作者：柳維軍，陽云平，徐志強(qiáng)

【摘要】 目的 探討TopoⅡ及Ki-67在食管鱗癌的表達(dá)及其與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法 應(yīng)用免疫組化檢測75例食管鱗癌組織中TopoⅡ和Ki-67的表達(dá)情況。結(jié)果 TopoⅡ和ki-67的表達(dá)與食管鱗癌的組織分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有密切關(guān)系（P＜0.05），并且TopoⅡ和ki-67陽性表達(dá)具有較強(qiáng)的一致性。結(jié)論 檢測TopoⅡ和ki-67的表達(dá)可作為判斷食管鱗癌預(yù)后的重要指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】 食管鱗癌；TopoⅡ； ki-67； 免疫組化

ABSTRACT Objective To discuss the expression of Topo II and Ki-67 in esophageal sqauamous cell carcinoma and their relationship with the histodifferentiation grades and lymph node metastasis. Methods Immunohistochemistry was applied to study the expression.Results Topo II and Ki-67 were closely related to the histodifferentiation grades and lymph node metastasis of esophageal squamous cell carcinoma， and there existed a great consistence between the positive expression of Topo II and Ki-67.Conclusions The expression of Topo II and Ki-67 can be used as the important index in judging the prognosis of esophageal squamous cell carcinoma.

KEYWORDS esophageal squamous cell carcinoma Topo II Ki-67 immunohistochemistry

DNA拓普異構(gòu)酶(TopoⅡ)是一種核內(nèi)酶，是DNA復(fù)制時必需的酶，也是某些抗腫瘤藥物的“靶分子”，抗腫瘤藥物通過與其結(jié)合而行使抗腫瘤作用。當(dāng)基因突變時，此酶的轉(zhuǎn)錄水平或活性下降，抗癌藥物不能與其結(jié)合而產(chǎn)生耐藥，使抗腫瘤藥物不能發(fā)揮抗癌活性而耐藥。細(xì)胞增殖和凋亡在腫瘤發(fā)生時起著相當(dāng)重要的作用。因此，了解腫瘤增殖動力學(xué)參數(shù)，可以監(jiān)測病變的進(jìn)展、指導(dǎo)臨床治療并對預(yù)后進(jìn)行判斷。Ki-67是一種與細(xì)胞增殖有關(guān)的核抗原，它的陽性率與腫瘤的惡性程度、分級，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移也呈正相關(guān)［1］。但在食管鱗癌中的表達(dá)報道較少，我們應(yīng)用免疫組化檢測75例食管鱗癌TopoⅡ及Ki-67的表達(dá)情況，并觀察其與腫瘤分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

收集儀隴縣人民醫(yī)院2002年至2007年7月已確診的食管鱗癌75例，其中高分化26例，中分化21例，低分化28例；59例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

1.2 方法

選擇原病例蠟塊（10%中性福爾馬林液固定），4um厚連續(xù)切片3張，分別HE染色，TopoⅡ、Ki-67免疫組織化學(xué)染色（Emision Systen二步法），抗原修復(fù)液采用高PH值9.0修復(fù)液，試劑盒購自成都基因公司。

1.3 結(jié)果判定

每張切片選擇典型部位2～3個視野觀察，記數(shù)500個腫瘤細(xì)胞中TopoⅡ、Ki-67核表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)。判斷標(biāo)準(zhǔn)如下：TopoⅡⅠ級為陰性（＜25%），Ⅱ～Ⅳ級為陽性（25～50%為Ⅱ級，50～75%為Ⅲ級，＞75％為Ⅳ級）。Ki-67＞５％陽性（其中5～25％為＋，25～50％為＋＋，50～75為＋＋＋，＞75％為＋＋＋＋）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

SPSS11.12軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、kappa檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 TopoⅡ的表達(dá)與生物學(xué)特征的關(guān)系見表1。表1 TopoⅡ的表達(dá)與食管鱗癌分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系（略） 從表1可知：TopoⅡ陽性表達(dá)率在高分化組明顯低于中、低分化組（P＜0.05)；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移低于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P＜0.05)。一般腫瘤分化愈低，TopoⅡ陽性表達(dá)率愈高（見圖1、2）。TopoⅡ陽性表達(dá)率在腫瘤原發(fā)灶與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中基本相近。

2.2 Ki-67的表達(dá)與生物學(xué)特征的關(guān)系見表2。表２ ki-67的表達(dá)與腫瘤分化程度及轉(zhuǎn)移的關(guān)系（略）

ki-67陽性表達(dá)指數(shù)與腫瘤分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有密切關(guān)系，一般地腫瘤分化愈低，陽性表達(dá)指數(shù)愈高（P＜0.05）（見圖3、4）。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者陽性表達(dá)指數(shù)較強(qiáng)（P＜0.05），且在腫瘤原發(fā)灶與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中其表達(dá)指數(shù)基本相近。

2.3 TopoⅡ與Ki-67在食管鱗癌組織中表達(dá)的關(guān)系：見表3。表3 TopoⅡ的表達(dá)與Ki-67的表達(dá)間的關(guān)系（略）

從表3可知，ki-67的表達(dá)與TopoⅡ的表達(dá)，具有較強(qiáng)的一致性（kappa=0.535，P＜0.05）。

3 討 論

3.1 TopoⅡ是DNA復(fù)制時必需的酶，也是某些抗腫瘤藥物的靶分子，抗腫瘤藥物只有通過與其結(jié)合才能行使抗腫瘤作用，TopoⅡ活性的下降是腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥的機(jī)制之一。因此檢查TopoⅡ在腫瘤中的表達(dá)情況有利于我們對腫瘤的化療提供正確化療方案，提高患者的生存率。通過對75例食管鱗癌TopoⅡ的表達(dá)情況的分析，TopoⅡ的陽性表達(dá)率分別是高分化鱗癌23.08%，中分化90.05%，低分化組高達(dá)96.4%，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組79.66%，無淋巴結(jié)組31.25%，經(jīng)統(tǒng)計分析，TopoⅡ的陽性表達(dá)率與腫瘤分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況均有非常密切的關(guān)系，與文獻(xiàn)報道其它類型惡性腫瘤基本相似［２，３］。

3.2 Ki-67是一種能識別存在于增殖細(xì)胞核基質(zhì)內(nèi)與細(xì)胞增殖相關(guān)的核蛋白，其表達(dá)根據(jù)細(xì)胞周期而異。有報道， Ki-67在不同臨床分期惡性腫瘤之間的表達(dá)差異性顯著，轉(zhuǎn)移病例指數(shù)顯著高于無轉(zhuǎn)移病例［4，5］。通過對75例食管鱗癌Ki-67的表達(dá)進(jìn)行觀察（見表2），經(jīng)統(tǒng)計分析，Ki-67表達(dá)特點(diǎn)為高分化鱗癌表達(dá)指數(shù)較低，中、低分化鱗癌表達(dá)指數(shù)較高，且腫瘤分化越低，表達(dá)指數(shù)越高。Ki-67陽性表達(dá)指數(shù)也與食管鱗癌的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例中表達(dá)指數(shù)偏高，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例中表達(dá)指數(shù)較低，與文獻(xiàn)報道基本相近，因此認(rèn)為Ki-67是判斷腫瘤預(yù)后的較好指標(biāo)之一。

3．3 由于TopoⅡ常作為腫瘤耐藥檢查的指標(biāo)，Ki-67常作為判斷腫瘤預(yù)后的指標(biāo)。研究中發(fā)現(xiàn)，TopoⅡ在對食管鱗癌陽性表達(dá)的同時，Ki-67也基本陽性表達(dá)（見表3），并且陽性表達(dá)細(xì)胞的部位與TopoⅡ基本相近，具有較強(qiáng)的一致性。通過分析對比， TopoⅡ除了能作為耐藥基因檢查的指標(biāo)，也可與Ki-67一樣可作為腫瘤預(yù)后判斷的指標(biāo)之一。