作者：薛恒躍， 王玉蘭， 于黎明， 胡 榮， 王文珍

【關鍵詞】 中藥

摘要：目的考察抗癲癇類中藥制劑中添加化學藥品苯巴比妥的檢測方法。方法建立化學官能團專屬性鑒別方法和高效液相色譜法進行初步確認，用高效液相色譜―質譜聯用技術以對照品比對做最終確認。結果與結論該法操作簡便、快速，結果準確、可靠。

關鍵詞：苯巴比妥； 中藥制劑； 薄層色譜； 高效液相色譜； 高效液相色譜質譜

Determination Methods of Phenobarbital in Traditional Chinese Medicinal Preparation

Abstract:ObjectiveTo identify a method for the test of phenobarbital mixed in traditional Chinese medicine(TCM)preparations.MethodsChemical method and HPLC method were established for the determination of the organic extract of TCM preparations， and phenobarbital was last identified by comparation of samples with standards in HPLC-MS.Results and ConclusionThe samples were determined and contained phenobarbital.The method is simple， accurate and reliable.

Key words:Phenobarbital; Traditional Chinese medicine(TCM) preparations; TLC; HPLC; HPLCMS

抗癲癇類藥物目前的種類很多。其中苯巴比妥類屬于苯巴比妥酸的衍生物，主要作用于中樞神經系統的不同層面，具有非特殊性抑制作用。一些自制中藥制劑為增加療效非法添加了苯巴比妥類治療藥物，由于對其劑量沒有進行控制，臨床應用時易產生肝、腎毒性，給患者造成傷害甚至危及生命。因此建立一個有效的方法檢測此類藥物，以便及時查處制假行為是十分必要的。本文對檢測方法操作進行了探討。

1 儀器與試藥

儀器：Agilent 1100型高效液相色譜儀(二級管陣列檢測器)；Agilent 1100LC-MSD高效液相色譜―質譜聯用儀。試劑：均為分析純。苯巴比妥對照品由中國藥品生物制品檢定所提供(批號17222-200303)。樣品為個體醫療診所自制中藥制劑。

2 檢測方法

首先采用化學官能團專屬性鑒別對添加的西藥類別進行篩選，用薄層層析法進一步篩選確認，然后采用高效液相色譜法對樣品與對照品色譜峰的保留時間進行比對，并在二級管陣列檢測器上測定色譜峰的純度及紫外圖譜的相似性。最終用高效液相色譜―質譜聯用技術確定具體藥物的成分。

2.1 樣品提取取樣品10粒傾取內容物，加氯仿30 ml，超聲處理15 min，濾過，濾液中加入活性炭0.5 g，搖勻，過濾。濾液水浴上蒸至近干，得白色粉末(測試樣品)。

2.2 專屬性化學鑒別反應取測試樣品10 mg，加硫酸2滴與亞硝酸鈉約5 mg，搖勻，溶液生成橙黃色沉淀，漸變橙紅色。證明測試樣品可能屬于苯環取代基的苯巴比妥類藥物［1］。

2.3 薄層層析取測試樣品1 mg，加甲醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取苯巴比妥對照品1 mg，加甲醇1 ml使溶解，作為對照品溶液。分別吸取上述兩種溶液各5 μl，點于同一硅膠GF254薄層板上。分別用正己烷氯仿甲醇(5∶3∶1)、氯仿甲醇(9∶1)、氯仿環己烷甲醇(5∶4∶1)3種不同的系統展開，檢視。結果表明：測試樣品色譜圖中均有一暗紫色的主斑點，與苯巴比妥對照品色譜中相應位置上的斑點顏色相一致。

2.4 高效液相色譜法測定

2.4.1 儀器與色譜測定條件色譜柱：Diamonsil C18，4.6 mm×200 mm，5 μm；流動相：甲醇10 mmol/L磷酸二氫鉀(58∶42)；檢測波長：210 nm；柱溫：30.0℃；進樣量：10 μl［2］。

2.4.2 操作方法取測試樣品1 mg，置10 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取苯巴比妥對照品1 mg，置10 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。上述兩種溶液分別用微孔濾膜(0.2 μm)過濾，進樣，即得。

2.4.3 結果測試樣品色譜圖中主峰保留時間與苯巴比妥對照品色譜峰保留時間一致，而且兩者在色譜峰各位置處的紫外圖譜均相疊。見圖1~2。

圖1 供試品高效液相色譜圖

圖2 對照品高效液相色譜圖

2.5 高效液相色譜―質譜聯用測定

2.5.1 儀器與色譜測定條件色譜柱：ZobaxC18 2.1 mm×250 mm，5 μm；干燥氣體流量：10 L/min；溫度：350℃；噴霧壓力：25～30 Psi。

2.5.2 供試品溶液制備操作方法同2.4.2操作方法。

2.5.3 結果對測試樣品中保留時間為11.7 min的峰進行ESI-MS分析，結果顯示，在正離子模式下質譜圖上出現準分子離子峰［M＋H］＋(m/E 233.3)，加合離 子［M＋Na］＋(m/E 255.3)及［IM＋H＋H2O］＋(m/E 484.4)；在負離子模式下質譜圖上顯示準分子離子峰［M-H］-(m/E 231.3)，加合離子［M＋Cl］-(m/E267.1)。測試樣品顯示與苯巴比妥對照品分子量及峰位相同的分子離子碎片峰，證實樣品中添加了苯巴比妥。見圖3~4。

圖3 供試品質譜圖

圖4 對照品質譜圖

3 討論

中藥制劑中非法添加化學藥品是近年來出現在中藥制劑領域中的一種高科技制假手段，這種手段具有隱蔽性，但對患者的身體具有傷害性，是藥品質量管理中的薄弱環節。由于缺乏相應的檢測手段和方法，制約了藥品監督管理部門對制假者的及時查處工作。本文嘗試并研究了抗癲癇類中成藥中添加化學藥品苯巴比妥的檢測方法。用本文的實驗思路和方法，可以進一步擴大研究的領域和范圍，及時掌握和監督市售更多中藥制劑的品種。致謝：高效液相色譜―質譜由大連理工大學國家精細化工重點實驗室完成。

參考文獻：

［1］ 國家藥典委員會.中國藥典，Ⅱ部［S］.北京:化學工業出版社，2000:362.

［2］ 劉文英，馮 芳，李好枝，等.藥物分析，第5版［M］.北京:人民衛生出版社，2003:95.