【摘要】 目的：通過對干化學方法和濕化學方法測定乳糜血標本總膽紅素的比較，尋找適合測定乳糜血標本總膽紅素的方法。方法：12份乳糜血標本分別用干化學方法和濕化學方法測定血清總膽紅素。結果：用干化學方法較濕化學方法測定乳糜血標本總膽紅素含量低。結論：干化學方法較濕化學方法更適合對乳糜血標本總膽紅素測定。

【關鍵詞】 乳糜血;總膽紅素;干化學;濕化學

臨床生化檢測中經常有乳糜血標本。乳糜血標本中乳糜微粒造成血漿顏色呈乳白色或混濁狀。臨床生化采用濕化學方法測定的總膽紅素(TBIL)、白蛋白、肌酐等生化指標結果常受乳糜血干擾，常呈假性升高，導致檢測結果失效，不能為臨床提供真實可靠數據。本實驗通過對干化學方法和濕化學方法測定乳糜血標本TBIL的比較，尋找較適合測定乳糜血標本TBIL的方法。

1 材料與方法

1.1 材料 12份臨床急診病人乳糜血標本。首先用干化學方法檢測全部乳糜血標本中TBIL含量，然后在0.5 h內采用濕化學方法檢測全部標本中TBIL含量。

1.2 儀器與試劑 干化學方法測定儀器是美國強生VIPROS-350，試劑由美國強生公司提供。濕化學方法采用的儀器是日東芝TBA-120FR，試劑由上海復星長征醫學科學有限公司提供。兩種方法均嚴格按說明書進行操作。

1.3 統計方法 用配對設計資料的秩和檢驗比較兩組數據的差異，取α=0.05，單側T檢驗。

2 結果

用干化學方法較濕化學方法測定乳糜血標本TBIL含量低，兩組比較差異有統計學意義(P<0.01)。采用干化學方法測定的12份乳糜血標本的血清TBIL值全部都在參考值范圍內，而采用濕化學方法測定的值全部都假性升高，且高于參考值范圍2～20倍。詳見表1。

3 討論

乳糜血血漿顏色呈乳白色或混濁狀，表示血液中含有大量脂肪。乳糜血中乳糜微粒是由TG、CH、磷脂及載脂蛋白共同組成的載脂蛋白。正常人血漿中的表1 干化學和濕化學方法測定TBIL結果乳糜微?？崭?2 h后就被完全清除。乳糜可造成血漿渾濁，脂濁使血清分布呈現非均一性，嚴重影響常規采用可見光及紫外光光度法中濕化學方法測定TBIL、白蛋白、肌酐等生化指標結果的可靠性，導致結果常成假性升高，不能為臨床提供真實可靠數據。本實驗測定12份乳糜血標本TBIL含量，干化學方法較濕化學方法測定乳糜血標本TBIL含量低，差異有統計學意義。采用干化學方法測定的12份乳糜血標本的血清TBIL值全部都在參考值范圍內，而采用濕化學方法測定的值全部都假性升高，且高于參考值范圍2～20倍，因此認為干化學方法較濕化學方法更適合對乳糜血標本TBIL測定。

干化學方法和濕化學方法均采用可見光及紫外光光度法中的對比法[1]。干化學方法和濕化學方法測定血清TBIL反應原理一致，均為TBIL與重氮鹽(N-羥甲基硫酰)六氮磷酸重氮苯反應，生成具有相似摩爾吸光特性的偶氮膽紅素色基，其吸光峰值位于540 nm附近。干化學方法建立在一種修改的經典重氮反應的基礎上。反應在干燥的載玻片上。載玻片由5層構成，分別為干片上層、擴散層、試劑層、支持層、干片底層。濕化學方法測定血清TBIL反應試劑和血清所有成份均在一起。采用干化學方法測定TBIL時，將一滴患者樣本滴在干片上，并通過擴散層均勻分布到下面的試劑層，擴散層不僅可阻留細胞、結晶和其他小顆粒，也可以根據需要讓大分子，如蛋白質等滯留，以提高分析的特異性。因此該層可以阻留乳糜微粒等物質，起到抗乳糜微粒干擾的作用。同時當待檢樣品通過擴散層后，可以消除溶液中影響檢測反應的干擾物質。擴散層中的某些特殊物質一方面可用來掩蓋待檢樣品中的有色物質，使反射光度計的測定結果不受影響。濕化學方法測定血清TBIL反應試劑與血清所有成份在一起，因此則該反應方法不能起到抗乳糜微粒干擾的作用，這是引起濕化學方法測定乳糜血標本TBIL值偏高的主要原因。同時該反應方法不能消除溶液中影響檢測反應干擾物質以及不能掩蓋待檢樣品中的有色物質，使反射光度計的測定結果受到影響。干化學方法測定TBIL時試劑層提供用于測定膽紅素重氮反應的反射背景，其中含有用來測定膽紅素所需的所有試劑，通過重氮鹽反應，然后通過透明的支持層，在540 nm和460 nm兩個波長下測定偶氮膽紅素色基，以確定TBIL濃度。540 nm下的反射測定用于矯正光譜干涉。采用雙波長測定可以通過副波長加以修正，減少甚至消除干擾因素，提高測定準確性。而濕化學方法測定血清TBIL采用單波長(540 nm)，單波長測定易受樣品溶血、黃疸、脂濁等因素干擾，這也是干化學方法測定血清TBIL較濕化學方法準確的原因。干化學方法反應底物進入指示劑層，在這里發生顯色反應。此層包含染料或相似的指示劑，使反應產物到達指示劑層后生成了有色化合物，其顏色變化與分析物濃度成比例，被反射光檢測。由于光線不通過已經被阻留在擴散層上的潛在干擾物，從而避免了對檢測結果的干擾。因此多層的設計，不同的項目加入了特殊的試劑層，增強反應的特異性，使干化學方法具有優異的抗干擾能力。

綜上所述，干化學方法由于其獨特的反應設計可以抗血清標本乳糜的干擾，使其較濕化學方法更適合對乳糜血標本TBIL測定，因此也適合測定乳糜血中白蛋白、肌酐等生化指標。至于干化學方法是否具有完全的抗乳糜血干擾的作用，還需進一步進行臨床生化方法學的評價。