【摘要】 目的：研究自制吲達帕胺凍干口腔崩解片和市售吲達帕胺片在Beagle犬體內的藥物動力學行為及其相對生物利用度。方法：6只Beagle犬，隨機分為兩組，分別單劑量口服自制吲達帕胺凍干口腔崩解片和市售吲達帕胺普通片，劑量均為5.0mg。1周后交叉給藥。采用HPLC法測定給藥后不同時間的血藥濃度。結果：供試制劑自制吲達帕胺凍干口腔崩解片和參比制劑吲達帕胺普通片的主要藥動學參數：達峰時間tmax分別為(1.59±0.04)h和(2.71±0.32)h，達峰時藥物濃度ρmax分別為(6.10±0.32)和(5.89±0.44)μg·mL-1，t1/2分別為(15.04±0.48)h和(14.65±0.73)h，AUC0∞分別為(89.66±8.34)和(67.58±2.56)μg·h·mL-1。結論:統計學分析結果表明自制吲達帕胺凍干口腔崩解片的生物利用度要高于市售吲達帕胺普通片。

【關鍵詞】 吲達帕胺;藥物動力學;生物等效性;Beagle犬

【ABSTRACT】 Objective:To study the relative bioavailability and pharmacokinetic of Indapamide lyophilized oral disintegrating tablets and indapamide tablets in beagle dogs.Methods:The Indapamide lyophilized oral disintegrating tablets(test)or Indapamide tablets(reference)were orally administered to 6 beagle dogs at a dosage of 5.0mg.The crossover dosing was taken in one week after the first single dose.The Indapamide concentrations in the blood samples were determined by HPLC.Results:The main pharmacokinetic parameters of the test and reference tablets were as follows:tmax(1.59±0.04) and (2.71±0.32)h，ρmax(6.10±0.32) and (5.89±0.44)μg·mL-1，t1/2(15.04±0.48) and (14.65±0.73)h，AUC0∞(89.66±8.34) and (67.58±2.56)μg·h·mL-1.Conclusion:The results showed that the Indapamide lyophilized oral disintegrating tablets increased relative bioavailability.

【KEY WORDS】 Indapamide，Pharmacokinetics，Bioequivalence，Beagle dogs

吲達帕胺(Indapamide)為磺胺的衍生物，具有吲哚環結構，臨床上廣泛用于治療中度高血壓，但市售吲達帕胺片給長期臥床或吞咽困難的病人服用帶來不便。本試驗采用冷凍干燥法[1，2]制備了吲達帕胺凍干口腔崩解片，以提高藥物的生物利用度及病人服用的順應性。以市售普通片為參比制劑，進行吲達帕胺凍干口腔崩解片在Beagle犬體內的藥動學和生物等效性評價。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Lab Alliance model 520液相色譜儀(美國Lab Alliance公司);CT ALPHA 24/LSC冷凍干燥儀(德國Christ公司);PEG6000(醫藥級，美國陶氏)。

供試制劑為自制吲達帕胺凍干口腔崩解片(規格每片2.5mg);參比制劑為吲達帕胺普通片(規格每片2.5mg，天津力生制藥有限公司，批號：0605020);吲達帕胺對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：102570002);乙腈、甲醇均為色譜純。

Beagle犬6只(上海新岡試驗動物場)，雌雄各半，體質量(10.2±1.5)kg。

1.2 方法

1.2.1 吲達帕胺凍干口腔崩解片的制備

取吲達帕胺原料藥2g，用少量乙醇溶解，緩慢加入到20g熔融狀態的PEG6000中，邊加熱邊攪拌，待乙醇揮發完全，快速冷卻，干燥器放置過夜，即得吲達帕胺PEG6000固體分散體(1∶10);另取吲達帕胺PEG6000固體分散體5.5g，水解明膠0.5g，麥芽糖糊精25g，加水溶解并定容至100mL，定量分裝于0.5mL的模具中，冷凍干燥，即得吲達帕胺凍干口腔崩解片(規格每片2.5mg)。

1.2.2 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18(250mm×4.6mm，5μm)

流動相：磷酸鹽溶液(2g磷酸二氫鉀，3mL磷酸，3.5mL三乙胺溶于1000mL水)乙腈甲醇(55∶40∶5);流速：1.0mL·min-1;柱溫：35℃;檢測波長：240nm;靈敏度：0.01AUFS，進樣量20μL，見圖1。2009年10月王 金等：吲達帕胺凍干口腔崩解片在Beagle犬體內藥物動力學研究第5期2009年10月河北北方學院學報(醫學版)第5期

圖1 高效液相色譜圖

A 空白全血;B 空白全血加吲達帕胺對照品(5.00 g·mL-1);

C Beagle犬口服5.0mg吲達帕胺后2h全血樣品。Ⅰ吲達帕胺，Ⅱ吲達帕胺代謝物

1.2.3 全血樣品的處理[3] 精密量取全血樣品0.4mL，置10mL具塞離心管中，加入無水乙醚4mL，漩渦3min。于1 000×g離心15min，精密量取3mL上清液至另一離心管中，40℃水浴中以氮氣吹干，將殘留物用100μL流動相漩渦振蕩溶解，離心5min(1 000×g)，取上清液20μL，進樣分析。

1.2.4 標準曲線的繪制 取空白全血0.4mL 6份，分別加入不同濃度的系列標準溶液50μL，使全血藥物濃度分別為0.125、0.5、1.0、5.0、10.0、12.5μg·mL-1，按“1.2.3”項下全血樣品處理后進樣20μL，記錄色譜峰面積。以吲達帕胺的峰面積為縱坐標，質量濃度(μg·mL-1)為橫坐標，按最小二乘法進行回歸，得回歸方程為：ρ=19789X+1283.6，r=0.9992(n=6)，線性范圍0.125～12.5μg·mL-1。

1.2.5 回收率與精密度試驗

取空白全血配制0.250、1.25、5.00μg·mL-13個質量濃度的樣品，按“1.2.3”同法處理。并測定其回收率和日內、日間精密度，結果見表1和表2。結果表明，回收率與精密度符合要求。表1 全血中吲達帕胺的回收率測定表2 吲達帕胺日內、日間精密度測定

1.2.6 提取回收率 精密量取空白全血0.4mL于10mL具塞離心管中，制成0.250、1.25、5.00μg·mL-13個質量濃度的全血樣品，按“1.2.3”處理記錄色譜圖及色譜峰面積;另取一批離心管，不加空白全血，其余操作同上平行進行，記錄色譜圖和峰面積，計算提取回收率。結果分別為68.21%(RSD=5.26%)、81.46%(RSD=3.84%)和79.65%(RSD=4.27%)。

1.2.7 給藥方法及血樣采集 Beagle犬6只，隨機分為2組，每組3只，按照雙周期交叉試驗方法設計給藥方案，給藥前一周內禁服其它藥物，試驗前禁食12h，自由飲水，給藥后4h統一進食。分別口服參比制劑吲達帕胺普通片(相當于主藥5.0mg)或供試制劑自制吲達帕胺凍干口腔崩解片(相當于主藥5.0mg)，給藥前采血作為空白對照，給藥后分別于0.5h、1.0h、1.5h、2.0h、4.0h、6.0h、8.0h、10.0h、12.0h、16.0h、24.0h、36.0h、48.0h于股靜脈采血，一周后交叉給藥，同時間點采血。血樣用肝素抗凝，于-20℃保存。

2 結果

2.1 全血樣品測定及藥動學參數 6只Beagle犬單劑量口服自制吲達帕胺凍干口腔崩解片和吲達帕胺普通片后，平均血藥濃度時間曲線見圖2。實驗數據采用統計矩法[4]分析，以梯形法計算血藥濃度時間曲線下面積(AUC048)，根據對數血藥濃度時間曲線末端直線部分的斜率求算消除半衰期，ρmax和tmax為實測值，藥動學參數見表3。表3 吲達帕胺凍干口腔崩解片和吲達帕胺片藥動學參數

2.2 生物等效性分析 將受試制劑、參比制劑的AUC0∞和ρmax分別作對數轉換，進行方差分析及雙單側t檢驗，計算90%置信區間。結果表明，自制吲達帕胺凍干口腔崩解片生物利用度比參比制劑吲達帕胺普通片高，相對生物利用度為132.6%，結果見表4。表4 雙單側檢驗結果

3 討論

吲達帕胺在體內分布廣泛，在血液中與紅細胞的結合率為80%，與血漿蛋白的結合率為76%[5]。所以，在測定體內吲達帕胺時通常采用的是全血提取法，這樣可以避免蛋白沉淀法帶來的損失。

考察不同溶劑提取全血中吲達帕胺的回收率，結果發現二氯甲烷和乙酸乙酯的提取回收率較低(僅為35%左右)，氯仿的提取回收率雖較高，但雜質很多，影響測定;而以10倍乙醚提取，雜質少且提取回收率高，故采用乙醚提取全血中的吲達帕胺。

固體分散體能夠提高難溶性藥物溶出速率和溶解度，提高藥物的吸收和生物利用度。本試驗將吲達帕胺與PEG6000形成固體分散體后再制得吲達帕胺凍干口腔崩解片，藥物溶出速率加快，10min體外溶出量即大于標示量的65%[6]。本試驗進一步考察藥物在Beagle犬體內的動力學過程，非隔室模型藥動學參數計算表明：自制吲達帕胺凍干口腔崩解片與市售吲達帕胺相比AUC增大，生物利用度提高;tmax提前，表明凍干口腔崩解片有速釋效果;而ρmax無顯著變化，表明藥物不會因速釋而產生血藥濃度驟然升高所引起的不良作用。自制口崩片和市售制劑的半衰期分別為(15.04±0.48)h和(14.65±0.73)h，與文獻報道的14～18h相符。

自制吲達帕胺凍干口腔崩解片置于口腔內十幾秒即可溶解隨唾液吞咽，質量可控，穩定性良好[6]，可以替代普通片用于長期臥床或有吞咽困難高血壓患者的治療。