【摘要】 目的 探討老年前列腺癌(PCa)患者手術(shù)前后外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(TrCs)比例的變化和臨床意義。方法 采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測14例老年P(guān)Ca患者治療前后和9例健康對照組外周血中T細(xì)胞亞群和CD4+CD25+ TrCs的比例，觀察其變化情況。結(jié)果 老年P(guān)Ca患者術(shù)前CD3、CD8較健康對照者降低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);手術(shù)前后CD4均明顯低于健康對照組，術(shù)前CD4+CD25+TrCs顯著高于健康對照組和術(shù)后水平(P<0.05)，術(shù)后水平與健康對照組無明顯差異(P>0.05);老年P(guān)Ca病理級別越高，外周血CD4+CD25+TrCs的比例越高，G3～4級者的外周血CD4+CD25+TrCs的比例顯著高于中低級別PCa患者(P<0.05);術(shù)后CD4+CD25+TrCs降低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 老年P(guān)Ca患者存在免疫功能失調(diào)和免疫抑制的情況;外周血CD4+CD25+TrCs比例的增加與PCa的病理分級有一定關(guān)系。

【關(guān)鍵詞】 PCa癌;CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞;流式細(xì)胞術(shù)

有研究表明CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cells，TrCs)比例增高是腫瘤免疫抑制導(dǎo)致多種實體腫瘤進(jìn)展和化療耐受的重要原因之一〔1〕。本研究采用流式細(xì)胞術(shù)檢測手術(shù)治療前后老年前列腺癌(PCa)患者外周血T細(xì)胞，并與健康對照者比較，探討免疫治療在老年P(guān)Ca綜合治療中的價值。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選擇2007年6月至2008年6月在我院泌尿外科住院的初治無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的老年P(guān)Ca患者14例(PCa組)，年齡59～91歲，平均(61.2±4.4)歲。全部病例均行PCa根治術(shù)，術(shù)后病理均證實為腺癌。健康對照組9例，年齡59～78歲，平均(61.9±3.2)歲，所有研究對象采血前3個月及治療中均未使用過免疫制劑。

1.2 方法 老年P(guān)Ca組手術(shù)前后和健康對照組均于晨起空腹抽取外周靜脈血10 ml，EDTA抗凝。應(yīng)用BeckmanCoulter EPICS XL型流式細(xì)胞儀(美國Coulter公司產(chǎn)品)檢測外周血單個核細(xì)胞膜表面CD3、CD4、CD8和CD4+CD25+TrCs數(shù)量。

1.3 主要試劑 CD3Cy5單克隆抗體、CD8FITC/CD28RPE單克隆抗體、CD4FITC/CD25RPE/CD3Cy5單克隆抗體、CD3FITC/CD16+56RPE/CD45Cy5單克隆抗體均為美國BD公司產(chǎn)品。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件，計量數(shù)據(jù)以x±s表示，采用多個樣本均數(shù)比較的單因素進(jìn)行方差分析(one wayANOVA)和StudentNewmanKeuls(SNKq)檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 老年P(guān)Ca組手術(shù)前后外周血TrCs變化 與健康對照組比較，PCa組術(shù)前CD3、CD8較健康對照組降低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);手術(shù)前后CD4均明顯低于健康對照組，術(shù)前CD4+CD25+TrCs顯著高于術(shù)后水平和健康對照組(P<0.05)，術(shù)后水平與健康對照組無明顯差異(P>0.05)。見表1。表1 老年P(guān)Ca患者手術(shù)前后外周血TrCs變化比較與健康對照組比較：1)P<0.05;與術(shù)后比較：2)P<0.05

2.2 腫瘤分化程度與TrCs的關(guān)系 老年P(guān)Ca病理級別越高，外周血CD4+CD25+TrCs的比例越高，G3～4級者外周血CD4+CD25+TrCs的比例顯著高于中低級別老年P(guān)Ca患者(P<0.05)，術(shù)后雖有降低，但無顯著差異(P>0.05)。見表2。表2 PCa分化程度與TrCs的關(guān)系與G3～4級比較：1)P<0.05;與術(shù)前比較：2)P<0.05

3 討 論

CD4+CD25+TrCs是調(diào)節(jié)免疫功能的一個T細(xì)胞亞群，在維持機體免疫自穩(wěn)、調(diào)控免疫應(yīng)答方面起重要作用，主要參與抑制自身免疫性疾病的發(fā)生和腫瘤的免疫調(diào)節(jié)。腫瘤環(huán)境中CD4+CD25+TrCs比例增加可導(dǎo)致腫瘤免疫失調(diào)，去除這細(xì)胞群可以有效誘導(dǎo)腫瘤免疫。CD4+CD25+TrCs的免疫抑制機制目前尚不完全清楚。有學(xué)者體外實驗數(shù)據(jù)表明在培養(yǎng)基中添加IL2、抗CD28抗體或脂多糖，TrCs會發(fā)生增殖〔2，3〕。癌癥患者中許多由自體同源T細(xì)胞識別的腫瘤相關(guān)抗原已被證實是正常的自體成分，而不是突變基因的異常產(chǎn)物，表明腫瘤免疫在一定程度上也是一種自身免疫〔4〕。已有的實驗證據(jù)表明，CD4+CD25+TrCs可以從多方面抑制自然免疫和適應(yīng)性免疫，包括：①TrCs以接觸依賴、抗原非特異的方式抑制CD4+和CD8+T細(xì)胞的增殖及分泌IL2;②通過下調(diào)MHCⅡ類分子、CD80、CD86在樹突細(xì)胞的表達(dá)而影響抗原遞呈;③阻礙高親和力識別腫瘤的效應(yīng)T細(xì)胞庫的增殖以抑制腫瘤免疫;④抑制效應(yīng)細(xì)胞進(jìn)入腫瘤部位，體內(nèi)實驗表明，CD4+CD25+TrCs可抑制CD8+T細(xì)胞浸潤進(jìn)入腫瘤部位;⑤通過抑制CD8+T細(xì)胞、NK細(xì)胞和NKT細(xì)胞的細(xì)胞殺傷作用抑制腫瘤免疫〔5，6〕。最近研究顯示在腫瘤發(fā)展過程中，CD4+CD25+TrCs和抗腫瘤效應(yīng)性CD4+T細(xì)胞來源于相同的腫瘤引流淋巴結(jié)，前者通過抑制后者的活性而阻斷腫瘤免疫反應(yīng)。

本研究顯示，老年P(guān)Ca患者術(shù)前外周血T細(xì)胞比例失衡，CD4比例降低，CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例增加，與健康對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)顯著意義，提示老年P(guān)Ca患者存在免疫功能失調(diào)和不同程度的免疫抑制。患者術(shù)后CD4+CD25+TrCs比例比術(shù)前顯著降低，提示腫瘤負(fù)荷的減輕有助于改善患者的免疫抑制狀態(tài)。在人類健康個體的外周循環(huán)血中CD4+CD25+TrCs占總CD4+T細(xì)胞的5%～10%，而在乳腺癌、胰腺癌等腫瘤患者的外周血中，這種TrCs高達(dá)13.2%～16.6%，而且腫瘤惡性程度越高，CD4+CD25+TrCs比例越高，其預(yù)后也越差〔7〕。有研究報道肺癌患者外周血中CD4+CD25+TrCs的數(shù)量與病理類型無明顯相關(guān)關(guān)系，但與肺癌分化程度和臨床分期關(guān)系密切〔8〕。本研究表明，無論術(shù)前還是術(shù)后G3～4級患者外周血TrCs比例均高于G1～2級患者，提示外周血CD4+CD25+TrCs比例的增加與PCa的病理分級有一定關(guān)系。為了尋找更多的有力證據(jù)，可以進(jìn)行大樣本的進(jìn)一步研究。各病理級別在術(shù)后CD4+CD25+TrCs都有所降低，但G3～4級與術(shù)前比較無統(tǒng)計學(xué)差異，考慮與納入本研究的病例數(shù)較少有關(guān)。另外，延長觀察時間或進(jìn)行動態(tài)性觀察，對了解老年P(guān)Ca患者術(shù)后CD4+CD25+TrCs的變化規(guī)律和掌握機體的免疫狀態(tài)可能有幫助。