作者：蘇承武，唐永梅，蔡 捷，唐東平

【摘要】 目的 探討ATP-生物熒光法（ATP-TCA系統）在消化道惡性實體腫瘤體外藥物敏感性試驗中的。 取肝癌、胃癌、直腸癌、結腸癌共39例患者的手術標本，應用ATP-TCA系統方法做藥物敏感性試驗。結果 ATP-TCA的可評估率為92.31%；6種試驗用化療藥物的敏感率分別為：絲裂霉素12.50%，紫杉醇23.33%，順鉑30.77%，羥喜樹堿42.31%，5-氟尿嘧啶51.85%，表阿霉素61.54%。結論 ATP-生物熒光法可用于消化道惡性實體腫瘤化療藥物的篩選。 【關鍵詞】 ATP-生物熒光法；惡性實體腫瘤；化療 【Abstract】 Objective To study the application of the ex vivo ATP-bioluminescence assay(ATP-TCA) in the chemotherapy of digestive tract malignant solid tumor.Methods surgical specimens of 39 patients，including primary liver cancer，gastric carcinoma，colic and rectal carcinoma，were tested by the ATP-TCA.Results Evaluable test results were achieved in 36 of 39 patients，the evaluability rate was 92.31%.The sensitive rates of mitomycin C (MMC)，paclitaxel (TXL)，cisplatin (CDDP)，camptothece (HCT)，5-fluoruracil (5-FU)，epirubicin (EPI)，was 12.50%，23.33%，30.77%，42.31%，51.85%，61.54%，respectively.Conclusion ATP-TCA is a good option in the chemotherapeufic agents screening of digestive duct malignant solid tumor. 【Key words】 ATP-bioluminescence assay；malignant solid tumor；chemotherapy 化學藥物是消化道惡性實體腫瘤治療的重要手段之一，體外化療藥物敏感性試驗是實現個體化治療，提高臨床治療效率的重要方法，在本中，我們以對消化道惡性實體腫瘤有較高評估率的三磷酸腺苷生物熒光法（ATP-TCA），應用于39例消化道惡性實體腫瘤化療藥物的篩選，以期為臨床化療提供依據。三磷酸腺苷（ATP）是活細胞的基本能量單位，當細胞的代謝受損時，ATP合成下降，細胞死亡時受酶的作用，ATP迅速水解消失，ATP水平與活細胞數量呈正相關，因此測定細胞內源性ATP含量，可反映細胞活性和活細胞的數量。ATP體外藥敏試驗的原理是細胞內ATP與熒光素—熒光素酶復合物作用產生可測熒光，檢測熒光值出化療藥物對腫瘤細胞的抑制作用［1，2］。 1 資料與方法 1.1 一般資料 收集2003年3月～2004年12月在我院住院的患者39例，男36例，女3例，肝細胞癌22例，胃癌8例，直腸癌5例，結腸癌4例，均為手術標本。 1.2 材料 ATP-TCA診斷試劑盒（包括改良PRMI 1640培養基）由北京金紫晶生物技術有限公司提供。MPL-1型自發光儀為德國Berthold公司產品。化學藥物包括絲裂霉素（MMC，日本協和發酵株式會社）、紫杉醇（TXL，澳大利亞FH科貿有限公司）、羥喜樹堿（HCT，廣西東蘭制藥廠）、順鉑（CDDP，深圳市生物谷醫藥有限公司）、5-氟尿嘧啶（5-FU，南通制藥總廠）、表阿霉素（EPI，浙江海政制藥）。 1.3 方法 ATP-TCA操作步驟（按診斷試劑盒使用說明操作）：取腫瘤組織標本，在無菌條件下，剝離腫瘤組織的纖維、脂肪及結締組織，然后用剪刀將腫瘤組織盡可能剪成小碎塊，過200目鋼網后放入腫瘤組織解離酶液中，置37℃、5%CO2、95%濕度下孵育1.5~3h。在4℃、1500r/min條件下，離心20min，棄上清液，重復兩次，制成細胞懸液，取35μl用臺盼藍染色，倒置顯微鏡下計數，并觀察細胞活性。調整細胞至20～40萬個/ml濃度，以每孔0.1ml接種至96孔培養板內。按400%、200%、100%、50%、25%、和12.5%的血漿峰值濃度，將藥物加入培養孔中，每個濃度3個平行孔和對照孔，于5%CO2、37℃、95%濕度下孵育6～7天。加入腫瘤細胞ATP提取液0.1ml，混勻后室溫下15min，取0.05ml混合液置微板熒光分析儀檢測。 1.4 ATP-TCA結果評估 1.4.1 應用ATP-TCA的條件 （1）檢測的標本必須經細胞學和病證實為惡性腫瘤，且混懸液中腫瘤細胞數>20%；（2）培養板MO對照必須可觀察；（3）藥物活性的劑量反應曲線必須可觀察；（4）平行孔間CV值<20%。 1.4.2 ATP-TCA藥物敏感和耐藥的解讀 （1）藥物敏感定義：高AUIC（抑制曲線下面積）值，低IC90、IC50和SI（敏感指數）值，和高TGI（腫瘤生長抑制）值（表示腫瘤細胞生存100%抑制）。（2）藥物耐受定義：低AUIC值，高IC90、IC50和SI值，和低TGI值（特別是在高測試濃度和弱劑量反應時）。（3）敏感度分級，定義為：強敏感：IC90≤100% TDC（測試腫瘤藥物濃度）和IC50≤25% TDC。部分敏感：IC90>100% TDC和IC50≤25% TDC。弱敏感：IC90≤100% TDC和IC50>25% TDC。耐藥：IC90>100% TDC和IC50≤25% TDC。 2 結果 在收集的39例患者中，36例具有可評估性，總可評估率為92.31%。ATP-TCA 試驗結果顯示不同個體對不同的化療藥物具有不同的敏感性和異質性，以下4個圖為示范的肝癌（見圖1）、胃癌（見圖2）、直腸癌（見圖3）、結腸癌（見圖4）病例。圖1示羥喜樹堿高度敏感，圖2示表阿霉素高度敏感、絲裂霉素中度敏感；圖3示5-氟尿嘧啶高度敏感、順鉑中度敏感；圖4示紫杉醇高度敏感、5-氟尿嘧啶中度敏感。本研究的腫瘤生長抑制率的劑量—效應曲線結果，顯示不同患者對不同藥物表現出程度不同的敏感性和耐受性。在所有測試的化療藥物中，它們的敏感率排序如下：表阿霉素（EPI）61.54%，5-氟尿嘧啶（5-FU）51.85%，羥喜樹堿（HCT）42.31%，順鉑（CDDP）30.77%，紫杉醇（TXL）23.33%，絲裂霉素（MMC）12.50%。其中表阿霉素的敏感率最高，絲裂霉素的敏感率最低，提供的報告結果有待于臨床隨訪和評估。