【摘要】 目的 探討老年前列腺癌(PCa)患者手術前后外周血調節性T細胞(TrCs)比例的變化和臨床意義。方法 采用流式細胞技術檢測14例老年PCa患者治療前后和9例健康對照組外周血中T細胞亞群和CD4+CD25+ TrCs的比例，觀察其變化情況。結果 老年PCa患者術前CD3、CD8較健康對照者降低，但差異無統計學意義(P>0.05);手術前后CD4均明顯低于健康對照組，術前CD4+CD25+TrCs顯著高于健康對照組和術后水平(P<0.05)，術后水平與健康對照組無明顯差異(P>0.05);老年PCa病理級別越高，外周血CD4+CD25+TrCs的比例越高，G3～4級者的外周血CD4+CD25+TrCs的比例顯著高于中低級別PCa患者(P<0.05);術后CD4+CD25+TrCs降低，但差異無統計學意義(P>0.05)。結論 老年PCa患者存在免疫功能失調和免疫抑制的情況;外周血CD4+CD25+TrCs比例的增加與PCa的病理分級有一定關系。

【關鍵詞】 PCa癌;CD4+CD25+調節性T細胞;流式細胞術

有研究表明CD4+CD25+調節性T細胞(regulatory T cells，TrCs)比例增高是腫瘤免疫抑制導致多種實體腫瘤進展和化療耐受的重要原因之一〔1〕。本研究采用流式細胞術檢測手術治療前后老年前列腺癌(PCa)患者外周血T細胞，并與健康對照者比較，探討免疫治療在老年PCa綜合治療中的價值。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選擇2007年6月至2008年6月在我院泌尿外科住院的初治無遠處轉移的老年PCa患者14例(PCa組)，年齡59～91歲，平均(61.2±4.4)歲。全部病例均行PCa根治術，術后病理均證實為腺癌。健康對照組9例，年齡59～78歲，平均(61.9±3.2)歲，所有研究對象采血前3個月及治療中均未使用過免疫制劑。

1.2 方法 老年PCa組手術前后和健康對照組均于晨起空腹抽取外周靜脈血10 ml，EDTA抗凝。應用BeckmanCoulter EPICS XL型流式細胞儀(美國Coulter公司產品)檢測外周血單個核細胞膜表面CD3、CD4、CD8和CD4+CD25+TrCs數量。

1.3 主要試劑 CD3Cy5單克隆抗體、CD8FITC/CD28RPE單克隆抗體、CD4FITC/CD25RPE/CD3Cy5單克隆抗體、CD3FITC/CD16+56RPE/CD45Cy5單克隆抗體均為美國BD公司產品。

1.4 統計學方法 采用SPSS13.0統計軟件，計量數據以x±s表示，采用多個樣本均數比較的單因素進行方差分析(one wayANOVA)和StudentNewmanKeuls(SNKq)檢驗。

2 結 果

2.1 老年PCa組手術前后外周血TrCs變化 與健康對照組比較，PCa組術前CD3、CD8較健康對照組降低，但差異無統計學意義(P>0.05);手術前后CD4均明顯低于健康對照組，術前CD4+CD25+TrCs顯著高于術后水平和健康對照組(P<0.05)，術后水平與健康對照組無明顯差異(P>0.05)。見表1。表1 老年PCa患者手術前后外周血TrCs變化比較與健康對照組比較：1)P<0.05;與術后比較：2)P<0.05

2.2 腫瘤分化程度與TrCs的關系 老年PCa病理級別越高，外周血CD4+CD25+TrCs的比例越高，G3～4級者外周血CD4+CD25+TrCs的比例顯著高于中低級別老年PCa患者(P<0.05)，術后雖有降低，但無顯著差異(P>0.05)。見表2。表2 PCa分化程度與TrCs的關系與G3～4級比較：1)P<0.05;與術前比較：2)P<0.05

3 討 論

CD4+CD25+TrCs是調節免疫功能的一個T細胞亞群，在維持機體免疫自穩、調控免疫應答方面起重要作用，主要參與抑制自身免疫性疾病的發生和腫瘤的免疫調節。腫瘤環境中CD4+CD25+TrCs比例增加可導致腫瘤免疫失調，去除這細胞群可以有效誘導腫瘤免疫。CD4+CD25+TrCs的免疫抑制機制目前尚不完全清楚。有學者體外實驗數據表明在培養基中添加IL2、抗CD28抗體或脂多糖，TrCs會發生增殖〔2，3〕。癌癥患者中許多由自體同源T細胞識別的腫瘤相關抗原已被證實是正常的自體成分，而不是突變基因的異常產物，表明腫瘤免疫在一定程度上也是一種自身免疫〔4〕。已有的實驗證據表明，CD4+CD25+TrCs可以從多方面抑制自然免疫和適應性免疫，包括：①TrCs以接觸依賴、抗原非特異的方式抑制CD4+和CD8+T細胞的增殖及分泌IL2;②通過下調MHCⅡ類分子、CD80、CD86在樹突細胞的表達而影響抗原遞呈;③阻礙高親和力識別腫瘤的效應T細胞庫的增殖以抑制腫瘤免疫;④抑制效應細胞進入腫瘤部位，體內實驗表明，CD4+CD25+TrCs可抑制CD8+T細胞浸潤進入腫瘤部位;⑤通過抑制CD8+T細胞、NK細胞和NKT細胞的細胞殺傷作用抑制腫瘤免疫〔5，6〕。最近研究顯示在腫瘤發展過程中，CD4+CD25+TrCs和抗腫瘤效應性CD4+T細胞來源于相同的腫瘤引流淋巴結，前者通過抑制后者的活性而阻斷腫瘤免疫反應。

本研究顯示，老年PCa患者術前外周血T細胞比例失衡，CD4比例降低，CD4+CD25+調節性T細胞比例增加，與健康對照組比較差異有統計學顯著意義，提示老年PCa患者存在免疫功能失調和不同程度的免疫抑制。患者術后CD4+CD25+TrCs比例比術前顯著降低，提示腫瘤負荷的減輕有助于改善患者的免疫抑制狀態。在人類健康個體的外周循環血中CD4+CD25+TrCs占總CD4+T細胞的5%～10%，而在乳腺癌、胰腺癌等腫瘤患者的外周血中，這種TrCs高達13.2%～16.6%，而且腫瘤惡性程度越高，CD4+CD25+TrCs比例越高，其預后也越差〔7〕。有研究報道肺癌患者外周血中CD4+CD25+TrCs的數量與病理類型無明顯相關關系，但與肺癌分化程度和臨床分期關系密切〔8〕。本研究表明，無論術前還是術后G3～4級患者外周血TrCs比例均高于G1～2級患者，提示外周血CD4+CD25+TrCs比例的增加與PCa的病理分級有一定關系。為了尋找更多的有力證據，可以進行大樣本的進一步研究。各病理級別在術后CD4+CD25+TrCs都有所降低，但G3～4級與術前比較無統計學差異，考慮與納入本研究的病例數較少有關。另外，延長觀察時間或進行動態性觀察，對了解老年PCa患者術后CD4+CD25+TrCs的變化規律和掌握機體的免疫狀態可能有幫助。