large bowel carcinoma.Methods To test and analyze the ki-67 and drug resistance gene as GsT-pi、Topo Ⅱ，Pgp in 170 cases of large bowel carcinoma by instant microwave heat-immunohistochemistry.Results (1)Positive expression rates of Ki67，GST-Pi，Topo-Ⅱ，Pgp in 170 cases of large bowel carcinoma were 56.47%，67.05%，44.11% and 19.41%，respectively.(2)re were some correlations among the positive expression of Ki-67，GsT-Pi，and Topo-Ⅱ in large bowel carcinoma (P<0.05).Conclusion There are presence of multidrug resistance genes in some patients of large bowel carcinoma or resistance to GsT-Pi，Topo-Ⅱ，PgP existed in the fast proliferation cancer cell primarily.So before starting the chemotherapy，determination of Ki-67 and the above resistance gene may be helpful for clinicians to select a rational regime and dosage to impove the curative effect and prolong the life span. 【Key words】 large bowel carcinoma；necleus antigen in proliferation cell；resistame gane；immunohistochemistry 大腸癌具有較高的發(fā)病率和死亡率，在上海地區(qū)的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，我國(guó)大腸癌占惡性腫瘤中的第四或第五位［1］。，對(duì)大腸癌的主要是手術(shù)與化療，臨床醫(yī)生多采用聯(lián)合方案或憑主觀判斷進(jìn)行用藥。最近有發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞內(nèi)耐藥蛋白往往是導(dǎo)致臨床化療失敗的主要原因之一［2］。本文研究通過檢測(cè)大腸癌化療前腫瘤細(xì)胞的增殖活性與耐藥性，旨在判斷預(yù)后與為防止多種耐藥性的誘導(dǎo)方面提供一定的臨床病理依據(jù)。 1 材料與方法 1.1 材料 收集我院病理科2003年1月～2004年12月外科手術(shù)切除的大腸癌標(biāo)本170例，術(shù)前均未做過化療，男83例，女87例，年齡29～88歲，平均62.85歲。均經(jīng)HE病理診斷明確。大腸癌的分化程度：高分化管狀腺癌42例，中分化管狀腺癌70例，低分化管狀腺癌29例，粘液腺癌26例，印戒細(xì)胞癌3例。大腸癌的臨床分期：A期25例，B期55例，C期82例，D期8例。 1.2 方法 標(biāo)本石蠟連續(xù)切片4張，厚3μm，分別免疫組織化學(xué)即用型二步染色。檢測(cè)藥盒購自上海長(zhǎng)島抗體診斷試劑有限公司，單克隆抗體。Ki-67陽性者提示腫瘤細(xì)胞的增殖活性增強(qiáng)，惡性程度高，預(yù)后差；GST-Pi陽性者提示腫瘤細(xì)胞對(duì)GST-Pi所介導(dǎo)的抗癌藥物順鉑有耐藥傾向；TOPO-Ⅱ陽性患者提示腫瘤細(xì)胞對(duì)拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑有耐藥傾向；多藥耐藥(MDR)基因產(chǎn)物P-糖蛋白(Pgp)的陽性者提示腫瘤細(xì)胞對(duì)長(zhǎng)春新堿類和阿霉素有耐藥傾向。并用胃癌腫瘤細(xì)胞對(duì)Ki-67與GST-Pi、TOPO-Ⅱ、Pgp標(biāo)記陽性表達(dá)作為陽性的對(duì)照組。 1.3 結(jié)果判斷 在光鏡觀察陽性細(xì)胞呈棕褐色細(xì)胞顆粒狀。Ki-67定位于細(xì)胞核內(nèi)(圖1)，GST-Pi定位于細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)(圖2)，TOPO-Ⅱ定位于細(xì)胞核內(nèi)(圖3)，MDR定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜上(圖4)。根據(jù)腫瘤細(xì)胞的陽性數(shù)及其染色反應(yīng)的深淺進(jìn)行判定，采用高倍視野隨機(jī)計(jì)數(shù)500個(gè)腫瘤細(xì)胞所占的比例，定位3級(jí)，未見陽性表達(dá)或陽性細(xì)胞數(shù)<5%為陰性(-)，5%≤陽性細(xì)胞<30%為陽性(+)，30%≤陽性細(xì)胞<60%為中度陽性(++)，≥60%的為強(qiáng)度(+++)。 1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用卡方檢驗(yàn)，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2 結(jié)果 2.1 Ki-67與3種(GST-Pi、TOPO-Ⅱ、Pgp)耐藥基因在大腸癌中檢測(cè)結(jié)果 本組大腸癌標(biāo)本中，Ki-67的陽性表達(dá)率為56.47%(96/170)，其表達(dá)增殖狀態(tài)以陽性居多；GST-Pi的陽性表達(dá)率為67.06%(114/170)，以強(qiáng)陽性表達(dá)居多；TOPO-Ⅱ陽性表達(dá)率為44.12%(75/170)，以強(qiáng)陽性表達(dá)居多；但Pgp的陽性表達(dá)只有19.41%(33/170)，并以弱陽性居多。說明大腸癌中Ki-67陽性表達(dá)與GST-Pi、TOPO-Ⅱ的陽性表達(dá)呈正相關(guān)(r值分別是0.974，0.980，P<0.05)；但Ki-67的陽性表達(dá)與Pgp的陽性表達(dá)不相關(guān)(r值為0.784，P＞0.05)，提示大腸癌中Ki-67高表達(dá)陽性率的細(xì)胞腫瘤易對(duì)GST-Pi和TOPO-Ⅱ產(chǎn)生耐藥性。見表1。

表1 大腸癌中Ki-67和GST-Pi、TOPO-Ⅱ及Pgp的陽性檢測(cè)結(jié)果

2.2 Ki-67和GST-Pi、TOPO-Ⅱ及Pgp的表達(dá)在組織學(xué)類型中關(guān)系 本組大腸癌中以中高分化的管狀腺癌多見。大腸癌對(duì)Ki-67和3種(GST-Pi、TOPO-Ⅱ、Pgp)耐藥基因均有不同程度的陽性表達(dá)，與不同組織類型大腸癌的陽性表達(dá)呈正相關(guān)(r值分別為0.988、0.993、0.984、0.958，P<0.05)。見表2。

表2 Ki-67和GST-Pi、TOPO-Ⅱ、Pgp表達(dá)與組織類型關(guān)系

2.3 大腸癌患者年齡構(gòu)成分布與Ki-67和3種(GST-Pi、TOPO-Ⅱ、Pgp)耐藥表達(dá)關(guān)系 本組大腸癌中80～89歲12例(7.06%)；以70～79歲病例數(shù)最多，為58例(34.11%)；60～69歲45例(26.47%)；50～59歲30例(17.65%)；40～49歲20例(11.76%)；29～39歲5例(2.94%)。報(bào)道中在我國(guó)大腸癌的發(fā)病年齡高峰期為30～50歲，國(guó)外為50～60歲［3］。本組60～79歲的病例占66.47%(113/170)。大腸癌患者各年齡段對(duì)Ki-67和3種(GST-Pi、TOPO-Ⅱ、Pgp)耐藥基因均呈不同程度的陽性表達(dá)。年齡與Ki-67、GST-Pi、TOPO-Ⅱ的陽性表達(dá)呈正相關(guān)(r值分別為0.944、0.936和0.926，P<0.05)；耐藥與Pgp的陽性表達(dá)不相關(guān)(r值為0.350，P<0.05)。見表3。