【摘要】 目的 建立測定奧美拉唑的流動注射化學發光新方法。方法 當將奧美拉唑注入到高錳酸鉀與魯米諾反應的合并流中時，可檢測到強的化學發光信號，結合流動注射技術對實驗條件進行優化。結果 在優化的實驗條件下，即混合管長度：150cm，反應介質的堿度：0.15mol/L NaOH，魯米諾的濃度：7.0×10-5mol/L，高錳酸鉀的濃度：2.0×10-5mol/L以及試劑流速：2.8mL/min，奧美拉唑濃度在2.0×10-8～1.0×10-5g/mL范圍內與相對化學發光強度具有線性關系;對濃度為1.0×10-7g/mL和1.0×10-6g/mL奧美拉唑溶液進行11次平行測定的相對標準偏差分別為1.0%和2.6%;該方法的檢出限為3×10-9g/mL。結論 該方法簡單、快速、靈敏，適用于藥物制劑中奧美拉唑的含量測定。

【關鍵詞】 奧美拉唑;化學發光;流動注射;藥物

ABSTRACT: Objective To develop a new flowinjection chemiluminescence (FICL) method for the determination of omeprazole. Methods Strong chemiluminescence (CL) signal was found generated when omeprazole was injected into the reaction mixture of KMnO4 and luminol. The experimental conditions that affected the CL reaction were optimized by using FI mode. Results Under the optimum experimental conditions (150cm of mixing tubing， 0.15mol/L NaOH， 7.0×10-5mol/L luminol， 2.0×10-5mol/L KMnO4 and 2.8mL/min of flow rate)， CL intensity was linearly related to the concentration within the range of 2.0×10-8-1.0×10-5g/mL. The detection limit was 3×10-9g/mL omeprazole， and the relative standard deviations (n=11) were 1.0% and 2.6% for 1.0×10-7g/mL and 1.0×10-6g/mL omeprazole solutions， respectively. Conclusion The proposed method is simple， rapid， sensitive， and suitable for determining omeprazole content in pharmaceutical preparations.

KEY WORDS: omeprazole; chemiluminescence; flowinjection; pharmaceutical

奧美拉唑(omeprazole)，化學名稱為5甲氧基2[[[4甲氧基3，5二甲基2吡啶基]甲基]亞硫酰基]1H苯并咪唑，是一種新型胃酸分泌抑制劑，為高效安全的抗消化道潰瘍藥物。奧美拉唑能特異性地作用于胃黏膜壁細胞， 降低胃黏膜壁細胞中H+K+ATP酶的活性從而抑制胃酸的分泌，已被廣泛應用于十二指腸潰瘍、胃潰瘍和反流性食管炎的治療。

目前，奧美拉唑的分析方法有分光光度法[13]、伏安法[45]、極譜法[67]、液相色譜法[810]、毛細管電泳法[11]和液相色譜質譜法[1213]等?；瘜W發光法具有靈敏度高、線性范圍寬、儀器設備簡單等優點，已被廣泛用于藥物的分析測定[1417]。利用化學發光法測定奧美拉唑的文獻報道僅有1篇，即張淑瓊[18]利用奧美拉唑對硫酸鈰連二亞硫酸鈉化學發光反應體系的增強作用，建立了測定奧美拉唑的化學發光法。該方法測定奧美拉唑的線性范圍為3.0×10-7～3.0×10-5g/mL，檢出限為3×10-7g/mL。

本研究根據將奧美拉唑注入到高錳酸鉀與魯米諾化學發光反應的反應混合液中時，可以產生強的化學發光信號這一發現，結合流動注射技術，優化了實驗條件，建立了利用這一化學發光反應測定奧美拉唑的流動注射化學發光新方法。該方法已被用于奧美拉唑腸溶膠囊中奧美拉唑的含量測定，結果與藥典方法的測定值相一致[19]。

1 實驗材料與方法

1.1 儀器 IFFMD型流動注射化學發光分析儀(西安瑞邁電子科技有限公司)，流路如圖1所示。聚四氟乙烯管(PTFE，0.8mm i.d.)用于連接系統中的所有組件。蠕動泵用來輸送所有溶液，每一管道的流速為2.8mL/min。樣品注射(50mL)借助于六通閥自動完成?；瘜W發光信號用CR105型光電倍增管(北京濱松電子科技有限公司)檢測，數據獲得和處理通過IFFMD化學發光數據處理系統(西安瑞邁電子科技有限公司)完成。CRT970熒光分光光度計(上海分析儀器廠)用來繪制熒光光譜和化學發光光譜。

圖1 流動注射化學發光流路示意圖

Fig.1 Schematic diagram of CL flow system

a：奧美拉唑溶液;b：魯米諾溶液;c：高錳酸鉀溶液;L：混合管;P：蠕動泵;V：注射閥;F：流通池;PMT：光電倍增管;HV：高壓;PC：計算機;W：廢液。

1.2 試劑和溶液 奧美拉唑標準溶液(5.00×10-4g/mL)的配制：準確稱取50.0mg奧美拉唑標準品(中國藥品生物制品檢定所提供)，用少量水溶解后，轉移至100mL棕色容量瓶中，用水定容至標線，搖勻。儲于4℃冰箱中，使用時用水逐級稀釋至所需濃度。

魯米諾儲備液(1.0×10-2mol/L)的配制：準確稱取1.77g魯米諾(陜西師范大學合成)，用1mol/L的氫氧化鈉溶液50mL溶解后，用二次水定容至1L容量瓶中，室溫下放置1周后使用。

高錳酸鉀儲備液(2.0×10-2mol/L)的配制：稱取3.16g高錳酸鉀(西安化學試劑廠)，溶解于1L沸水中，玻璃纖維過濾，室溫下放置2周后使用。

除魯米諾外，其它所用試劑均為分析純，水為二次蒸餾水。

1.3 實驗方法 準確移取一定量的奧美拉唑標準溶液或樣品溶液于50mL容量瓶中，加水至標線，搖勻，作為試液。按照圖1所示流路，管道(a，b和c)分別連接奧美拉唑溶液、魯米諾溶液和高錳酸鉀溶液。魯米諾溶液首先通過Y型混合器與高錳酸鉀溶液在線混合反應。待基線穩定后，50mL奧美拉唑溶液借助于六通閥自動注入到魯米諾溶液與高錳酸鉀溶液的合并流中，產生化學發光信號。以相對化學發光強度對奧美拉唑進行定量。

2 結果與討論

2.1 實驗條件的選擇 以2.0×10-7g/mL奧美拉唑溶液對實驗條件進行優化，優化的實驗參數包括混合管長度、反應介質的堿度、魯米諾和高錳酸鉀的濃度，以及試劑流速。

高錳酸鉀可在堿性溶液中氧化魯米諾產生化學發光。為了降低背景信號，獲得最大的靈敏度，在高錳酸鉀溶液與魯米諾溶液的匯合點與進樣閥之間連接一混合管(0.8mm i.d.)，使高錳酸鉀溶液與魯米諾溶液充分混合并反應?？疾旎旌瞎艿拈L度在20～250cm范圍內對化學發光反應的影響。結果表明，隨著混合管長度的增長，背景信號逐漸降低，但化學發光信號無明顯變化;當混合管長度為150cm時，信噪比有最大值，因此選擇混合管長度為150cm。

高錳酸鉀與魯米諾之間的化學發光反應須在堿性條件下進行。在反應中，反應介質的堿度通過改變魯米諾溶液中氫氧化鈉的濃度加以調節?？疾炝藲溲趸c濃度在0.01～0.20mol/L范圍內對化學發光反應的影響。如圖2所示，相對化學發光強度隨著氫氧化鈉濃度的增大而增大;當氫氧化鈉濃度為0.15mol/L時，相對化學發光強度值達到最大;當氫氧化鈉濃度高于0.15mol/L時，相對化學發光強度逐漸降低。因此，選擇0.15mol/L的氫氧化鈉。

觀察魯米諾濃度在1.0×10-5～1.0×10-4mol/L范圍內對化學發光反應的影響，結果見圖3。當魯米諾濃度在1.0×10-5～7.0×10-5mol/L范圍內，相對化學發光強度隨著魯米諾濃度的增大而增大;當魯米諾濃度高于7.0×10-5mol/L時，相對化學發光強度隨著魯米諾濃度的增大而降低。因此，選擇魯米諾的濃度為7.0×10-5mol/L。

圖3 魯米諾濃度對相對化學發光強度的影響

Fig.3 Effect of luminol concentration on the relative CL intensity

實驗條件：2.0×10-7g/mL奧美拉唑，0.15mol/L NaOH，2.0×10-5mol/L KMnO4，混合管長度150cm，試劑流速2.8mL/min。

對高錳酸鉀濃度在5.0×10-6～6.0×10-5mol/L范圍內對化學發光反應的影響進行考察。結果顯示(圖4)，當高錳酸鉀濃度為2.0×10-5mol/L時，反應有最大的相對化學發光強度;高于或低于2.0×10-5mol/L高錳酸鉀均導致相對化學發光強度的降低。因此，選擇高錳酸鉀的濃度為2.0×10-5mol/L。

圖4 高錳酸鉀濃度對相對化學發光強度的影響

Fig.4 Effect of luminol concentration on the relative CL intensity

實驗條件：2.0×10-7g/mL奧美拉唑，0.15mol/L NaOH，7.0×10-5mol/L魯米諾，混合管長度150cm，試劑流速2.8mL/min。

試劑流速影響化學發光反應的發光強度。對試劑流速在2.1～3.5mL/min范圍內對化學發光反應的影響進行了考察(圖5)。結果表明，當試劑流速低于2.8mL/min時，相對化學發光強度隨著試劑流速的增大而增大;當試劑流速高于2.8mL/min時，相對化學發光強度隨著試劑流速的增大而減小。本文選擇的流速為2.8mL/min。

2.2 分析特性 在選定的實驗條件下，奧美拉唑濃度在2.0×10-8～1.0×10-5g/mL范圍內與相對化學發光強度具有線性關系。為了提高測定的準確度，校準曲線按數量級分段繪制，校準曲線的基本參數見表1。對相關系數進行t檢驗，結果表明，在99%置信水平上，該校準曲線具有很好的線性關系。

圖5 試劑流速對相對化學發光強度的影響

Fig.5 Effect of flow rate on the relative CL intensity

實驗條件：2.0×10-7g/mL奧美拉唑;0.15mol/L NaOH;7.0×10-5mol/L魯米諾;2.0×10-5mol/L KMnO4，混合管長度150cm。表1 校準曲線的線性范圍及回歸方程

對濃度為1.0×10-7g/mL和1.0×10-6g/mL奧美拉唑溶液進行11次平行測定的相對標準偏差分別為1.0%和2.6%;按照IUPAC建議，計算出方法的檢出限為3×10-9g/mL。

2.3 干擾研究 在選定的實驗條件下，對濃度為5.0×10-7g/mL奧美拉唑溶液進行了干擾試驗。結果表明，在保持相對測量誤差在±5%范圍內，1000倍的NO3-、SO42-、Cl-、C2O42-、脲;100倍的Ca2+、Zn2+、CO32-、PO43-、淀粉;50倍的乳糖、葡萄糖;2倍的Mg2+以及同倍的Al3+、Pb2+對測定無干擾。

2.4 樣品分析 取市售不同廠家的奧美拉唑腸溶膠囊各10粒(標示量：25mg/粒)，準確稱量后，研細，混勻，從中稱取適量粉末，加水溶解后，轉入50mL容量瓶中，加水定容，搖勻，作為樣品溶液。準確移取適量樣品溶液經適當稀釋后，按照實驗方法進行化學發光強度測定，計算膠囊中奧美拉唑的含量，并與藥典方法[19]進行對照，結果見表2。t檢驗表明，兩種方法的測定結果在95%置信水平上無顯著性差異。表2 奧美拉唑腸溶膠囊中奧美拉唑含量測定

2.5 可能的化學發光反應機理 為了探討可能的化學發光反應機理，我們進行了如下的實驗：

在改裝的CRT970熒光分光光度計上分別繪制了高錳酸鉀魯米諾反應和高錳酸鉀魯米諾奧美拉唑反應的化學發光光譜。結果表明，兩個反應的化學發光光譜具有相同的最大發射波長，均位于425nm處。這一最大發射波長與文獻報道的魯米諾的氧化產物——3氨基鄰苯二甲酸根離子(3AP)[20]的最大發射波長相一致。這表明高錳酸鉀魯米諾奧美拉唑化學發光反應的發光體仍為激發態的3氨基鄰苯二甲酸根離子[21]。

將堿性魯米諾溶液加入高錳酸鉀溶液中，高錳酸鉀溶液的紫紅色很快變淡，最后，溶液呈淡綠色(錳酸根離子的顏色)。這說明，在高錳酸鉀與魯米諾的反應中，高錳酸鉀被還原為錳酸鉀[22]，魯米諾被氧化為3氨基鄰苯二甲酸根離子[20]。

在CRT970熒光分光光度計上分別繪制了奧美拉唑溶液、高錳酸鉀奧美拉唑堿性反應液、魯米諾高錳酸鉀堿性反應液、魯米諾高錳酸鉀奧美拉唑堿性反應液的熒光光譜。奧美拉唑溶液的激發波長和發射波長分別位于310～380nm(λex=341nm)和380～550nm(λem=471nm)。當向奧美拉唑溶液中加入高錳酸鉀溶液后，其激發光譜和發射光譜的形狀和最大激發波長的位置沒有改變，但熒光強度顯著降低。魯米諾高錳酸鉀堿性反應液和魯米諾高錳酸鉀奧美拉唑堿性反應液具有相同的激發光譜和熒光光譜，激發波長和發射波長分別位于240～400nm(λex=314nm)和370～550nm(λem=425nm)，這與文獻報道的3氨基鄰苯二甲酸根離子激發和發射光譜相一致[20]。另外，可以看出，奧美拉唑溶液的激發波長范圍與魯米諾高錳酸鉀堿性反應液和魯米諾高錳酸鉀奧美拉唑堿性反應液的激發波長范圍有很大重疊。因此我們推斷，高錳酸鉀與奧美拉唑反應釋放的能量有可能被3氨基鄰苯二甲酸根離子吸收形成激發態的3氨基鄰苯二甲酸根離子。

基于以上討論，我們建議魯米諾高錳酸鉀奧美拉唑化學發光反應的機理可能為：高錳酸鉀與奧美拉唑反應，釋放出能量，該能量被3氨基鄰苯二甲酸根離子吸收而產生激發態的3氨基鄰苯二甲酸根離子，當它回到基態時，產生化學發光。該化學發光反應機理可表示為：

魯米諾+高錳酸鉀→3氨基鄰苯二甲酸根離子+錳酸鉀+hν(425nm)

高錳酸鉀+奧美拉唑→奧美拉唑的氧化產物+錳酸鉀+能量

3氨基鄰苯二甲酸根離子+能量→激發態的3氨基鄰苯二甲酸根離子

激發態的3氨基鄰苯二甲酸根離子→3氨基鄰苯二甲酸根離子+hν(425nm)

3 結 論

本研究發現奧美拉唑在魯米諾高錳酸鉀體系中的后化學發光反應。在對化學發光光譜、熒光光譜及有關實驗的基礎上，提出了可能的化學發光反應機理，優化了實驗條件，建立了測定奧美拉唑的高靈敏流動注射化學發光分析法。建立的方法被成功用于藥物制劑中奧美拉唑的含量測定。